Nestin转基因小鼠模型的建立及nestin基因在器官中的表达

目的构建人nestin基因表达载体,制备nestin过表达转基因小鼠。方法以人神经胶质瘤细胞株U251的cDNA为模板,分3段扩增出nestin基因cDNA全序列,并将其克隆入含有强启动子ROSA26的pBROAD3载体,酶切鉴定、测序,除去原核序列,纯化。显微原核注射建立转基因小鼠。PCR验证nestin基因整合,确定建立首建者。将阳性鼠传代。Western blot方法检测F3代转基因小鼠与野生型小鼠主要器官(心、肺、脑、肾)的nestin表达。结果测序结果证明成功构建了受ROSA26启动子调控的nestin转基因载体。出生34只小鼠,PCR检测证实存在首建者2只。Western blot方法证实,与野生型小鼠相比,F3代转基因小鼠脑、肺组织存在较高水平nestin表达。结论首次成功建立nestin过表达转基因小鼠,外源基因可遗传到子代并在脑和肺组织中稳定表达,为深入研究nestin在肿瘤转移、细胞"干性"的维持和细胞的分化等功能提供了良好的实验动物模型。