ROS/PI3K/Akt信号通路相关蛋白在胃癌组织中的表达及临床病理意义

分析在胃癌组织中活性氧/磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B(ROS/PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的表达水平及其临床病理意义。方法 选取2019年2月~2021年3月在涉县医院住院且接受手术切除治疗原发性胃癌的患者68例,取入组患者术中切除的癌组织及距离癌缘2cm左右的癌旁组织,免疫荧光法检测标本中ROS表达,ICH法检测标本中PI3K、Akt表达,并研究ROS、PI3K、Akt表达与患者病理状态的相关性。结果 胃癌组织中ROS、ROS、PI3K、Akt表达水平均显著高于胃癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中PI3K、Akt表达水平在不同TNM分期、不同的分化等级及淋巴结转移数目存在明显差异的患者中存在显著差异(P<0.05)。结论 胃癌组织中PI3K、Akt表达水平与癌症分期、恶化程度存在一定的关系,提示ROS/PI3K/Akt信号通路参与胃癌的发生及发展,可为该疾病的研究与治疗提供新的靶点和方向。

S1P/S1PR1信号通路通过调控ROS/NLRP3对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响

目的探究S1P/S1PR1信号通路对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其可能的作用机制。方法采用不同浓度葡萄糖处理细胞,ELISA法检测细胞内S1P表达,Western blot检测S1PR1蛋白表达;将细胞分为正常对照组、HG组及HG+siS1PR1组,RT-PCR检测细胞E-cadherin、Vimentin、Fibronectin及Twist mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、α-SMA、Vimentin、NLRP3、ASC及NF-κB蛋白表达,流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;将细胞分为正常对照组、S1P组及S1P+siS1PR1组,Western blot检测Vimentin、Snail、α-SMA、NLRP3、ASC及NF-κB蛋白表达,荧光显微镜测定ROS水平。结果ELISA结果显示,高糖刺激下细胞内S1P含量明显升高。Western blot结果显示,30 mmol·L^(-1)浓度时S1PR1蛋白表达量与对照组相比明显升高;阻断S1PR1后可以抑制高糖诱导的Fibronectin、Vimentin及Twist mRNA表达,上调E-cadherin mRNA的表达,Western blot结果显示,E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin,α-SMA蛋白表达下降,同时可抑制细胞内ROS的产生和NLRP3,ASC,NF-κB蛋白水平;加入S1P激活剂后细胞内ROS水平,Vimentin、α-SMA、Snail、NLRP3、ASC及NF-κB蛋白水平表达均升高,阻断S1PR1后表达均降低。结论高糖能诱导肾小管上皮细胞EMT,其机制可能与S1P/S1PR1信号通路作用于ROS/NLRP3轴有关。

基于NF-κB/STAT3信号通路探讨甘草查尔酮A对HaCaT细胞炎症反应的影响

目的探讨甘草查尔酮A对TNF-α和IFN-γ联合诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)炎症因子分泌的影响及其抗炎机制。方法CCK8法筛选甘草查尔酮A作用质量浓度。将细胞分为正常组、模型组(10 ng/mL TNF-α和10 ng/mL IFN-γ)和甘草查尔酮A组(5、10μg/mL)。CCK8法检测细胞活性,ELISA法和RT-qPCR法检测炎症因子及相关趋化因子的分泌和mRNA表达,Western blot法检测TNF-α、IL-6、NF-κB p65、p-NF-κB p65、STAT3、p-STAT3、JAK1、p-JAK1蛋白表达,DCFH-DA荧光探针法、流式细胞术分别检测细胞活性氧(ROS)水平和细胞凋亡情况。结果甘草查尔酮A质量浓度在10μg/mL及以下时对HaCaT细胞活性无显著影响(P>0.05),且在5、10μg/mL时对HaCaT细胞炎性损伤具有保护作用(P<0.01)。与模型组比较,甘草查尔酮A可降低TNF-α、IL-6、IL-1β水平,TNF-α、IL-6、IL-1β、RANTES、TARC、MDC mRNA表达,TNF-α、IL-6、p-NF-κB p65、p-STAT3和p-JAK1蛋白表达,ROS水平和凋亡率(P<0.01)。结论甘草查尔酮A能够减轻TNF-α和IFN-γ诱导的HaCaT细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB/STAT3信号通路活化,进而抑制相关炎症因子表达和ROS水平有关。

苏萸痛风方通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路抗痛风性关节炎的作用机制

目的 研究苏萸痛风方抗痛风性关节炎的作用机制。方法 将雄性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱片组(阳性对照药,0.3 mg/kg)和苏萸痛风方高、中、低剂量组(5、2.5、1.25 g/kg),每组10只。给药组大鼠每日灌胃相应药物1次(10 mL/kg),连续给药7 d。正常对照组和模型组大鼠同法灌胃等体积水。第6天给药后1 h,除正常对照组外,其余各组大鼠于关节腔注入尿酸钠复制痛风性关节炎模型。检测大鼠造模后2、6、24 h的关节肿胀度和炎症指数评分。末次给药后1 h,检测大鼠血清中氧化应激相关指标[超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)]活性及炎症因子[白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平,观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,检测大鼠踝关节组织中硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达水平。结果 经苏萸痛风方干预后,大鼠关节肿胀度减轻、炎症指数评分降低、滑膜组织水肿改善、炎症细胞数量减少。苏萸痛风方高剂量组大鼠血清中SOD活性显著升高(P<0.01),XOD、MDA活性以及IL-1β、IL-18、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),踝关节组织中ROS水平和TXNIP、NLRP3、ASC蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。苏萸痛风方中、低剂量组上述部分指标活性/水平也发生显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论 苏萸痛风方可通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制NLRP3炎性小体激活,进而发挥抗痛风性关节炎的作用。

绿原酸通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究绿原酸对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响及活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)信号通路在其中的作用。方法:建立脓毒症小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照(地塞米松)组及低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)绿原酸组,每组各12只,另取12只正常小鼠作为对照组。计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;HE染色观察肺组织病理改变;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;ELISA法测定肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,相应试剂盒检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平;Westernblot法检测TXNIP、NLRP3蛋白、caspase-1及细胞焦亡关键蛋白GasderminD的N末端片段(GSDMD-N)的表达水平。结果:相较于对照组,模型组肺泡间隔增厚,肺泡内及肺泡间质水肿,炎症细胞数量显著增加,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平均显著升高(P<0.05);而模型组SOD水平较对照组显著降低(P<0.05)。相较于模型组,绿原酸低、中、高剂量组肺泡间隔增厚及水肿情况有所减轻,炎症细胞数量显著减少,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平显著降低(P<0.05);而模型组SOD水平较对照组显著升高(P<0.05);绿原酸高剂量组与阳性对照组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:绿原酸可能通过下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路表达水平,抑制炎症分子产生及细胞焦亡发生,有效减轻脓毒症小鼠肺损伤。

RNAi NRP-1基因对骨肉瘤细胞凋亡、ROS含量及STAT3信号通路的影响

目的:探讨RNAi神经纤毛蛋白1(NRP1)基因对骨肉瘤细胞凋亡、ROS含量及STAT3信号通路的影响。方法:分别将合成的NRP-1的siRNA(NRP-1-siRNA组)及无干扰作用的siRNA(NC组)转染人骨肉瘤MG-63细胞,并设置空白对照组,Western blotting检测转染48 h的细胞中NRP-1和磷酸化的STAT3(p-STAT3)及STAT3信号通路靶基因Cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达;CCK8法分别于转染的24、48 h和72 h检测细胞活力;流式细胞术分别检测细胞凋亡率及ROS含量。结果:与空白对照组比较,NRP-1-siRNA组NRP-1、Cyclin D1、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,转染24、48、72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS含量显著升高(P<0.05)。结论:RNAi抑制NRP-1基因表达可降低骨肉瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能与提高细胞内ROS含量和下调STAT3信号通路有关。

EGFR抑制剂AG1478联合奥沙利铂抑制PI3K/AKT通路促进H1975细胞自噬的作用机制

目的探究奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)联合表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂AG1478对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)H1975细胞自噬的作用。方法采用梯度浓度的AG1478(0、5、10、15、20、25、30、35、40μmol·L^(-1))和OXA(0、25、50、75、88、100、112、125、150μmol·L^(-1))体外培养H1975细胞,MTT法检测AG1478和OXA对H1975细胞活力的影响,MDC法检测H1975细胞自噬水平,Western blot法检测PI3K/AKT信号通路(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT)以及自噬相关蛋白(Beclin^(-1)、LC3Ⅱ)的表达水平;ROS探针H2DCFDA检测H1975细胞的ROS水平。结果MTT结果显示,OXA作用于H1975细胞的半数抑制浓度IC 50为70.86μmol·L^(-1);AG1478作用于H1975细胞的IC 50为24.24μmol·L^(-1);MDC实验结果显示,与对照组比较,(OXA-25、OXA-50、OXA^(-1)00)OXA单药组、AG1478单药组及联合用药组自噬水平明显升高;与OXA单药组(OXA-25)比较,联合用药组自噬水平升高;Western blot检测结果显示,与对照组比较,(OXA-25、OXA-50、OXA^(-1)00)OXA单药组、AG1478单药组及联合用药组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达均下调,应用N-乙酰半胱胺酸(N-acetylcysteine,NAC)预处理后,联合用药组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT下调水平被抑制;与OXA单药组(OXA-25)比较,联合用药组PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT的蛋白表达水平均下降;Western blot检测结果显示,与对照组比较,(OXA-25、OXA-50、OXA^(-1)00)OXA单药组、AG1478单药组及联合用药组Beclin^(-1)、LC3Ⅱ的蛋白表达上调,应用NAC预处理后,联合用药组Beclin^(-1)、LC3Ⅱ的蛋白表达被抑制,应用PI3K抑制剂(LY294002)预处理后,联合用药组Beclin^(-1)、LC3Ⅱ的蛋白表达明显上调;与OXA单药组(OXA-25)比较,联合用药组Beclin^(-1)、LC3Ⅱ的蛋白表达水平升高;H2DCFDA检测发现,与对照组比较,(OXA-25、OXA-50、OXA^(-1)00)OXA单药组、AG1478单药组及联合用药组ROS水平升高;与对照组比较,联合用药组ROS水平明显升高,NAC处理组ROS水平明显降低;与联合用药组相比较,NAC预处理的联合用药组ROS水平下降。结论AG1478联合OXA诱导NSCLC H1975细胞调控ROS水平升高,抑制PI3K信号通路的激活,进而促进H1975细胞自噬。

白头翁汤调控PI3K/AKT-HIF-1α通路治疗VVC小鼠的研究

目的基于磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)-缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)通路探究白头翁汤对外阴阴道假丝酵母菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠的作用机制。方法雌性SPF级昆明种小鼠采用苯甲酸雌二醇皮下注射联合白色念珠菌混悬液阴道接种建立VVC小鼠模型。造模成功小鼠随机分为模型组,白头翁汤高、中、低剂量组(23.4、11.7、5.85 g·kg^(-1)),氟康唑组(0.02 g·kg^(-1)),每组20只。另取20只小鼠只注射苯甲酸雌二醇作为空白组。模型成功后次日给药,连续14 d。末次给药2 h后,巴氏染色法观测阴道灌洗液内中性粒细胞数量;HE染色法观察阴道组织形态;ELISA法测定阴道组织中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(Nicotinamide adenine dinucleo-tide phosphate oxidase 2,NOX2)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性及活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;qPCR检测阴道组织PI3K、AKT、HIF-1α的mRNA表达;Western blot检测阴道组织p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、HIF-1α蛋白表达。结果与空白组小鼠相比,模型组小鼠阴道灌洗液含有大量中性粒细胞(P<0.001);阴道黏膜层脱落严重,大量炎细胞浸润;阴道组织ROS、MDA水平升高(P<0.001),NOX2活性提高(P<0.001),SOD活性降低(P<0.001),PI3K、AKT、HIF-1αmRNA表达降低(P<0.001),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的比值、HIF-1α蛋白表达降低(P<0.001)。与模型组小鼠相比,白头翁汤高、中剂量组阴道灌洗液内中性粒细胞数量降低明显(P<0.01,P<0.001);阴道组织黏膜状况呈现不同程度的改善;阴道组织ROS、MDA水平有所降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),NOX2活性降低(P<0.01,P<0.001),SOD活性升高(P<0.01,P<0.001);白头翁汤高剂量组阴道组织PI3K、AKT、HIF-1αmRNA表达升高(P<0.001),p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的比值、HIF-1α蛋白表达升高(P<0.001)。结论白头翁汤可通过调控PI3K/AKT-HIF-1α信号通路发挥对VVC的治疗作用。

参芪地黄汤通过GPX4信号通路调控糖尿病肾病小鼠铁死亡的机制研究

[目的]研究参芪地黄汤对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型小鼠的治疗效果及调控谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通路对铁死亡的影响。[方法]通过链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)联合高脂饮食诱导建立DN小鼠模型,并灌胃不同剂量的参芪地黄汤。通过检测各组小鼠体质量、血糖、肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、24 h尿蛋白,肾石蜡切片苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及过碘酸-雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色评估参芪地黄汤对DN模型小鼠的治疗作用;通过检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、4-羟基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)水平,评估参芪地黄汤对DN模型小鼠脂质过氧化水平的影响;通过检测总Fe水平以及转铁蛋白(transferin)、前列腺6跨膜上皮抗原3(six-transmembrane epithelial antigen of prostate 3,Steap3)蛋白水平评估参芪地黄汤对DN模型小鼠铁死亡的影响;通过检测还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(glutathione/oxidized glutathione,GSH/GSSG)水平以及溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、溶质载体家族3成员2(solute carrier family 3 member 2,SLC3A2)、GPX4、谷氨酸-半胱氨酸连接酶(glutamate cysteine ligase catalytic subunit,GCLC)、谷胱甘肽合成酶(glutathione synthetase,GSS)蛋白水平来评估参芪地黄汤对DN模型小鼠GPX4信号通路的影响。[结果]与模型组比较,参芪地黄汤干预可明显提升DN模型小鼠体质量(P<0.01);降低DN小鼠血糖、Cr、BUN及24 h尿蛋白水平(P<0.05,P<0.01);同时改善DN模型小鼠肾组织病理学变化;降低MDA、ROS、4-HNE水平(P<0.01);降低总Fe水平(P<0.05,P<0.01)以及transferin、Steap3蛋白水平(P<0.05);升高GSH/GSSG比例(P<0.01)以及SLC7A11(P<0.05)、SLC3A2、GPX4、GCLC、GSS蛋白水平(P<0.05,P<0.01)。[结论]参芪地黄汤对DN模型小鼠具有治疗作用,并且可以减轻脂质过氧化水平,其作用机制可能与通过调控GPX4信号通路抑制铁死亡有关。

迷迭香酸通过抑制ROS/NLRP-3炎症小体信号通路对脑缺血再灌注小鼠的保护作用

目的探讨不同剂量迷迭香酸对脑缺血再灌注小鼠活性氧自由基(ROS)/Nod样受体蛋白-3(NLRP-3)炎症小体信号通路表达的影响,以及迷迭香酸抑制脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法60只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠分为假手术组、模型组、迷迭香酸10、20、40 mg/kg组,每组12只。采用改良的Longa线栓法,缺血60 min后进行再灌注建立急性局灶性脑缺血小鼠模型,再灌注后即刻腹腔注射迷迭香酸10、20、40 mg/kg,小鼠清醒后行神经功能学评分,24 h后取脑组织标本,通过苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠脑组织形态学变化,通过免疫荧光分析测定受损侧脑组织标本中ROS水平,Western blot检测超氧化物歧化酶(SOD)1、SOD2、血红素氧合酶-1(HO-1)、核因子-E2相关因子-2(Nrf-2)、NLRP-3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1、白细胞介素-1β(IL-1β)相对表达水平。结果假手术组术后神经功能学评分均为0分。与模型组比较,迷迭香酸10、20、40 mg/kg组神经功能学评分降低,其中迷迭香酸40 mg/kg组降低最明显(P<0.05)。与假手术组比较,模型组脑损伤病理评分、ROS水平增高(P<0.05);与模型组比较,迷迭香酸20 mg/kg组ROS水平降低,迷迭香酸40 mg/kg组脑损伤病理评分、ROS水平降低,其中迷迭香酸40 mg/kg组降低最明显(P<0.05)。与假手术组比较,模型组SOD1、SOD2、HO-1、Nrf-2相对表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,迷迭香酸20 mg/kg组SOD1、HO-1、Nrf-2相对表达水平升高,迷迭香酸40 mg/kg组SOD1、SOD2、HO-1、Nrf-2相对表达水平升高,其中迷迭香酸40 mg/kg组升高最明显(P<0.05)。与假手术组比较,模型组NLRP-3、ASC、caspase-1、IL-1β相对表达水平升高(P<0.05);与模型组比较,迷迭香酸10、20、40 mg/kg组NLRP-3、ASC、caspase-1、IL-1β相对表达水平降低,其中迷迭香酸40 mg/kg组降低最明显(P<0.05)。结论迷迭香酸可下调ROS/NLRP-3炎症小体信号通路,抑制炎性及氧化应激反应,减轻小鼠脑缺血再灌注的神经损伤。

基于PI3K/Akt信号通路探讨橘皮素对双氧水致心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究橘皮素对双氧水致心肌细胞氧化损伤的保护作用及与PI3K/Akt(酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B)信号通路的相关性。方法:培养H9C2心肌细胞,分3组,分别为:正常组(Control)、氧化损伤组(Oxidative Damage Group,ODG)、橘皮素组(Tangeretin);其中氧化损伤组H9C2心肌细胞通过双氧水构建氧化损伤模型,橘皮素组在氧化损伤组的基础上使用橘皮素预处理;通过CCK8实验测定各组细胞的活力值,流式细胞术检测各组细胞内ROS(活性氧)的表达情况,Western blot检测各组PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果:与Control组相比,ODG组与Tangeretin组细胞活力值均明显下降(均P<0.05),细胞内ROS表达量均明显上升(均P<0.05),ODG组细胞p-Akt/Akt的表达明显下降(P<0.05);与ODG组相比,Tangeretin预处理后,细胞活力值明显提升(P<0.05),细胞内ROS表达量明显降低(P<0.05),PI3K与p-Akt/Akt的表达明显上调(均P<0.05)。结论:橘皮素预处理可有效发挥双氧水致心肌细胞氧化损伤的保护作用,其机制可能与PI3K/AKT信号通路的激活相关。

P13-K／Akt和MAPKs信号通路在氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的探讨P13-K／Akt、有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen—activatedproteinkinases，MAPKs）信号通路在氧化应激诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），采用不同浓度的过氧化氢（H2O2）刺激细胞建立氧化应激损伤的模型，采用M1Tr法检测细胞活力，用原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡，双氢罗丹明123（DHR）染色检测细胞内活性氧（ROS）水平，Westernblot检测P13-K／Akt和MAPKs信号通路关键蛋白的表达情况。结果各浓度H2O2组细胞活力（OD值）较对照组明显降低（P〈0．01），各浓度H2O2组不同作用时间点OD值差异无统计学意义（P〉0．05）；200μmol／LH2O2刺激HU-VECs24h后，细胞凋亡率及胞内ROS水平较对照组明显升高（P〈0．05）；H2O2组P—Akt、P—C—Jun、p—p38及p—ERKl／2蛋白表达较对照组明显增加（P〈0．05），而采用抗氧化剂白藜芦醇（RES）预处理2h后，这-作用被逆转。结论P13-K／Akt和MAPKs信号通路可能参与ROS介导的HUVEC细胞凋亡。

大黄素通过调控ROS/TXNIP/NLRP3轴介导的细胞焦亡途径减轻重症肺炎大鼠肺损伤

目的:探讨大黄素是否通过调控活性氧簇(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴减轻重症肺炎大鼠肺损伤。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、大黄素(80 mg/kg)组、氧化三甲胺(TMAO;ROS特异性激活剂;110 mg/kg)组及大黄素与TMAO合用组,每组8只,除对照组外,其余各组大鼠均通过气管滴入肺炎克雷伯杆菌液构建重症肺炎模型,模型构建成功后按照各治疗组给药剂量进行灌胃处理,连续2周。末次灌胃结束后24 h采集大鼠动脉血、肺泡灌洗液及肺组织,采用血气分析仪分析大鼠动脉血二氧化碳(CO_(2))含量、动脉CO_(2)分压(PaCO_(2))、动脉血氧饱和度(SaO_(2))和动脉氧分压(PaO_(2));ELISA法测定肺泡灌洗液中炎症因子(TNF-α、IL-6及IL-1β)水平并采用瑞氏染色计数其中炎症细胞;HE染色观察各组大鼠肺组织病理学变化;ROS检测试剂盒测定大鼠肺组织中ROS活性;Western blot检测大鼠肺组织中ROS/TXNIP/NLRP3通路相关蛋白的表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肺组织损伤严重,PaCO_(2)、炎症因子水平、炎症细胞数量、ROS活性和ROS/TXNIP/NLRP3通路相关蛋白表达均显著升高(P<0.05),而CO_(2)含量、PaO_(2)和SaO_(2)则显著降低(P<0.05);与模型组相比,大黄素组大鼠肺损伤减轻,PaCO_(2)、炎症因子水平、炎症细胞数量、ROS活性和ROS/TXNIP/NL-RP3通路相关蛋白的表达均显著降低(P<0.05),而CO_(2)含量、PaO_(2)和SaO_(2)则显著升高(P<0.05);与大黄素组相比,大黄素与TMAO合用组大鼠肺组织损伤严重,PaCO_(2)、炎症因子水平、炎症细胞数量、ROS活性和ROS/TXNIP/NLRP3通路相关蛋白的表达均显著升高(P<0.05),CO_(2)含量、PaO_(2)和SaO_(2)则显著降低(P<0.05)。结论:大黄素可一定程度上减轻重症肺炎大鼠肺损伤,其机制可能与抑制ROS/TXNIP/NLRP3通路有关。

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的:探讨玫瑰花甲醇提取物(RE)对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果:RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC_(50)值分别为31.30 mg·mL^(-1)和16.76 mg·mL^(-1);RE能显著诱导PC-3细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平(P<0.05,P<0.01),且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值(P<0.05,P<0.01),显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达(P<0.05,P<0.01),以上均呈现浓度依赖性。结论:本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。

基于ROS/Akt信号通路的黄芪多糖改善腹主动脉缩窄小鼠心肌肥厚的机制探讨

目的研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对心肌肥厚小鼠心肌组织中ROS/Akt信号通路的影响。方法8~10周龄雄性C57BL/6小鼠36只,体重控制在24~26g,经主动脉缩窄(AB)术构建心肌肥厚模型,随机分为模型组(AB组)、黄芪多糖低剂量(L-APS组)和高剂量(H-APS组),另取12只C57BL/6小鼠行假手术(sham组)。术后1周开始分别予灭菌蒸馏水、APS每天灌胃给药,连用8周。8周后采用经胸超声心动图评估大鼠的心功能,测定各组大鼠心脏重量/体重比(HW/BW)、左室重量/体重比(LVW/BW)及肺重量/体重比(LW/BW);苏木精伊红染色观察心肌组织病理学改变;荧光探针检测大鼠心肌的ROS含量;Western blot法检测p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt的蛋白表达量。结果与sham组相比,AB组心功能显著降低,HW/BW、LVW/BW、LW/BW明显增加(P<0.01),HE染色显示心肌纤维增粗、结构紊乱,ROS含量升高,p-PI3K、p-Akt表达明显下降(P<0.01)。与AB组相比,APS组心功能得到一定改善,HW/BW、LVW/BW、LW/BW显著降低(P<0.01);HE染色可见心肌细胞肥大程度较AB组减轻,心肌结构损伤减轻;提示APS组心肌损伤得到了改善,APS两组相比,以L-APS组明显。APS组ROS含量均有不同程度下降,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt表达增加(P<0.01),以L-APS组明显(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪多糖在小鼠压力超负荷心肌肥厚中起保护作用,ROS/Akt通路可能参与了黄芪多糖抑制心肌肥厚的作用。

敲低SOX9基因增强As2O3诱导的人喉鳞癌细胞凋亡及机制

目的探讨敲低性别决定区Y盒基因9(SOX9)水平对As_2O_3诱导的喉鳞癌细胞凋亡的影响及机制。方法将SOX9的特异性小干涉RNA(si-SOX9)转染人喉癌Hep-2细胞,Western blot法检测转染48 h后细胞SOX9蛋白表达。随机将Hep-2细胞分为空白组、si-SOX9组、As_2O_3组和si-SOX9联合As_2O_3组。细胞按以上分组处理48 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞ROS含量,Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、血管内皮生长因子(VEGF)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白水平。结果转染si-SOX9后,可显著降低Hep-2细胞SOX9蛋白水平。As_2O_3组细胞活力及PCNA、VEGF、PI3K和p-AKT蛋白水平均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及BAX蛋白表达均显著增加;与单纯SOX9敲低组或单独As_2O_3处理组相比,敲低SOX9联合As_2O_3处理组的细胞活力及PCNA、VEGF、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及BAX蛋白表达均显著增加。结论敲低Hep-2细胞SOX9水平可增强As_2O_3对喉鳞癌细胞的凋亡诱导作用,与增加细胞ROS含量及下调PI3K/AKT信号通路有关。

紫苏醇对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制的研究

目的:探讨紫苏醇(Perillyl alcohol,PA)对肺癌A549细胞增殖和侵袭的抑制作用机制,并阐明其对肿瘤血管生成信号的影响。方法:不同浓度PA和厄洛替尼加入到A549细胞中,利用溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑(MTT)法测定药物组对A549细胞的抑制作用,Transwell法检测PA对A549细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;分光光度法检测PA对细胞凋亡蛋白Caspase-3活性的影响,Western blot法检测A549中VEGF、HIF-1α及COX-2的表达,凝胶迁移或电泳迁移率实验测定A549细胞中NF-κB活性。结果:与空白对照组比较,随着浓度的增加(10、50、100μg/ml),PA和厄洛替尼对A549细胞生长的抑制率在不断地增加,差异均有统计学意义(P<0.05),A549细胞侵袭能力呈现不断下降的趋势,差异均有统计学意义(P<0.05),A549细胞内活性氧水平随厄洛替尼浓度的增加变化不大,而ROS水平随着PA的浓度的增加而增加,在100μg/ml浓度的PA下引起的ROS百分率达到了(80.43±6.92)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞活力检测结果显示,随着PA和厄洛替尼浓度的增加和作用时间的延长,A549细胞中凋亡蛋白Caspase-3活性明显增加(P<0.05),随着紫苏醇浓度的增加,COX-2、VEGF和HIF-1α的表达呈不断降低的趋势,EMSA检测结果显示,随着PA浓度的增加,NF-κB的条带面积不断减少。结论:PA可能参与并促进了ROS的生成和Caspase-3活性增加,最终诱导A549细胞的凋亡,PA可能通过降低NF-κB的表达,进而诱导COX-2、VEGF等的表达减少,使血管生成滞后,能够有效地使细胞的穿透能力下降和凋亡发生。

芍药苷对哮喘小鼠炎症的作用及其机制研究

目的:探讨芍药苷(PF)治疗哮喘小鼠炎症的作用及其可能机制。方法:将40只BALB/C雌性小鼠,随机分为5组:空白组、模型组、地塞米松组(阳性对照,2 mg/kg)、PF低剂量组(20 mg/kg)和PF高剂量组(40 mg/kg),采用卵清蛋白制备小鼠哮喘模型。测定小鼠肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、炎症因子和活性氧(ROS)的含量,并检测肺组织中硫氧还蛋白/硫氧还蛋白反应蛋白(TXNIP)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1(Caspase-1)mRNA的表达。结果:PF可显著降低哮喘小鼠BALF中白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和单核-巨噬细胞、ROS、IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,缓解哮喘小鼠肺组织炎性细胞浸润,并降低哮喘小鼠肺组织中TXNIP、NLRP3和Caspase-1 mRNA的表达。结论:PF可改善哮喘小鼠的炎症反应,可能与其抑制ROS/TXNIP/NLRP3/Caspase-1信号通路有关。

高车前素对大肠癌细胞生长和转移的影响

高车前素是一种分离自菊科植物毛莲蒿的黄酮类化合物,具有多种生物活性。原癌基因PIM1可调节癌细胞存活、分化、增殖、凋亡和肿瘤发生。为了揭示高车前素对大肠癌细胞生长和转移的影响,及其对PIM1表达的影响,本研究应用不同浓度的高车前素处理人大肠癌细胞系SW620,并通过转染PIM1 siRNA来敲低大肠癌细胞中PIM1的表达,通过转染高表达PIM1的质粒载体再上调PIM1的表达。研究发现敲低PIM1可显著抑制大肠癌细胞的增殖和侵袭,并促进细胞凋亡;高车前素处理以浓度依赖性方式抑制大肠癌细胞系SW620的增殖和侵袭,并增加细胞凋亡。此外,高车前素处理以浓度依赖性方式抑制PIM1的表达,而上调PIM1的表达可显著抑制高车前素对大肠癌细胞系SW620的增殖、凋亡和侵袭能力的影响;高车前素以浓度依赖性方式抑制JAK2/STAT3的活化,并上调癌细胞内ROS水平;应用ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理可恢复JAK2/STAT3信号传导的激活及PIM1的表达。本研究证实原癌基因PIM1在大肠癌中起着致癌基因的作用,而高车前素通过ROS/JAK2/STAT3信号通路来调节PIM1的表达,进而发挥其抗肿瘤作用。