马氏珠母贝DNA快速一步法(ROSE)提取及ISSR-PCR应用

以马氏珠母贝 (Pinctadamartensii)为材料 ,采用一步法(ROSE)提取DNA ,并将提取的DNA应用于ISSR扩增。结果表明 :ROSE法提取DNA比常用的SDS法简易 ,快捷 ,无污染物产生 ,节省费用99 % ,DNA提取效率相当。ROSE法和常用的SDS法提取的DNA分别用于ISSR分析 ,可以获得一致性很好的扩增效果。因此 ,ROSE法提取DNA是一种适合于海洋贝类大规模提取DNA的有效方法。

高效、快速提取高质量稻曲病菌基因组DNA方法

稻曲病菌[Ustilaginoidea virens(Cooke)Takahashi]培养期间菌丝生长缓慢,且产生大量次生代谢产物,严重影响提取稻曲病菌基因组DNA质量与效率。将一步式提取法(Rapid one-step extraction,ROSE)增加异丙醇、NaAc冷冻沉淀DNA和70%无水乙醇漂洗DNA两个步骤,建立一种高效、快速提取高质量稻曲病菌基因组DNA的方法,即改良ROSE法,并将该方法与稻曲病菌基因组DNA传统提取方法(CTAB法、SDS法、试剂盒法和改良脲素法)在提取步骤、DNA纯度与得率、PCR反应和酶切效率等方面加以比较。结果表明,5种方法均得到稻曲病菌基因组DNA,但改良ROSE法同时具有无毒、环保、低成本、快速获取高质量DNA的优点。改良ROSE法s可用于稻曲病菌分子标记、遗传图谱构建等需短时间内快速获取DNA的分子试验研究,也适用于稻曲病菌基因精细定位、克隆和测序等需高质量DNA的分子试验。