基于RP-UPLC-MS技术的人血清样品脂质组学分析

目的建立基于RP-UPLC-MS技术的人血清样本脂质组学分析方法。方法以人血清为样本,利用甲醇-氯仿(体积比为2∶1,含质量分数为0.01%的BHT)混合溶剂进行脂质提取,优化液相色谱条件及质谱检测参数并对人血清中甘油三酯、甘油磷脂酰胆碱、溶血性甘油磷脂酰胆碱等代表性脂质类成分进行方法学考察。结果建立了以Acquity BEH C_(18)(5 cm×1.0 mm,1.7μm)为分析柱,柱温50℃,以乙腈-异丙醇(体积比为5∶2,含质量分数为1%的甲酸铵)为流动相A,超纯水(含质量分数为1%的甲酸铵)为流动相B,梯度方式洗脱,采用正负离子检测模式电喷雾电离(±ESI)方式进行质谱检测的RP-UPLC-MS人血清样本脂质组学分析方法,且方法学考察结果表明该方法精密度、稳定性及重复性均良好。结论该方法适用于人血清样本的脂质组学研究,为临床疾病脂类生物标志物的寻找奠定了基础。

基于RP-UPLC-MS和HILIC-UPLC-MS的骨疏丹对糖皮质激素性骨质疏松模型大鼠干预作用的尿液代谢组学研究

目的建立反相超高效液相色谱-质谱(RP-UPLC-MS)及亲水相互作用超高效色谱-质谱(HILIC-UPLC-MS)代谢组学方法,研究骨疏丹干预糖皮质性骨质疏松模型大鼠尿液代谢物的变化,探索与该病症密切相关的代谢模式及骨疏丹抗骨质疏松作用的代谢途径。方法基于代谢组学研究策略,建立正常大鼠、糖皮质性骨质疏松模型大鼠和给予骨疏丹干预大鼠尿液的RP-UPLC-MS与HILIC-UPLC-MS代谢指纹谱,采用主成分分析法(PCA)研究给药前后内源性代谢物变化,寻找潜在生物标志物,探讨骨疏丹的作用机制。结果在RP-UPLC-MS模式下发现了如苯乙酰甘氨酸、N2-琥珀酰-L-鸟氨酸等极性较小的代谢物,而在HILIC-UPLC-MS模式下发现了如甜菜碱、次黄嘌呤等极性较大的代谢物,2种检测模式下共发现了22个潜在生物标志物,这些标志物主要和氨基酸代谢、脂代谢、能量代谢、肠道菌群代谢及肾损伤和体内的氧化应激状态相关。而骨疏丹可以调节骨质疏松模型大鼠体内上述代谢通路并使其向正常状态恢复。结论该研究结果表明,整合RP-UPLC-MS和HILIC-UPLC-MS 2种检测手段可以较全面的表征大鼠体内内源性代谢物轮廓,同时也表明代谢组学在中药整体药效评价、作用机制的研究等方面具有很好的应用前景。

原花青素对照品组份的UPLC-MS及RP-HPLC分析

利用UPLC-MS和RP-HPLC方法分析了葡萄籽原花青素对照品组份。对照品使用色谱柱Zorbax Eclipse XDB-C18(4.6×250 mm,5μm),甲醇-水(含0.05%三氟乙酸)作为流动相,梯度洗脱分离后得到8种组份。依据ESI-MS选择性,使用超高效液相色谱-电喷雾质谱联用(UPLC-ESI-MS)区分各化合物组份,鉴定得到3种单体,3种二聚体,1种三聚体,1种二聚体单酯。为研究啤酒酿造用原料酒花中的原花青素提供了对照基础。

灯盏乙素乙酯原料药中主成分含量测定及其有关物质研究

目的建立同时测定灯盏乙素乙酯原料药主成分及其有关物质含量的反向高效液相色谱法,并采用UPLC-MS对灯盏乙素乙酯的主要有关物质进行结构鉴定。方法采用Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）对主成分及其有关物质进行含量测定,柱温25℃,以甲醇-0.2%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min^-1,检测波长为335 nm;采用高分辨液质联用仪对其主要有关物质进行结构鉴定。结果灯盏乙素乙酯与有关物质及其降解产物的分离度良好;灯盏乙素乙酯质量浓度在5.005-1 001 mg·L^-1内与峰面积呈良好线性关系,r^2=0.999 9,平均回收率为99.6%;灯盏乙素乙酯原料药中的主要有关物质为灯盏乙素,含量为0.89%,杂质总量为1.14%。结论该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可用于灯盏乙素乙酯原料药的含量测定及有关物质的检查。

珍珠明目滴眼液及珍珠液中蛋白多肽类成分的分析

目的分析不同厂家珍珠明目滴眼液及珍珠液中蛋白多肽类成分的差异,为保证原料药生产工艺的稳定性,有效地控制珍珠明目滴眼液的质量提供参考依据。方法采用UPLC-Q-TOF MS正离子模式进行分析,鉴定珍珠明目滴眼液及珍珠液中的肽类成分,Acquity UPLC BEH C18（50 mm×2.1 mm,1.7μm）色谱柱,乙腈-0.1%甲醇水溶液作为流动相;柱前衍生化HPLC-DAD法测定珍珠明目滴眼液中16种氨基酸。结果不同生产企业的珍珠明目滴眼液及珍珠液中多肽的相对分子质量（MW）、16种氨基酸分别占总氨基酸量的百分比差异较大。5家企业中3家的原料药珍珠液中肽的MW均小于2 000,另2个厂家珍珠液中肽的MW为500~4 746,以大于2 000的肽为主。7个厂家的珍珠明目滴眼液样品中,2个厂家样品中肽的MW以2 000~4 000为主,并含有4 000以上的肽,另5个厂家样品中不含4 000以上的肽。7个厂家的珍珠明目滴眼液中16种氨基酸质量浓度相对总氨基酸质量浓度的百分比差异较大,2个厂家采用酸/酶水解工艺的珍珠液中脯氨酸与丙氨酸质量浓度的比值〉1,5个厂家采用水直接提取工艺的二者比值小于1。结论建议修订珍珠液质量标准,明确制备工艺为水直接提取,确保滴眼液中的有效成分多肽（MW在500~5 000）,珍珠液及珍珠明目滴眼液质量标准增加检查项脯氨酸与丙氨酸质量浓度的比值及定量测定项氨基酸总量,以有效控制珍珠明目滴眼液的质量,确保其有效性。

UPLC-MS法测定胸腺肽注射剂中胸腺肽α_1的含量

目的:建立UPLC-MS法测定胸腺肽注射剂中胸腺肽α1(Tα1)的含量。方法:选用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),以0.1%甲酸-水(v/v)为流动相A,0.1%甲酸-25%乙腈(v/v)为流动相B,梯度洗脱,流速0.2 mL.min-1,选用Waters Acquity UPLC-三级串联四极杆色谱质谱联用仪的选择离子监测(SIM)扫描方式进行监测,电喷雾离子源,正离子方式,选择监测离子为m/z 778.5。结果:胸腺肽α1的线性范围为0.05～0.5μg.mL-1(r>0.99),检出限为0.02μg.mL-1,定量限为0.05μg.mL-1;平均加样回收率为102.0%,RSD小于5%;各种贮存条件下注射剂溶液中胸腺肽α1均较稳定。结论:该方法适用于胸腺肽注射剂中胸腺肽α1的测定。