银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及ROS/XIAP信号通路的影响

目的探讨银杏内酯B对人结肠癌SW480细胞恶性生物学行为及活性氧(ROS)/X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAP)信号通路的影响。方法实验分为模型组(培养基+SW480细胞)、紫杉醇组(5 mg/L+培养基+SW480细胞),以及银杏内酯B低、高剂量组(50,100μmol/L+培养基+SW480细胞)。采用四唑盐(MTT)法测定细胞增殖水平并计算存活率,流式细胞术测定细胞凋亡情况并计算凋亡率,Transwell法测定细胞迁移侵袭水平,荧光探针法检测活性氧(ROS)水平,反转录聚合酶链反应法及Westernblot法测定细胞XIAPmRNA及蛋白表达水平。结果与模型组比较,紫杉醇组及银杏内酯B低、高剂量组细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭水平显著降低,细胞ROS水平及XIAPmRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论银杏内酯B可有效抑制SW480细胞的迁移和侵袭并诱导其凋亡,其机制可能与抑制ROS/XIAP信号通路的激活有关。

基于Nrf2/ROS信号通路探讨岩藻多糖对食管癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨岩藻多糖对食管癌增殖的影响,并分析其机制。方法:MTT法分析细胞增殖抑制率,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针检测ROS水平,Western blot法分析Nrf2、HO-1、NQO-1、Bcl-2、Bax、caspase-3水平,研究岩藻多糖对细胞增殖以及Nrf2/ROS信号通路的影响。裸鼠成瘤实验验证岩藻多糖对瘤体的瘤重、瘤体积及Nrf2、HO-1、NQO-1水平的影响。结果:1~16µg/mL岩藻多糖极显著抑制ECA109细胞增殖,48 h IC50为3.26µg/mL。与对照组(0.1%DMSO)相比,1、2、4µg/mL岩藻多糖处理后的ECA109细胞出现核凝聚、染色质不规则收缩、凋亡小体等明显的凋亡特征,(极)显著促进ECA109细胞凋亡,极显著下调Bcl-2表达水平,极显著上调Bax、Cleaved-caspase-3表达水平,极显著增加ROS水平,极显著降低Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05,P<0.01);Nrf2过表达能显著下调岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖效果,显著下调ROS水平,显著上调Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白水平(P<0.05)。体内实验显示,50、100 mg/kg岩藻多糖极显著抑制瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体Nrf2、HO-1、NQO-1水平(P<0.05)。结论:岩藻多糖抑制ECA109细胞增殖,对体内移植瘤抑瘤效果显著,其机制与调控Nrf2/ROS信号通路有关。

WNK2通过抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路延缓肝细胞癌的增殖和侵袭

目的探讨WNK2对肝细胞癌(hepatocellocellua carcinoma,HCC)中ERK1/2/ROS/SHP2信号通路的影响,并探讨其在HCC细胞增殖和迁移中的作用。方法将WNK2-mimic和sh-RNA WNK2以及相应的阴性对照转染HepG2细胞,采用BALB/c裸鼠皮下成瘤实验检测WNK2对肝细胞癌增殖能力的影响;采用Western Blot检测瘤组织中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用SHP2抑制剂PHPS1进行处理之后,采用Western Blot检测HepG2细胞中WNK2、p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达;使用细胞划痕实验和Transwell检测HepG2细胞的迁移能力和侵袭能力;采用单克隆增殖实验和CCK-8检测HepG2细胞的增殖能力。结果与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组裸鼠的瘤体体积显著增大(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组裸鼠的瘤体体积显著减小(P<0.01);Western Blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-RNA WNK2组WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);而与NC-mimic组相比,WNK2-mimic组WNK2的表达显著升高(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著降低(P<0.01);在体外实验当中,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达显著升高(P<0.01);相对于sh-NC+PHPS1组,sh-RNA WNK2+PHPS1组中WNK2的表达显著降低(P<0.01),而p40、gp90、p-SHP2、p-AKT和p-ERK1/2的表达则被逆转并且与sh-NC+PHPS1组不具有显著性差异(P>0.05);细胞划痕实验和Transwell结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著升高(P<0.01);sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的迁移和侵袭能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05);单克隆增殖实验结果显示,相对于sh-NC组,sh-RNA WNK2组HepG2细胞的增殖能力显著升高(P<0.01),而sh-NC+PHPS1组和sh-RNA WNK2+PHPS1组HepG2细胞的增殖能力显著降低并且不具有显著性差异(P>0.05)。结论WNK2可以抑制ERK1/2/ROS/SHP2信号通路,从而抑制ERK1/2/AKT信号通路,延缓HCC的增殖和迁移。

苍术素通过ROS/Nrf2/HO-1信号通路诱导肺癌细胞凋亡和自噬

目的:探讨苍术素(atractylodin,ATR)对肺癌细胞凋亡和自噬的影响,并初步探讨其可能分子机制。方法:体外培养非小细胞肺癌A549和H460细胞,CCK-8检测不同浓度苍术素对肺癌细胞和HBE细胞活力的影响。Hoechst染色及流式细胞术检测苍术素对肺癌细胞凋亡的影响。Western blot法检测P62、beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap-1)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]的蛋白表达;吖啶橙染色(acridine orange,AO)检测酸性自噬泡的表达;免疫荧光检测LC3和Nrf2的表达;氯喹(chloroquine,CQ)阻断A549细胞的自噬后,采用Western blot分析,AO染色和流式细胞术检测细胞的自噬和凋亡;DCFH-DA检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达水平。结果:苍术素抑制肺癌A549和H460细胞的活力,促进肺癌细胞凋亡;在苍术素作用下,肺癌A549细胞内的酸性自噬泡数量显著增长,同时LC3和beclin-1蛋白表达量显著升高,而P62则减少。CQ阻断A549细胞的自噬,并逆转苍术素诱导的细胞凋亡;同时苍术素显著促进细胞内ROS的表达,抑制Keap-1的蛋白表达,上调Nrf2、HO-1及NQO1的蛋白表达。结论:苍术素可抑制肺癌细胞活性,并通过自噬诱导肺癌细胞凋亡,其作用机制可能与ROS/Nrf2/HO-1通路有关。

T3SS通过ERK/ROS信号通路促进铜绿假单胞菌侵袭肺上皮细胞的作用

目的探究Ⅲ型分泌型系统(type three secretion system,T3SS)在调控铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)侵袭肺上皮细胞中的作用及具体机制。方法采用PA菌株感染人非小细胞肺癌A549细胞,分为未处理组、PAO1(PA实验室标准菌株)组、△exsA(缺失与T3SS转录激活相关的基因exsA)组、△pscJ(缺失与T3SS蛋白分泌相关基因pscJ)组和PAO1-E(经EGTA诱导后高表达T3SS基因)感染组。采用U0126抑制A549细胞ERK活性或通过apocynin(APO)/N-acetyl-L-cysteine(NAC)抑制A549细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生并随后感染PAO1或PAO1-E菌株,分为未处理组、PAO1或PAO1-E感染组、抑制剂处理组,以及抑制剂联合PAO1或PAO1-E感染组。选用庆大霉素杀伤胞外细菌并将细胞裂解液倍比稀释后涂布PA筛选平板,通过计数菌落形成单位(CFUs),明确PA感染后细胞内的细菌量;通过荧光探针标记以及流式细胞术检测感染后细胞内ROS水平;通过Western blot检测感染后ERK通路的活化情况。结果与PAO1感染组相比,△exsA和△pscJ感染组的细胞内细菌量减少(P<0.05,P<0.01),且伴随ROS产生减少(P<0.01),而PAO1-E感染组则呈现相反趋势(P<0.01)。PAO1或PAO1-E感染联合APO/NAC处理组的细胞内细菌量明显低于PAO1或PAO1-E感染组(P<0.01)。相较PAO1感染组,△exsA和△pscJ感染组的ERK磷酸化水平增加(P<0.01),而PAO1-E感染组的ERK磷酸化降低(P<0.01)。与PAO1感染组相比,PAO1联合U0126处理组的细胞ERK磷酸化水平降低,伴随ROS产生以及细胞内细菌量增加(P<0.01)。结论T3SS介导ERK通路抑制可通过促进肺上皮细胞ROS产生,增加PA对肺上皮细胞侵袭。

益生菌通过调节ROS/JNK信号通路在代谢相关脂肪性肝病治疗中的作用及机理研究

目的探讨益生菌通过调节ROS/JNK信号通路在代谢相关脂肪性肝病治疗中的作用和机制。方法选取18只C57BL/6雄性小鼠,随机分成模型组(n=6)、对照组(n=6)及益生菌组(n=6)。给予模型组及益生菌组小鼠MCD饮食来构建代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠模型,对照组小鼠喂养MCS饮食,益生菌组小鼠以益生菌灌胃,每天灌胃一次,每次0.5 mL,模型组和对照组予以等量生理盐水灌胃,连续灌胃4周。益生菌治疗4周后将小鼠麻醉处死,检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)、血浆D-乳酸(D-Lac)、血清及小肠二胺氧化酶(DAO)水平变化情况。选取肝脏及回肠组织切片后行HE染色。同时检测各组小鼠肝组织中活性氧(ROS)水平。使用免疫印迹技术检测各组小鼠ROS/JNK信号通路相关蛋白表达情况,如磷酸化c-Jun氨基末端激酶(P-JNK)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)、紧密连接蛋白ZO-1、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)。使用免疫组化技术检测各组小鼠ROS/JNK信号通路相关蛋白表达情况,如P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平。使用PCR检测各组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达。结果肝脏HE染色病理学结果分析:喂养C57BL/6小鼠MCD饮食4周后通过HE染色观察肝小叶结构紊乱,肝细胞内可见脂滴沉积并伴有严重的炎性细胞浸润,证明成功建立MAFLD动物模型。益生菌治疗4周后,与模型组相比,益生菌组小鼠肝小叶结构变得完整,肝细胞内脂肪变性和炎性细胞浸润减少。生化结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠血清中血脂(TC、TG)及转氨酶(ALT、AST)、血浆D-Lac、血清及小肠DAO和肝组织中ROS水平较对照组明显增高。而在使用益生菌治疗4周后,与模型组小鼠相比,益生菌组小鼠的血清TC、TG、ALT、AST、血浆D-Lac、血清及小肠DAO和肝脏中ROS水平均明显下降(P<0.05)。Western blot结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,与对照组小鼠相比,模型组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax表达水平明显增加,肠道ZO-1的表达水平明显降低;而使用益生菌治疗4周后,与模型组小鼠相比,益生菌组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平降低,而ZO-1的表达水平增加(P<0.05)。PCR结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达水平较对照组明显增加;而益生菌治疗后,与模型组相比,益生菌组小鼠Bax、Caspase-3的mRNA表达降低(P<0.05)。免疫组化结果分析:C57BL/6小鼠喂养MCD饮食后,模型组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平较对照组升高;在使用益生菌治疗后,与模型组相比,益生菌组小鼠肝脏P-JNK、Caspase-3、Bax的表达水平降低(P<0.05)。小肠HE染色病理学结果分析:对照组小鼠的回肠粘膜结构正常,无充血水肿、溃疡、剥脱。与对照组相比,模型组小鼠的回肠粘膜结构严重破坏,肠粘膜出现水肿、溃疡、剥脱现象。使用益生菌干预后,益生菌组小鼠肠粘膜结构变得较为完整,肠粘膜无明显水肿、溃疡、剥脱,见图。相较于对照组,模型组小鼠回肠黏膜Chiu氏病理评分更高。使用益生菌干预后,相较于模型组,益生菌组小鼠回肠黏膜Chiu氏病理评分降低(P<0.05)。结论ROS、P-JNK、Caspase-3、Bax在MAFLD中表达增加,表明其与MAFLD的发病有关。使用益生菌治疗后可以明显改善MAFLD的组织学及血清学相关指标。Western blot、PCR及免疫组化结果都证实益生菌能通过调节ROS/JNK信号通路相关因子表达,减轻氧化应激从而抑制细胞凋亡达到治疗MAFLD的目的。

ROS/PI3K/Akt信号通路相关蛋白在胃癌组织中的表达及临床病理意义

分析在胃癌组织中活性氧/磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B(ROS/PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的表达水平及其临床病理意义。方法 选取2019年2月~2021年3月在涉县医院住院且接受手术切除治疗原发性胃癌的患者68例,取入组患者术中切除的癌组织及距离癌缘2cm左右的癌旁组织,免疫荧光法检测标本中ROS表达,ICH法检测标本中PI3K、Akt表达,并研究ROS、PI3K、Akt表达与患者病理状态的相关性。结果 胃癌组织中ROS、ROS、PI3K、Akt表达水平均显著高于胃癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中PI3K、Akt表达水平在不同TNM分期、不同的分化等级及淋巴结转移数目存在明显差异的患者中存在显著差异(P<0.05)。结论 胃癌组织中PI3K、Akt表达水平与癌症分期、恶化程度存在一定的关系,提示ROS/PI3K/Akt信号通路参与胃癌的发生及发展,可为该疾病的研究与治疗提供新的靶点和方向。

绿原酸通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路介导的细胞焦亡途径减轻脓毒症小鼠急性肺损伤

目的:探究绿原酸对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响及活性氧/硫氧还蛋白互作蛋白/NOD样受体蛋白3(ROS/TXNIP/NLRP3)信号通路在其中的作用。方法:建立脓毒症小鼠模型,随机分为模型组、阳性对照(地塞米松)组及低剂量(5 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)、高剂量(20 mg/kg)绿原酸组,每组各12只,另取12只正常小鼠作为对照组。计数肺泡灌洗液中炎症细胞数量;测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;HE染色观察肺组织病理改变;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡;ELISA法测定肺泡灌洗液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,相应试剂盒检测肺组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和活性氧(ROS)水平;Westernblot法检测TXNIP、NLRP3蛋白、caspase-1及细胞焦亡关键蛋白GasderminD的N末端片段(GSDMD-N)的表达水平。结果:相较于对照组,模型组肺泡间隔增厚,肺泡内及肺泡间质水肿,炎症细胞数量显著增加,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平均显著升高(P<0.05);而模型组SOD水平较对照组显著降低(P<0.05)。相较于模型组,绿原酸低、中、高剂量组肺泡间隔增厚及水肿情况有所减轻,炎症细胞数量显著减少,IL-1β、IL-6和TNF-α含量、W/D比值、细胞凋亡率、MDA和ROS水平以及TXNIP、NLRP3、caspase-1和GSDMD-N蛋白水平显著降低(P<0.05);而模型组SOD水平较对照组显著升高(P<0.05);绿原酸高剂量组与阳性对照组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:绿原酸可能通过下调ROS/TXNIP/NLRP3信号通路表达水平,抑制炎症分子产生及细胞焦亡发生,有效减轻脓毒症小鼠肺损伤。

苏萸痛风方通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路抗痛风性关节炎的作用机制

目的 研究苏萸痛风方抗痛风性关节炎的作用机制。方法 将雄性SD大鼠按体质量随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱片组(阳性对照药,0.3 mg/kg)和苏萸痛风方高、中、低剂量组(5、2.5、1.25 g/kg),每组10只。给药组大鼠每日灌胃相应药物1次(10 mL/kg),连续给药7 d。正常对照组和模型组大鼠同法灌胃等体积水。第6天给药后1 h,除正常对照组外,其余各组大鼠于关节腔注入尿酸钠复制痛风性关节炎模型。检测大鼠造模后2、6、24 h的关节肿胀度和炎症指数评分。末次给药后1 h,检测大鼠血清中氧化应激相关指标[超氧化物歧化酶(SOD)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、丙二醛(MDA)]活性及炎症因子[白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平,观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,检测大鼠踝关节组织中硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的表达水平。结果 经苏萸痛风方干预后,大鼠关节肿胀度减轻、炎症指数评分降低、滑膜组织水肿改善、炎症细胞数量减少。苏萸痛风方高剂量组大鼠血清中SOD活性显著升高(P<0.01),XOD、MDA活性以及IL-1β、IL-18、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),踝关节组织中ROS水平和TXNIP、NLRP3、ASC蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01)。苏萸痛风方中、低剂量组上述部分指标活性/水平也发生显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论 苏萸痛风方可通过ROS/TXNIP/NLRP3信号通路,抑制NLRP3炎性小体激活,进而发挥抗痛风性关节炎的作用。

乌头碱通过ROS/JNK信号转导通路诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制研究

目的基于ROS/JNK信号转导通路探讨乌头碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制。方法MTT法测定乌头碱对人骨肉瘤143B细胞活力的抑制作用;Western Blot法检测乌头碱处理后143B细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平;采用流式细胞术检测用乌头碱处理后143B细胞的凋亡及活性氧簇(ROS)的产生。结果乌头碱可显著诱导143B细胞发生凋亡,产生ROS。乌头碱处理后143B细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3、磷酸化JNK均显著上升。乌头碱有显著的体外抗骨肉瘤作用,能显著抑制143B细胞的活力。结论乌头碱通过ROS/JNK信号通路诱导人骨肉瘤143B细胞发生凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。

RNAi NRP-1基因对骨肉瘤细胞凋亡、ROS含量及STAT3信号通路的影响

目的:探讨RNAi神经纤毛蛋白1(NRP1)基因对骨肉瘤细胞凋亡、ROS含量及STAT3信号通路的影响。方法:分别将合成的NRP-1的siRNA(NRP-1-siRNA组)及无干扰作用的siRNA(NC组)转染人骨肉瘤MG-63细胞,并设置空白对照组,Western blotting检测转染48 h的细胞中NRP-1和磷酸化的STAT3(p-STAT3)及STAT3信号通路靶基因Cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达;CCK8法分别于转染的24、48 h和72 h检测细胞活力;流式细胞术分别检测细胞凋亡率及ROS含量。结果:与空白对照组比较,NRP-1-siRNA组NRP-1、Cyclin D1、Bcl-2和p-STAT3的蛋白表达均显著降低,转染24、48、72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,ROS含量显著升高(P<0.05)。结论:RNAi抑制NRP-1基因表达可降低骨肉瘤细胞活力,诱导细胞凋亡,机制可能与提高细胞内ROS含量和下调STAT3信号通路有关。

山茱萸提取物对慢性肾功能衰竭大鼠的肾保护作用及对oxidase/ROS/ERK信号通路的影响

目的:探讨山茱萸提取物对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠的肾保护作用及对氧化酶(oxidase)/活性氧(ROS)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响。方法:将40只雄性SD大鼠分为正常组、模型组、阳性药组和山茱萸组,每组10只。除正常组外,其余各组按0.25 g/(kg·d)的剂量灌胃腺嘌呤溶液,连续给予21 d制备CRF模型。模型制备成功后,阳性药组按0.75 g/(kg·d)的剂量给予黄葵胶囊,山茱萸组按0.60 g/(kg·d)的剂量给予山茱萸提取物,正常组和模型组给予等量生理盐水,持续28 d。对肾组织进行病理学检查及评分,同时检测肾功能指标、血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量及肾脏中相关蛋白的含量。结果:正常组大鼠肾脏病理未观察到损伤迹象;模型组出现弥漫肾小球和肾小管萎缩、炎性细胞浸润和间质纤维化等病变;阳性药组肾小球和肾小管萎缩、炎性细胞浸润和间质纤维化等病变较模型组减轻;山茱萸组肾小球和肾小管萎缩、炎性细胞浸润和间质纤维化等病变程度介于模型组和阳性药组之间。与正常组比较,模型组炎症评分、纤维化评分及尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)、尿蛋白(UP)、TNF-α、IL-6、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、NADPH氧化酶1(NOX1)、ROS、磷酸化ERK(p-ERK)含量均增加(P<0.05);与模型组比较,阳性药组和山茱萸组炎症评分、纤维化评分及BUN、SCr、UP、TNF-α、IL-6、α-SMA、NOX1、ROS、p-ERK含量均降低(P<0.05);与阳性药组比较,山茱萸组炎症评分、纤维化评分及BUN、SCr、UP、TNF-α、IL-6、α-SMA、NOX1、ROS、p-ERK含量均增加(P<0.05)。结论:山茱萸提取物可以通过抑制肾组织炎症反应和纤维化对CRF大鼠起到一定的保护作用,其机制可能与oxidase/ROS/ERK信号通路有关。

补充维生素C对剧烈运动后人体血清炎症因子水平的影响及ROS/NF-κB信号通路在其中的作用

目的:探讨补充维生素C对剧烈运动后人体血清炎症因子水平的影响及ROS/NF-κB信号通路在其中的作用。方法:随机选取20名健康男性在校大学生,分为实验组和对照组。运动开始前分别给予两组大学生维生素C片3.0 g和安慰剂口服。两组大学生分别按照75%VO2max进行跑台运动,持续时间为1 h,并于运动干预开始前10 min、结束后0 h和2 h分别采集静脉血,分离血清和血细胞,并利用ELISA法检测外周血IL-1、IL-6、IL-8含量;由血细胞中分离白细胞后,分别测定白细胞中活性氧(ROS)水平和IKKα激酶活性。结果:剧烈运动后,两组大学生外周血白细胞均明显升高,组间无明显差异;对照组外周血IL-1、IL-6、IL-8含量均表现出逐渐升高的趋势,而实验组未表现出此趋势,其中IL-1水平运动前后无明显变化。此外,两组大学生外周血白细胞中IKKα活性均表现出先升后降的变化趋势,其中实验组升高趋势明显低于对照组。而白细胞中ROS水平却表现出逐渐升高的趋势,其中以对照组升高趋势更明显,组间差异有统计学意义。结论:剧烈运动可以引起白细胞中ROS/NF-κB信号通路活化和血清炎症因子水平升高,而运动前补充维生素C可以有效抑制白细胞中ROS/NF-κB信号通路活化介导的血清炎症因子水平升高。

EFHD2调节NOX4/ROS通路启动糖代谢重编程促进乳腺癌进展的机制研究

目的基于NOX4/ROS信号通路探讨EFHD2影响乳腺癌发生进展的作用机制。方法将细胞分为NC-shRNA组和EFHD2-shRNA组,构建沉默EFHD2表达的慢病毒载体及其对照载体后转染乳腺癌细胞MDA-MB-23、MCF-7,qRT-PCR验证转染效率;CCK8检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平;qRT-PCR检测GLUT1、PDK1、PFK1、PKM2、PDH、LDH mRNA的表达;Western blot检测Cleaved caspase-3、MMP-2、NOX4蛋白的表达。结果与NC-shRNA组相比,EFHD2-shRNA组细胞中EFHD2的表达明显降低,细胞存活及其集落形成能力减弱;细胞凋亡率及促凋亡蛋白Cleaved caspase-3的表达升高;细胞迁移距离缩短,细胞侵袭数及促迁移、侵袭蛋白MMP-2的表达降低;乳酸及GLUT1、PDK1、PFK1、PKM2、LDH的水平降低,ATP及PDH的水平升高;流式结果表明沉默EFHD2后ROS水平降低,NOX4蛋白下调。结论EFHD2可通过调节NOX4/ROS信号通路,抑制ROS生成,引起乳酸及葡萄糖堆积从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖、迁移及侵袭。

大补肝汤通过调控ROS/Nrf2/HO-1通路对广泛性焦虑症大鼠的改善作用

目的探讨大补肝汤对广泛性焦虑症(GAD)模型大鼠的作用机制。方法大鼠采用慢性不可预知温和应激法(CUMS)造模21d,随机分为模型组、帕罗西汀组(1.8mg/kg)和大补肝汤高、中、低剂量组(13.2、6.6、3.3g/kg),另设空白组,各组给予相应药物灌胃,持续28d。干预结束后,检测行为学以分析大鼠焦虑状态,HE染色和尼氏染色观察海马组织病理变化及尼氏体变化,免疫荧光法检测脑组织ROS活性,试剂盒检测海马组织SOD、CAT活性和MDA、GSH水平,RT-qPCR法和Westernblot法检测海马组织Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1、BDNF、5-HT1A、caspase-3、p62mRNA和蛋白表达。结果与模型组比较,大补肝汤各剂量组大鼠焦虑行为得到改善,大鼠在高架十字迷宫中开臂端运动距离及总距离、进入明箱次数及停留时间、进入旷场中央时间及次数增加(P<0.05,P<0.01),海马神经细胞数量增加,排列紧密,细胞体损坏改善,细胞中尼氏体增加,海马组织中ROS活性和MDA水平降低(P<0.05,P<0.01),SOD、CAT活性和GSH水平均升高(P<0.05,P<0.01),海马组织Nrf2、HO-1、NQO1、BDNF、5-HT1AmRNA及蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),p62、Keap1、caspase-3mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论大补肝汤可有效改善GAD大鼠焦虑状态,其机制可能与调控ROS/Nrf2/HO-1信号通路、改善海马神经元氧化应激损伤有关。

ROS介导的JNK信号通路及其对细胞自噬的调节

活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）是生物有氧代谢过程中产生的一类活性含氧化合物的总称,作为细胞内的一种信号分子,ROS可通过多种途径激活c-Jun氨基末端激酶（cJun NH2-terminal kinase,JNK）。调节细胞自噬是ROS介导的JNK信号通路的一个重要功能,其能够以ROS水平依赖的方式激活细胞自噬和凋亡。

S1P/S1PR1信号通路通过调控ROS/NLRP3对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响

目的探究S1P/S1PR1信号通路对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其可能的作用机制。方法采用不同浓度葡萄糖处理细胞,ELISA法检测细胞内S1P表达,Western blot检测S1PR1蛋白表达;将细胞分为正常对照组、HG组及HG+siS1PR1组,RT-PCR检测细胞E-cadherin、Vimentin、Fibronectin及Twist mRNA的表达,Western blot检测E-cadherin、α-SMA、Vimentin、NLRP3、ASC及NF-κB蛋白表达,流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;将细胞分为正常对照组、S1P组及S1P+siS1PR1组,Western blot检测Vimentin、Snail、α-SMA、NLRP3、ASC及NF-κB蛋白表达,荧光显微镜测定ROS水平。结果ELISA结果显示,高糖刺激下细胞内S1P含量明显升高。Western blot结果显示,30 mmol·L^(-1)浓度时S1PR1蛋白表达量与对照组相比明显升高;阻断S1PR1后可以抑制高糖诱导的Fibronectin、Vimentin及Twist mRNA表达,上调E-cadherin mRNA的表达,Western blot结果显示,E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin,α-SMA蛋白表达下降,同时可抑制细胞内ROS的产生和NLRP3,ASC,NF-κB蛋白水平;加入S1P激活剂后细胞内ROS水平,Vimentin、α-SMA、Snail、NLRP3、ASC及NF-κB蛋白水平表达均升高,阻断S1PR1后表达均降低。结论高糖能诱导肾小管上皮细胞EMT,其机制可能与S1P/S1PR1信号通路作用于ROS/NLRP3轴有关。

黄芪甲甙对急性心肌梗死大鼠心室重构和NOX/ROS/TNFα信号通路的影响

研究旨在探究黄芪甲甙对急性心肌梗死大鼠心室重构的作用及其机制。选取36只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲甙低剂量组、黄芪甲甙中剂量组、黄芪甲甙高剂量组和阳性对照组,每组6只。除假手术组外,其余大鼠手术建立急性心肌梗死模型,假手术组大鼠开胸后仅分离冠状动脉左前降支,不做结扎处理便逐层缝合,造模后第2天开始药物干预:黄芪甲甙低、中、高剂量组分别给予20、40、60 mg·kg^(-1)黄芪甲甙灌胃处理,阳性对照组给予100 mg·kg^(-1)阿司匹林灌胃处理。比较各组治疗第0、2、4周心功能指标[左心室射血分数(left ventricular ejection fractions,LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening,LVFS)、左心室质量指数(left ventricular mass index,LVMI)]的变化情况。采用心脏血流动力学监测系统监测心脏血流动力学指标[左心室舒张末压(left ventricular end diastolic pressure,LVEDP)、左心室收缩压(left ventricular systolic pressure,LVSP)和左心室等容收缩/舒张压上升最大速率(maximal rate of left ventricular pressure increase/decrease,±dp/dtmax)]的变化情况,采用酶联免疫吸附法测定血清血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、内皮素1(endothelin-1,ET-1)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)含量,试剂盒检测心肌组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,实时荧光定量PCR和Western blot检测大鼠心肌组织NADPH氧化酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOX)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)mRNA相对表达量和蛋白表达水平。结果显示,治疗4周后,黄芪甲苷高剂量组和阳性对照组LVEF、LVFS随着治疗时间延长不断升高(P<0.05);与相同治疗时间假手术组比较,模型组LVEF、LVFS均显著降低(P<0.05);与治疗第0周模型组比较,各治疗组LVEF、LVFS差异无统计学意义(P>0.05);治疗第2、4周与模型组比较,黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组和阳性对照组LVEF、LVFS显著升高(P<0.05);与模型组比较,黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷高剂量组和阳性对照组LVMI显著降低(P<0.05),LVSP、LVEDP、±dp/dt显著升高(P<0.05),血清AngⅡ、ET-1、BNP显著降低(P<0.05),心肌组织ROS含量显著降低(P<0.05),NOX、TNF-α基因和蛋白表达量显著降低。研究结果表明,黄芪甲甙可改善AMI大鼠心功能和血流动力学紊乱,抑制心室重构,可能与下调NOX/ROS/TNF-α信号通路表达有关。

海马区Sigma-1R/Nrf2/ROS信号通路与神经病理性疼痛诱发焦虑情绪的关系

神经病理性疼痛是一种临床常见的慢性疼痛,发病机制复杂且尚不明确,目前临床治疗药物效果欠佳且不良反应较明显。持续的疼痛和长期的药物不良反应可导致患者诱发焦虑和抑郁等情绪障碍,极大降低了患者的生活质量。神经病理性疼痛和焦虑情绪的转化与海马密切相关,且Sigma-1R和Nrf2/ROS信号通路为调控神经病理性疼痛或焦虑的重要作用靶点。因此,本文就海马Sigma-1R/Nrf2/ROS信号通路与神经病理性疼痛诱导焦虑样行为的关系进行综述。

LPS通过ROS/p38/MAPK信号通路对鹅胚肝细胞凋亡的影响

【目的】建立鹅胚肝细胞的分离培养技术,探索脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)影响鹅胚肝细胞凋亡的作用机制,为鹅肝脏功能相关研究提供参考依据。【方法】选取16~18日龄无特定病原鹅胚,无菌条件下取鹅胚肝脏并用2%胶原酶Ⅳ消化,过细胞筛后分离培养鹅胚肝细胞并进行PAS染色鉴定。在鹅胚肝细胞中添加不同浓度(0(对照组)、0.1、1.0、10μg/mL)LPS,分别于12、24、36 h收集细胞,采用试剂盒检测鹅胚肝细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR检测细胞凋亡关键基因(caspase3、caspase9、p38)mRNA表达量。【结果】试验成功从鹅胚中分离出肝细胞并进行培养,鹅胚肝细胞形态完整,贴壁率高,存活率高,能稳定生长。PAS染色结果显示,鹅胚肝细胞质呈深浅不一的紫红色,肝细胞核呈蓝色。添加不同浓度LPS后发现,鹅胚肝细胞有氧化损伤情况,其中1.0μg/mL LPS组鹅胚肝细胞内ROS水平升高。添加LPS后鹅胚肝细胞晚期细胞凋亡受到抑制,除36 h外,细胞凋亡关键基因caspase 3、caspase 9、p 38表达量均显著降低(P<0.05)。【结论】本研究建立了较稳定的鹅胚肝细胞分离培养方法,添加不同浓度LPS后鹅胚肝细胞内ROS水平升高,激活p38/MAPK通路,且细胞凋亡受到一定抑制。