论白细胞精子症精浆ROS、PON-1水平与精子DFI的相关性

探讨白细胞精子症治疗前后精浆活性氧(ROS)、对氧磷酶-1(PON-1)水平与精子DNA碎片率(DFI)的变化,并分析精浆ROS、PON-1水平与精子DNA碎片率的相关性。方法:选取于2019年8月至2020年6月生殖科就诊的50例经过氧化物酶染色法确诊的白细胞精子症患者为观察组,并分析其治疗前后检测精浆ROS、PON-1和精子DFI,另外以42例正常男性为对照组进行相关项目检测。

Six1基因对As2O3诱导的口腔鳞癌细胞凋亡和ROS水平的影响研究

目的探讨Six1 siRNA或三氧化二砷(As2O3)对口腔鳞癌细胞活力、凋亡及活性氧(ROS)水平的影响。方法实验分为空白对照组(无需处理)、Six1-siRNA组(细胞转染Six1的特异性siRNA)、As2O3组(终浓度为5μmol/L As2O3处理细胞)和Six1-siRNA+As2O3组(Six1-siRNA及As2O3共同处理细胞)4个组,siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。人口腔鳞癌CAL-27细胞处理48 h,Western blotting检测Six1及Wnt/β-catenin信号相关的β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达。CCK8及流式细胞术分别检测细胞活力、凋亡率及ROS含量。结果Six1siRNA的转染可明显降低CAL-27细胞Six1的蛋白表达,与空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,Six1-siRNA组和As2O3组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,ROS含量明显升高,β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达明显降低(P<0.05),而联合使用的细胞活力及β-catenin、Cyclin Dl和Survivin的蛋白表达均显著低于Six1-siRNA组和As2O3组,凋亡率及ROS含量高于Six1-siRNA组和As2O3组(P<0.05)。结论Six1-siRNA可增加As2O3对口腔鳞癌细胞凋亡的诱导,机制与增加细胞ROS水平及下调Wnt/β-catenin信号有关。

siRNA靶向NRP-1基因沉默经Wnt、ROS及TGF-β1途径抑制宫颈癌细胞增殖

目的:探讨RNA干扰神经纤毛蛋白1(NRP-1)基因对宫颈癌细胞凋亡、ROS水平及免疫分子表达的影响。方法:以人正常宫颈细胞Ect1/E6E7为对照细胞,Western blot检测宫颈癌Hela、Ca Ski、Si Ha、HCC94细胞NRP-1的蛋白表达;通过Lipofectamine^(TM)2000将NRP-1-siRNA瞬时转染Ca Ski细胞,并设置阴性对照组(NC-siRNA)和空白对照组(Control组),转染48 h后,CCK8法检测各组细胞活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及ROS含量; Western blot检测免疫抑制因子TGF-β1及Wnt信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Survivin和Cyclin D1的蛋白表达。结果:宫颈癌细胞中NRP-1的表达均显著高于在Ect1/E6E7细胞中的表达(P<0. 05);转染NRP-1-siRNA的Ca Ski细胞NRP-1的蛋白表达显著低于对照组(P<0. 05);与对照组比较,NRP-1-siRNA组细胞活力显著降低,细胞凋亡率及ROS含量均显著升高,TGF-β1、Wnt1、β-catenin、Survivin和Cyclin D1的蛋白表达均显著降低(P<0. 05)。结论:抑制宫颈癌中NRP-1基因表达可降低癌细胞活力,诱导细胞凋亡,降低免疫抑制分子TGF-β1表达,其机制与提高细胞ROS水平和下调Wnt信号通路有关。

五味子乙素抑制胃癌SNU-1细胞增殖和转移的作用机制研究

目的:观察五味子乙素对胃癌SNU-1细胞增殖和转移的影响,探讨其诱导胃癌SNU-1细胞凋亡的机制。方法:不同浓度五味子乙素组和顺铂组加入到SNU-1细胞中,作用24 h后,MTT法测定药物组对胃癌SNU-1细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测不同浓度的五味子乙素诱导胃癌SNU-1细胞凋亡率,Transwell法检测五味子乙素对SNU-1细胞侵袭的抑制作用,采用间接荧光标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平的变化;Western blot法检测胃癌SNU-1细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、E-cadherin、N-cadherin和MMP-9的表达。结果:与空白对照组比较,10、50和100μg/ml的五味子乙素和顺铂对胃癌SNU-1细胞生长的抑制作用明显,10、50和100μg/ml的五味子乙素作用胃癌SNU-1细胞后,细胞转移能力显著下降,10、50和100μg/ml的五味子乙素作用胃癌SNU-1细胞48 h后均能诱导胃癌SNU-1细胞凋亡;ROS水平随着五味子乙素的浓度增加而增加明显;10、50和100μg/ml的五味子乙素上调Caspase-3、Bax、E-cadherin的表达,下调Bcl-2、N-cadherin和MMP-9的表达。结论:五味子乙素可能是通过Caspase-3级联凋亡途径、线粒体途径和ROS水平提高来诱导胃癌SNU-1细胞凋亡,也可能通过破坏细胞间和基底膜黏附性及增加肿瘤细胞间的稳定性,来抑制胃癌SNU-1细胞的转移能力。

细菌性肺炎儿童外周血中性粒细胞中Wip1的表达和临床意义

目的探讨细菌性肺炎儿童外周血中性粒细胞中Wip1的表达及临床意义。方法选取2016年1月~2017年1月间于我院确诊的细菌性肺炎患儿60例作为病例组,选取同时期健康儿童60例设为对照组,检测两组儿童红细胞沉降率(ESR)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、全血超敏C-反应蛋白(CRP)、血清降钙素原(PCT)水平,应用流式细胞仪检测各组外周血中性粒细胞中Wip1和ROS表达水平,比较组间各指标差异,分析Wip1与其它各指标的相关性,ROC曲线分析外周血中性粒细胞中Wip1表达水平诊断价值。结果与对照组相比,病例组ESR、IL-6、IL-8、TNF-α、CRP及PCT均明显升高(P<0.01)。与对照组相比,病例组中性粒细胞Wip1+百分率明显降低(P=0.0001),病例组患儿中性粒细胞ROS平均荧光强度(MFI)较对照组明显升高(P<0.0001)。Wip1与IL-6、CRP、PCT、ROS呈负相关(P<0.05),与ESR、IL-8、TNF-α无相关性(P>0.05)。ROC曲线分析中性粒细胞中Wip1曲线下面积为0.9536(P<0.0001);中性粒细胞Wip1+百分率的诊断阈值为7.21%,灵敏度和特异性分别为88.33%和90.00%。结论细菌性肺炎儿童外周血中性粒细胞Wip1表达降低,可能与自身ROS及循环中IL-6、CRP及PCT增加有关,并可能是潜在的诊断标志物。

干扰FSCN1基因表达对前列腺癌细胞凋亡、活性氧水平影响的研究

目的探讨干扰FSCN1基因表达对前列腺癌细胞凋亡、活性氧(ROS)水平影响及机制。方法以正常前列腺上皮细胞RWPE-1为对照细胞,通过RT-PCR及Western blot检测前列腺癌LNCaP、DU145和PC-3细胞中FSCN1 mRNA及蛋白表达;以LipofectamineTM 2000为载体,DU145细胞分为si-FSCN1组(靶向抑制FSCN1的小干扰RNAs转染DU145细胞)、阴性对照组(随机序列转染DU145细胞)及空白对照组(未转染的细胞),siRNA转染48 h,Western blot检测FSCN1、PCNA、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα和p-IKKα的蛋白表达。CCK8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。结果与RWPE-1细胞比较,LNCaP、DU145和PC-3细胞中FSCN1 mRNA(1比2.561±0.189、7.183±0.882、4.796±0.567、4.796±0.567)及蛋白表达(0.053±0.007比0.217±0.013、0.654±0.058、0.316±0.035)均升高,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与阴性对照组比较,si-FSCN1组FSCN1表达(0.473±0.052比0.086±0.010)降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与si-FSCN1组比较,空白对照组、阴性对照组细胞活力(0.302±0.033比0.787±0.069、0.764±0.063)均升高,凋亡率(24.54﹪±1.47﹪比3.04﹪±0.36﹪、3.28﹪±0.40﹪)和ROS相对荧光强度(90.04±5.73比47.88±3.62、49.62±4.11)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。与si-FSCN1组比较,空白对照组、阴性对照组PCNA(0.255±0.032比0.654±0.062、0.631±0.058)、NF-κB p65(0.092±0.011比0.296±0.032、0.318±0.037)、p-NF-κB p65(0.042±0.008比0.155±0.018、0.151±0.016)、IKKα(0.112±0.01比0.172±0.020、0.192±0.023)和p-IKKα的蛋白表达(0.051±0.005比0.102±0.011、0.091±0.009)均升高,Cleaved caspase3蛋白表达(0.206±0.018比0.074±0.009、0.085±0.010)均降低,差异具有统计学意义(P均<0.05)。阴性对照组与空白对照组细胞活力、凋亡率、ROS水平及FSCN1、PCNA、Cleaved caspase3、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IKKα和p-IKKα的蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论干扰FSCN1基因表达可降低前列腺癌细胞活力及诱导凋亡,机制可能与ROS水平升高及NF-κB信号下调有关。