长链非编码RNA RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞和永生化胃上皮细胞GES-1中RP11-497E19.1表达水平,筛选表达最高的细胞进行后续实验。将HS-746T细胞分为si-NC组和si-RP11-497E19.1组,分别转染阴性对照寡核苷酸或RP11-497E19.1小干扰RNA。集落形成实验和Transwell实验分析转染HS-746T细胞的增殖、侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证RP11-497E19.1与微小RNA(miR)-545-5p的靶向关系。RT-qPCR检测转染HS-746T细胞miR-545-5p的表达。Western blot检测转染HS-746T细胞间质表皮转化因子(c-Met)/胆绿素还原酶(BVR)/活化复制因子2(ATF-2)分子通路相关蛋白的表达。结果:与GES-1细胞比较,HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞中RP11-497E19.1表达水平均上升,且HS-746T细胞RP11-497E19.1表达水平最高(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-RP11-497E19.1组HS-746T细胞活力和细胞侵袭数降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实RP11-497E19.1靶向结合miR-545-5p,可负向调控miR-545-5p表达(P<0.05)。与si-NC组比较,si-RP11-497E19.1组HS-746T细胞c-Met/BVR/ATF-2分子通路蛋白c-Met、BVR、p-ATF-2、锌指蛋白1(Snail1)、锌指蛋白2(Snail2)表达降低(均P<0.05)。结论:胃癌细胞中RP11-497E19.1呈高表达,沉默RP11-497E19.1通过靶向miR-545-5p/c-Met/BVR/ATF-2分子通路抑制胃癌HS-746T细胞的增殖及侵袭。

长链非编码RNA RP11-641D5.1通过靶向微小RNA-486-5p调控急性髓系白血病细胞增殖、细胞周期和免疫逃逸实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-641D5.1对急性髓系白血病细胞增殖、细胞周期及免疫逃逸的调控作用及机制。方法:采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析RP11-641D5.1在急性髓系白血病细胞株(HL-60、SKM-1、THP-1、KG-1、NB4)和人骨髓基质细胞HS-5中的表达量。分别将阴性质粒(NC组)和RP11-641D5.1质粒(RP11-641D5.1组)转染至SKM-1细胞。采用集落形成实验和流式细胞术检测转染后各组SKM-1细胞增殖和细胞周期。采用酶联免疫吸附实验检测两组细胞干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)的表达量。采用LncCeRBase软件分析RP11-641D5.1与miR-486-5p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验验证。采用RT-qPCR检测RP11-641D5.1对微小RNA(miR)-486-5p表达的调控作用。采用蛋白质印迹(Western blot)检测酪氨酸激酶(JAK)-信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路中磷酸化酪氨酸激酶(p-JAK)、磷酸化转录激活因子(p-STAT)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、核内原癌基因c-myc蛋白的表达。结果:相对于HS-5细胞,急性髓系白血病细胞株HL-60、SKM-1、THP-1、KG-1、NB4中RP11-641D5.1表达较低,且SKM-1细胞中表达最低(均P<0.05),故后续采用SKM-1细胞进行实验。与NC组比较,过表达RP11-641D5.1能够抑制SKM-1细胞增殖和细胞周期进展,促进细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的表达(均P<0.05)。RP11-641D5.1能够靶向结合miR-486-5p(P<0.05)。与NC组比较,RP11-641D5.1组细胞中miR-486-5p表达下调,JAK-STAT3信号通路相关蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论:RP11-641D5.1在急性髓系白血病中表达水平降低,可能通过下调miR-486-5p表达抑制急性髓系白血病细胞增殖、细胞周期进展和免疫逃逸。

LncRNA RP11-686D22.10与乳腺癌患者生存期相关并影响乳腺癌细胞系的增殖和侵袭

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)RP11-686D22.10表达水平与乳腺癌患者生存期的关系,探讨过表达RP11-686D22.10对乳腺癌细胞系增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法GEPIA数据库分析RP11-686D22.10表达水平与乳腺癌患者生存期的关系。RT-qPCR检测乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系MCF7、SKBR3、HCC1937、BT549和MB-MDA-468中RP11-686D22.10的表达量。选择RP11-686D22.10表达水平最低的SKBR3细胞,分别转染对照质粒(NC组)和RP11-686D22.10过表达质粒(RP11-686D22.10组)。CCK-8法和Transwell小室法分别检测乳腺癌细胞增殖及侵袭。Linc2Go数据库预测RP11-686D22.10的靶向微小RNA(miRNA),双荧光素酶报告基因实验检测RP11-686D22.10和miR-454-3p的靶向关系。RT-qPCR检测miR-454-3p表达量。Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白质表达量。结果与RP11-686D22.10低表达乳腺癌患者相比,RP11-686D22.10高表达患者的总生存期较长(P<0.01),并且无病生存期较长(P<0.01)。MCF7、SKBR3、HCC1937、BT549和MB-MDA-468乳腺癌细胞中RP11-686D22.10表达量低于MCF-10A细胞(P<0.05),SKBR3细胞中RP11-686D22.10表达最低(P<0.01)。与NC组比较,RP11-686D22.10组SKBR3细胞增殖能力降低(P<0.05),并且细胞侵袭能力降低(P<0.01)。RP11-686D22.10能够靶向结合miR-454-3p(P<0.01)。与NC组比较,RP11-686D22.10组miR-454-3p表达量降低(P<0.01),Wnt/β-catenin信号通路蛋白CCND1、β-catenin、JUN、AXIN2和MMP2表达量降低。结论RP11-686D22.10表达水平与乳腺癌患者生存期密切相关,过表达RP11-686D22.10通过靶向调控miR-454-3p抑制乳腺癌细胞系的增殖及侵袭。

敲减lncRNA RP11-626G11.3通过调控miR-532-3p抑制人肾癌细胞系的增殖和迁移

目的研究长链非编码RNA(lncRNA)RP11-626G11.3在肾癌组织和细胞系中的表达,探究敲减RP11-626G11.3对肾癌细胞生物学行为的影响。方法用GEPIA数据库分析RP11-626G11.3在肾癌组织和癌旁组织中的表达情况,用TCGA数据库分析RP11-626G11.3表达水平与肾癌患者生存期的关系。QPCR检测RP11-626G11.3在多种肾癌细胞系中的表达。选择RP11-626G11.3表达最高的肾癌细胞系,分别转染对照质粒(si-NC组)和RP11-626G11.3沉默质粒(si-RP11-626G11.3组)。MTT法和细胞划痕实验检测细胞的增殖和迁移。通过生物信息学方法找到与RP11-626G11.3结合的微小RNA(miRNA),并用双荧光素酶报告实验进行验证。QPCR检测两组细胞中miR-532-3p的表达。Western blot检测两组细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白的表达。结果与癌旁组织相比,肾癌组织中RP11-626G11.3表达量上调(P<0.01)。与RP11-626G11.3高表达的患者相比,RP11-626G11.3低表达的患者生存期较长(P<0.01)。与永生化肾小管上皮细胞相比,肾癌细胞系中RP11-626G11.3表达量均上调(P<0.01),OS-RC-2细胞中RP11-626G11.3的表达量最高(P<0.01)。与si-NC组相比,si-RP11-626G11.3组OS-RC-2细胞活力明显降低(P<0.05),细胞迁移率明显降低(P<0.01)。RP11-626G11.3靶向结合miR-532-3p(P<0.01)。相比si-NC组,si-RP11-626G11.3组OS-RC-2细胞中miR-532-3p表达明显上调(P<0.01),Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Axin2、C-myc、cyclin D1、MMP7表达水平下降。结论RP11-626G11.3在肾癌组织和细胞系中表达量升高,敲减RP11-626G11.3通过调控miR-532-3p表达抑制肾癌细胞系的增殖和迁移。

LncRNA RP11-490M8.1在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞增殖的影响

目的:确定lncRNA RP11-490M8.1在乳腺癌中的表达情况及其在乳腺癌细胞增殖中的作用。方法:基于癌症基因图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和Kaplan-Meier plotter数据库分析RP11-490M8.1在乳腺癌中的表达情况及与患者预后的关系;qRT-PCR检测RP11-490M8.1在乳腺癌和癌旁组织中的表达;CCK8和克隆形成实验检测过表达和敲低RP11-490M8.1对乳腺癌细胞增殖的影响。结果:与癌旁组织相比,RP11-490M8.1在乳腺癌组织中表达明显下调,且RP11-490M8.1低表达和较差的总生存期(overall survival,OS)密切相关(P=0.034);RP11-490M8.1表达水平与乳腺癌患者的临床分期呈负相关,而与雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体-2的表达以及年龄均无相关性;过表达RP11-490M8.1显著抑制乳腺癌细胞的增殖,敲低RP11-490M8.1表达则促进其增殖。结论:RP11-490M8.1在乳腺癌中可能发挥抑癌基因的作用,是潜在的乳腺癌预后分子和治疗靶点。

lncRNA RP11-297P16.4促进肺腺癌细胞侵袭及迁移的机制探讨

目的:探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP11-297P16.4对人肺腺癌细胞H1299和A549侵袭及迁移的影响。方法:利用qRT-PCR检测在肺腺癌细胞H1299、A549及人正常支气管上皮细胞HBEC中RP11-297P16.4的相对表达水平;设计合成针对RP11-297P16.4的特异性shRNA,慢病毒感染建立稳定敲低lncRNA RP11-297P16.4的H1299、A549细胞;将其分为对照/H1299组、实验/H1299组、对照/A549组、实验/A549组,对照组感染shRNA-NC,实验组感染shRNA-RP11-297P16.4;qRT-PCR检测shRNA敲低效率;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测RP11-297P16.4对肺腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响;采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2和-9的mRNA和蛋白质表达水平。结果:与对照组相比,RP11-297P16.4在肺腺癌细胞中高表达,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.01);qRT-PCR分析确定,shRNA敲低后RP11-297P16.4的mRNA表达水平显著降低(P<0.001,P<0.001);划痕实验表明24 h、48 h实验组细胞伤口愈合率均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01;P<0.001,P<0.001);Transwell小室检测结果显示,实验组细胞侵袭数量显著少于对照组,差异有统计学意义(P<0.001,P<0.001);qRT-PCR和蛋白印迹法结果显示,实验组细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白质表达量均低于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:lncRNA RP11-297P16.4通过促进MMP-2和MMP-9 mRNA和蛋白表达来增强H1299、A549细胞的侵袭和迁移能力。

过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株的构建

目的构建过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株。方法根据lncRNA RP11-521C20.3基因序列,设计合成引物并进行扩增。将目的基因与Sbf I和EcoRI酶切的载体连接,构建pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE重组质粒,转染293T细胞,包装含lncRNA RP11-521C20.3质粒重组体的慢病毒。构建shRNA(RP11-521C20.3),连接到AgeI和EcoRI双酶切后的pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE载体上,经鉴定后转染293T细胞。再利用慢病毒介导,构建重组质粒pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE和pSLenti-U6-shRNA(RP11-521C20.3)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,导入A549细胞。最后采用RT-qPCR技术在基因水平检测lncRNA RP11-521C20.3的表达。结果OV-lncRNA RP11-521C20.3组(过表达组)的lncRNA RP11-521C20.3 mRNA表达量高于NC-lncRNA RP11-521C20.3组(过表达对照组)(P<0.001),差异倍数为(20.43±0.69)。sh-lncRNA RP11-521C20.3组(敲减组)的lncRNA RP11-521C20.3mRNA表达量低于sh-NC组(敲减对照组)(P<0.001),差异倍数为(0.21±0.08)。结论成功构建了lncRNA RP11-521C20.3过表达及敲减稳转细胞株。为后续研究lncRNA RP11-521C20.3在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用奠定重要基础。

RP11-444D3.1与SOX5基因共表达激活cofilin/LIMK/Rac信号通路介导子宫内膜癌侵袭机制研究

目的:研究RP11-444D3.1与SOX5基因共表达对子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭的影响,并探究其分子机制。方法:通过过表达RP11-444D3.1和SOX5基因的腺病毒转染子宫内膜癌细胞Ishikawa,构建过表达RP11-444D3.1和SOX5基因及共表达RP11-444D3.1、SOX5基因的子宫内膜癌细胞,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中RP11-444D3.1和SOX5基因mRNA表达水平,通过划痕实验和Transwell实验检测过表达RP11-444D3.1和SOX5基因的子宫内膜癌细胞的侵袭能力,并通过Western blot法检测cofilin/LIMK/Rac信号通路蛋白的相对表达量。结果:与子宫内膜癌细胞Ishikawa相比,过表达RP11-444D3.1与SOX5基因及共表达RP11-444D3.1、SOX5基因的子宫内膜癌细胞具有更强的侵袭能力(均P<0.05),同时,cofilin蛋白的表达降低,LIMK/Rac蛋白的磷酸化水平上调。结论:RP11-444D3.1与SOX5基因均可激活cofilin/LIMK/Rac信号通路,共表达可增强对cofilin/LIMK/Rac信号通路的激活作用,介导子宫内膜癌细胞侵袭。

lncRNA RP11-388M20.2促进胃癌细胞耐药及其作用机制研究

评价和分析lncRNA RP11-388M20.2促进胃癌细胞耐药及其作用机制。方法 采用RT-PCR 检测人胃腺癌细胞株SGC-7901及正常胃黏膜细胞中RP11-388M20.2、Prss8的检测情况,并对其增殖活动进行检测。构建RP11-388M20.2表达沉默慢病毒载体,以空载进行对照。分别在培养基中加入2.5、5、10、20、40和80 mg/L的顺铂联合培养,记录48h后生存细胞百分比。结果 RP11-388M20.2和Prss8在人胃癌细胞株中的表达水平明显比较于正常胃黏膜细胞中的表达水平(P<0.05),其中RP11-388M20.2在人胃癌细胞株中为(1.086±0.092),正常胃黏膜细胞中为(0.381±0.063)。Prss8在人胃癌细胞株中为(4.528±0.459),正常胃黏膜细胞中(1.000±0.125)。由此可见过表达Prss8后,下调的OD值上升,从而说明Prss8能够恢复RP11-388M20.2的抑制作用。结论 lncRNA RP11-388M20.2可通过促进Prss8 的表达调节胃癌细胞的增殖和化疗耐药,有助于阐明RP11-388M20.2的生物学特征,有助于理解RP11-388M20.2在胃癌耐药中的作用及分子机制,并可能为胃癌化疗耐药的防治提供新线索和潜在的干预靶标。

LncRNA RP11-259P1.1在小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨长链非编码RNA RP11-259P1.1(lncRNA RP11-259P1.1)在小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)患者组织中的表达与患者临床病理特征的关系及其在化疗耐药中的作用。方法:收集2012年1月至2016年12月在成都市第六人民医院和成都军区总医院158例行支气管镜活检、穿刺活检和手术切除的SCLC患者的癌组织、42例SCLC患者手术切除的癌旁组织标本及40例正常肺组织,采用qPCR法检测癌及癌旁组织标本中lncRNA RP11-259P1.1的表达,χ2检验分析lncRNA RP11-259P1.1表达与SCLC患者临床病理特征及化疗耐药的关系。单因素及多因素Cox回归分析lncRNA RP11-259P1.1表达与SCLC患者预后的关系。结果:lncRNA RP11-259P1.1在SCLC组织中的表达水平显著高于癌旁组织及正常肺组织(均P<0.01)。化疗敏感者癌组织中lncRNA RP11-259P1.1的表达水平明显低于化疗耐药者(P<0.05)。lncRNA RP11-259P1.1表达与SCLC患者的性别、年龄无关,与肿瘤分期、转移及化疗敏感性显著相关(均P<0.05);高表达lncRNA RP11-259P1.1患者的PFS及OS均显著短于低表达患者[(12.25±1.83)vs(22.29±1.58)个月和(23.55±1.35)vs(31.75±2.43)个月,均P<0.01]。lncRNA RP11-259P1.1表达、肿瘤分期及远处转移是SCLC患者独立的预后因素(均P<0.05)。结论:lncRNA RP11-259P1.1在SCLC组织中高表达,与SCLC患者的化疗敏感性及预后相关,可能是SCLC患者潜在的预后评估的生物标志物。

长链非编码RNA RP11-110G21.1在结肠癌中的表达及其机制研究

目的分析结肠癌组织与癌旁组织中长链非编码RNA RP11-110G21.1(lncRNA RP11-110G21.1)差异表达及其作用机制。方法收集2011年8月-2015年12月上海市松江区中心医院消化外科诊治结肠癌患者120例临床资料,采用qRT-PCR法检测结肠癌及其癌旁组织中lncRNA RP11-110G21.1表达水平,观察lncRNA RP11-110G21.1表达与临床病理特征的关系,分析lncRNA RP11-110G21.1表达对患者预后的影响。采用脂质体Lipofectamin 2000介导的方法将lncRNA RP11-110G21.1 inhibitor转染结肠癌细胞系LoVo,通过CCK-8法检测下调lncRNA RP11-110G21.1表达对LoVo细胞增殖能力的影响,Transwell小室法检测下调lncRNA RP11-110G21.1表达对LoVo细胞迁移、侵袭能力的影响。通过Logistic回归分析影响结肠癌预后危险因素。结果与癌旁组织组比较,结肠癌组lncRNA RP11-110G21.1表达水平显著升高(t=27.868,P=0.000);LoVo细胞转染lncRNA RP11-110G21.1 inhibitor后,细胞增殖、迁移、侵袭能力降低(F=85.177,491.168,372.789,P<0.01);lnc RNA RP11-110G21.1在分化程度低、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者中表达量高于分化程度中高、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期患者(χ^2/P=4.360/0.035、26.407/0.000);Kaplan-Meier结果显示lncRNA RP11-110G21.1高表达亚组3年内存活率低于低表达亚组(27.6%vs.61.4%,χ^2=13.212,P=0.000);多因素Logistic回归分析显示,TNM分期高、分化程度低、lncRNA RP11-110G21.1高表达是影响结肠癌患者不良预后的危险因素(OR=2.726,2.492,1.576,P均<0.01)。结论结肠癌组织中lncRNA RP11-110G21.1高表达,与患者分化程度、TNM分期及预后有关,降低lncRNA RP11-110G21.1表达可抑制结肠癌增殖、侵袭、迁移能力。

长链非编码RNA RP11-191L9.4促进前列腺癌PC-3细胞的迁移和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA RP11-191L9.4对前列腺癌PC-3细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:荧光定量PCR检测RP11-191L9.4 siRNA在PC-3细胞中的敲除效率;通过MTT实验和克隆形成实验观察在PC-3细胞中低表达RP11-191L9.4对其增殖的影响;通过transwell细胞迁移实验检测敲低RP11-191L9.4的表达对PC-3细胞的迁移能力影响;通过Matrigel侵袭实验检测敲低RP11-191L9.4的表达对PC-3细胞侵袭能力的影响。结果:向前列腺癌细胞系PC-3中转染RP11-191L9.4 siRNA 48 h后,q PCR检测PC-3细胞中RP11-191L9.4明显低表达;MTT及克隆形成实验结果显示,敲低RP11-191L9.4的表达能显著抑制PC-3细胞的增殖;transwell迁移实验结果显示,敲低RP11-191L9.4的表达能减弱PC-3细胞的迁移能力;Matrigel胶细胞侵袭实验结果显示,敲低RP11-191L9.4的表达能减弱PC-3细胞的侵袭能力。结论:转染RP11-191L9.4 siRNA能显著抑制PC-3细胞中RP11-191L9.4的表达,而敲低RP11-191L9.4的表达可显著抑制前列腺癌细胞PC-3增殖、迁移及侵袭能力。

lncRNA RP11-86H7.1在川崎病诊断中的临床意义

目的:探讨lncRNA RP11-86H7.1在川崎病(KD)患者血清中的表达及其与临床病理特征及预后的关系。方法:筛选KD特异相关的循环lncRNA,分KD治疗前患儿组、KD治疗后患儿组、普通发热患儿组及健康儿童组,采用qPCR检测各组血清lncRNA RP11-86H7.1相对表达。分析血清lncRNA RP11-86H7.1相对表达与KD临床病理特征间关系;绘制ROC曲线,分析血清lncRNA RP11-86H7.1表达水平对KD的诊断效能。结果:KD急性患儿组血清lncRNA RP11-86H7.1相对表达量高于各对照组(P<0.05);年龄和性别比例与低表达组比较差异无统计学意义(P>0.05);qPCR发现lncRNA RP11-86H7.1在KD急性期患儿血清中表达水平明显高于KD恢复期、健康儿童及发热儿童组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:血清lncRNA RP11-86H7.1在KD患者中表达上调,其可作为KD早期诊断和评估预后的潜在的生物标志物。

TLR4/NF-κB信号通路激活LncRNA RP11-20G6调控慢性阻塞性肺疾病气道炎症和重塑

目的探讨LncRNA RP11-20G6.3和Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路在调控慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症和重塑中的作用。方法采用野生型(WT)和TLR4基因敲除(KO)C57BL/6雄性小鼠为研究对象,构建COPD模型。采用HE染色和Masson三色染色进行组织学评价;免疫印迹分析TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的IL-1β、IL-6和TNF-α水平。通过RNA测序与功能富集分析确定差异表达的LncRNAs,利用RNAhybrid对内源竞争RNA(ceRNA)网络进行预测。结合荧光素酶报告探讨基因之间的关系。结果在COPD模型中,与WT小鼠相比,TLR4-/-小鼠肺组织炎症减弱,肺组织NF-κB相关蛋白表达、BALF中炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)]水平以及Masson三色染色面积降低。RNA测序与功能富集分析确定RP11-20G6.3是差异表达lncRNAs之一,RP11-20G6.3在COPD患者的肺组织中上调,并与FEV1/用力肺活量的比值(FEV1%)相关(ρ=0.549,P=0.047)。RP11-20G6.3质粒干预加重了TLR4-/-COPD小鼠肺组织炎症,以及支气管周围Masson三色面积和BALF中炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)水平提高。荧光素酶报告基因检测显示,RP11-20G6.3在COPD中充当miR-34c-5p的ceRNA,并通过海绵作用使后者上调Col1a1。结论TLR4/NF-κB将COPD损伤信号传递并激活下游RP11-20G6.3/miR-34c-5p/Col1a1的ceRNA网络触发气道炎症、重塑。

长链非编码RNA RP11-554D14.7对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡能力的影响

目的:研究lncRNA RP11-554D14.7在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况,及其对NSCLC细胞功能的影响和分子机制。方法:实时定量PCR用于检测lncRNA RP11-554D14.7在NSCLC组织及细胞中的表达水平;CCK8、集落形成实验检测RP11-554D14.7对NSCLC细胞增殖能力的影响;流式细胞技术检测RP11-554D14.7对NSCLC细胞凋亡能力的影响;生物信息学分析和荧光素酶报告基因技术研究RP11-554D14.7对miR-21的调控。结果:RP11-554D14.7在NSCLC组织及细胞中表达下调,上调RP11-554D14.7的表达抑制NSCLC细胞增殖并诱导细胞凋亡;miR-21可直接结合到RP11-554D14.7的序列中。结论:下调的RP11-554D14.7在NSCLC的发生发展过程中可能是一个抑癌基因,可作为NSCLC一个候选的治疗靶点。

LncRNA RP11-543N12.1与CDH13在老年阿尔茨海默病病人中的表达及其与炎性因子、认知功能的相关性

目的探讨长链非编码RNA RP11-543N12.1(LncRNA RP11-543N12.1)与钙黏蛋白13基因(CDH13)在老年阿尔茨海默病(AD)病人中的表达及其与血清炎性因子、认知功能的相关性。方法选取2016年10月—2019年10月联勤保障部队庐山康复疗养中心收治的120例AD病人为AD组,根据总体衰退量表分为轻度AD组(50例)、中度AD组(39例)、重度AD组(31例),根据简易精神状态量表(MMSE)将AD病人分为轻度认知功能障碍组(60例)、中度认知功能障碍组(40例)、重度认知功能障碍组(20例),同时选取同期体检的健康志愿者70名为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清RP11-543N12.1、CDH13 mRNA的表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Addenbrooke认知评估量表第3版(ACE-Ⅲ)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、MMSE评分评估病人认知功能。采用Pearson法分析血清RP11-543N12.1、CDH13与血清炎性因子、认知功能评分的相关性。结果AD组血清RP11-543N12.1、CDH13 mRNA表达水平明显高于对照组(P<0.05),轻度AD组、中度AD组、重度AD组RP11-543N12.1、CDH13 mRNA表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,AD组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平均明显升高(P<0.05),MMSE、ACE-Ⅲ、MoCA评分均明显降低(P<0.05);与轻度认知功能障碍组比较,中度认知功能障碍组与重度认知功能障碍组血清RP11-543N12.1、CDH13 mRNA表达量明显升高(P<0.05)。RP11-543N12.1、CDH13与IL-6、IL-8、TNF-α呈正相关(P<0.05),RP11-543N12.1与MMSE、ACE-Ⅲ、MoCA评分呈负相关(P<0.05),CDH13与MMSE评分呈负相关(P<0.05)。结论AD病人血清RP11-543N12.1与CDH13表达水平增高,其表达量与炎症反应及认知功能损害密切相关。

3-O-C12-HSL通过PPARγ拮抗树突状细胞表达RP11-367F23.2

目的 研究N-3-氧代十二烷酰-L-同型丝氨酸内酯(3-O-C 12 -HSL)是否抑制单核细胞来源树突状细胞(Mo-DCs)表达RP11-367F23.2,该抑制作用是否通过过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)介导。方法 采用密度梯度离心法分离单核细胞来源的Mo-DCs;将Mo-DCs细胞分为4组:脂多糖(LPS)组、3-O-C 12 -HSL组、GW9662组和PBS组,18 h后收集细胞;荧光定量PCR检测4组中RP11-367F23.2表达情况。结果 Mo- DCs经3-O-C 12 -HSL刺激后,RP11-367F23.2表达量降低,3-O-C 12 -HSL组和LPS组RP11-367F23.2表达量比较,差异有统计学意义( P <0.05);Mo-DCs经GW9662处理后,细胞中的RP11-367F23.2表达量升高,3-O-C 12 -HSL组和GW9662组RP11-367F23.2表达量比较,差异有统计学意义( P <0.05)。结论 3-O-C 12 -HSL通过PPARγ拮抗Mo-DCs表达RP11-367F23.2。

长链非编码RNA RP11-739N20.2对肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA RP11-739N20.2对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞(NCI-H1975、NCI-H1299、NCI-H157和A549)的RP11-739N20.2水平;脂质体法向A549细胞转染3条靶向RP11-739N20.2的小干扰RNA(siRNA)及阴性对照序列(si-NC)后经qPCR筛选干扰效果最显著的siRNA片段进行功能实验。根据转染情况将A549细胞分为转染siRNA片段的干扰组、转染si-NC的阴性对照(NC)组和未转染的空白对照(Blank)组,活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活力、划痕愈合率和穿膜细胞数以评估增殖和迁移侵袭能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、β-catenin和wnt-1的水平。结果NSCLC细胞的RP11-739N20.2水平均高于BEAS-2B细胞(P<0.05),选取RP11-739N20.2水平最高的A549细胞进行后续的干扰实验;A549细胞转染siRNA-1~3后的RP11-739N20.2水平均低于转染si-NC的细胞及未转染细胞(P<0.05),选取RP11-739N20.2水平最低的siRNA-1片段进行后续功能实验。干扰组的RP11-739N20.2水平、划痕愈合率和穿膜细胞数分别为0.354±0.022、(33.179±3.635)%和(96.597±11.031)个,均低于Blank组的1.021±0.027、(66.396±3.723)%和(187.473±17.116)个及NC组的1.036±0.037、(62.025±4.334)%和(182.952±19.593)个,差异有统计学意义(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,干扰组A549细胞的MMP-2、MMP-9、β-catenin和wnt-1的水平降低(P<0.05);Blank组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论NSCLC细胞中RP11-739N20.2高表达且发挥促癌作用,通过RNA干扰下调其水平可导致增殖和侵袭迁移能力减弱,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

LncRNARP11-79H23.3在膀胱癌细胞中的作用及其发生、发展的研究

背景与目的:虽然许多长链非编码RNA(long non-coding RNA,lnc RNA)的异常表达与膀胱癌的发生有密切关系,但对于lnc RNA RP11-79H23.3暂未见报道。该研究旨在探讨lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌EJ细胞中的作用及其发生、发展的机制。方法:采用微阵列方法对4对膀胱癌患者的癌和癌旁组织进行组学分析,随后用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测膀胱癌组织、癌旁组织及正常人膀胱上皮细胞sv-HUC-1、膀胱癌EJ细胞中RP11-79H23.3的表达。通过转染p IRES2-RP11-79H23.3上调该基因后,采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Ed U的方法检测EJ细胞的增殖活性,通过Transwell小室和平板划痕实验分别检测EJ细胞的侵袭和迁移能力,应用流式细胞术、Hoechst33342及Tunel检测细胞凋亡,应用细胞免疫荧光检测PTEN在膀胱癌细胞中的定位,采用鬼笔环肽染色观察细胞骨架形成,应用蛋白[质]印迹法(Western blot)分析过表达RP11-79H23.3后EJ细胞中PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达情况。结果:Lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌组织和膀胱癌EJ细胞中表达下调(P<0.001,P<0.01),p IRES2-RP11-79H23.3转染EJ细胞结果显示,RP11-79H23.3的表达量较转染前显著增加(P<0.01)。上调RP11-79H23.3的表达可诱导膀胱癌EJ细胞的凋亡,相反,转染p IRES2-EGFP可促进EJ细胞的增殖、侵袭和迁移能力,同时,Western blot结果显示,转染p IRES2-RP11-79H23.3后可上调PTEN在EJ细胞中的表达,下调p-PI3K、p-AKT及p-Gsk3β蛋白的表达(P<0.05)。结论:Lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌组织和膀胱癌EJ细胞中低表达(P<0.001,P<0.01),并且过表达RP11-79H23.3会降低膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。提示lnc RNA RP11-79H23.3在膀胱癌恶性肿瘤中发挥重要的作用,可能会成为治疗膀胱癌的药物作用靶点。

RP11-366L20.3通过NF-κB通路调控E-cadherin表达

目的研究长链非编码RNA RP11-366L20.3在调控炎症因子表达中的作用。方法运用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激THP-1细胞6 h,然后收集细胞提取RNA并通过RT-qPCR筛选上调表达的长链非编码RNA,RACE(c DNA末端快速扩增)获取其基因全长,Northern blot验证基因的真实长度和LPS刺激效果,细胞通路抑制剂分析其转录调控通路和胞内分布,过表达和siRNA处理细胞分析RP11-366L20.3调控的下游炎症因子及机理。结果筛选出一个长链非编码RNA RP11-366L20.3,LPS刺激能上调该基因的表达,RACE扩增全长为833 bp,Northern blot也验证了RACE的实验结果,RP11-366L20.3主要分布于细胞核,其基因的转录受到NF-κB信号通路调控;同时RP11-366L20.3是一个TLR4通路的非编码RNA,过表达RP11-366L20.3能降低E-cadherin的基因表达,而siRNA敲低RP11-366L20.3则能上调E-cadherin的基因表达,RIP实验表明RP11-366L20.3能与P50蛋白直接结合,LPS刺激能增强RP11-366L20.3与p50的结合,从而抑制E-cadherin的基因表达。结论长链非编码RNA RP11-366L20.3通过NF-κB通路因子P50调控E-cadherin的基因表达。