长链非编码RNA RP11-641D5.1通过靶向微小RNA-486-5p调控急性髓系白血病细胞增殖、细胞周期和免疫逃逸实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-641D5.1对急性髓系白血病细胞增殖、细胞周期及免疫逃逸的调控作用及机制。方法:采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析RP11-641D5.1在急性髓系白血病细胞株(HL-60、SKM-1、THP-1、KG-1、NB4)和人骨髓基质细胞HS-5中的表达量。分别将阴性质粒(NC组)和RP11-641D5.1质粒(RP11-641D5.1组)转染至SKM-1细胞。采用集落形成实验和流式细胞术检测转染后各组SKM-1细胞增殖和细胞周期。采用酶联免疫吸附实验检测两组细胞干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)的表达量。采用LncCeRBase软件分析RP11-641D5.1与miR-486-5p的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验验证。采用RT-qPCR检测RP11-641D5.1对微小RNA(miR)-486-5p表达的调控作用。采用蛋白质印迹(Western blot)检测酪氨酸激酶(JAK)-信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路中磷酸化酪氨酸激酶(p-JAK)、磷酸化转录激活因子(p-STAT)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)、核内原癌基因c-myc蛋白的表达。结果:相对于HS-5细胞,急性髓系白血病细胞株HL-60、SKM-1、THP-1、KG-1、NB4中RP11-641D5.1表达较低,且SKM-1细胞中表达最低(均P<0.05),故后续采用SKM-1细胞进行实验。与NC组比较,过表达RP11-641D5.1能够抑制SKM-1细胞增殖和细胞周期进展,促进细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的表达(均P<0.05)。RP11-641D5.1能够靶向结合miR-486-5p(P<0.05)。与NC组比较,RP11-641D5.1组细胞中miR-486-5p表达下调,JAK-STAT3信号通路相关蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论:RP11-641D5.1在急性髓系白血病中表达水平降低,可能通过下调miR-486-5p表达抑制急性髓系白血病细胞增殖、细胞周期进展和免疫逃逸。

LncRNA RP11-686D22.10与乳腺癌患者生存期相关并影响乳腺癌细胞系的增殖和侵袭

目的分析长链非编码RNA(lncRNA)RP11-686D22.10表达水平与乳腺癌患者生存期的关系,探讨过表达RP11-686D22.10对乳腺癌细胞系增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法GEPIA数据库分析RP11-686D22.10表达水平与乳腺癌患者生存期的关系。RT-qPCR检测乳腺上皮细胞系MCF-10A和乳腺癌细胞系MCF7、SKBR3、HCC1937、BT549和MB-MDA-468中RP11-686D22.10的表达量。选择RP11-686D22.10表达水平最低的SKBR3细胞,分别转染对照质粒(NC组)和RP11-686D22.10过表达质粒(RP11-686D22.10组)。CCK-8法和Transwell小室法分别检测乳腺癌细胞增殖及侵袭。Linc2Go数据库预测RP11-686D22.10的靶向微小RNA(miRNA),双荧光素酶报告基因实验检测RP11-686D22.10和miR-454-3p的靶向关系。RT-qPCR检测miR-454-3p表达量。Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白质表达量。结果与RP11-686D22.10低表达乳腺癌患者相比,RP11-686D22.10高表达患者的总生存期较长(P<0.01),并且无病生存期较长(P<0.01)。MCF7、SKBR3、HCC1937、BT549和MB-MDA-468乳腺癌细胞中RP11-686D22.10表达量低于MCF-10A细胞(P<0.05),SKBR3细胞中RP11-686D22.10表达最低(P<0.01)。与NC组比较,RP11-686D22.10组SKBR3细胞增殖能力降低(P<0.05),并且细胞侵袭能力降低(P<0.01)。RP11-686D22.10能够靶向结合miR-454-3p(P<0.01)。与NC组比较,RP11-686D22.10组miR-454-3p表达量降低(P<0.01),Wnt/β-catenin信号通路蛋白CCND1、β-catenin、JUN、AXIN2和MMP2表达量降低。结论RP11-686D22.10表达水平与乳腺癌患者生存期密切相关,过表达RP11-686D22.10通过靶向调控miR-454-3p抑制乳腺癌细胞系的增殖及侵袭。

RP11-444D3.1与SOX5基因共表达激活cofilin/LIMK/Rac信号通路介导子宫内膜癌侵袭机制研究

目的:研究RP11-444D3.1与SOX5基因共表达对子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭的影响,并探究其分子机制。方法:通过过表达RP11-444D3.1和SOX5基因的腺病毒转染子宫内膜癌细胞Ishikawa,构建过表达RP11-444D3.1和SOX5基因及共表达RP11-444D3.1、SOX5基因的子宫内膜癌细胞,通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中RP11-444D3.1和SOX5基因mRNA表达水平,通过划痕实验和Transwell实验检测过表达RP11-444D3.1和SOX5基因的子宫内膜癌细胞的侵袭能力,并通过Western blot法检测cofilin/LIMK/Rac信号通路蛋白的相对表达量。结果:与子宫内膜癌细胞Ishikawa相比,过表达RP11-444D3.1与SOX5基因及共表达RP11-444D3.1、SOX5基因的子宫内膜癌细胞具有更强的侵袭能力(均P<0.05),同时,cofilin蛋白的表达降低,LIMK/Rac蛋白的磷酸化水平上调。结论:RP11-444D3.1与SOX5基因均可激活cofilin/LIMK/Rac信号通路,共表达可增强对cofilin/LIMK/Rac信号通路的激活作用,介导子宫内膜癌细胞侵袭。

长链非编码RNA RP11-554D14.7对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡能力的影响

目的:研究lncRNA RP11-554D14.7在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况,及其对NSCLC细胞功能的影响和分子机制。方法:实时定量PCR用于检测lncRNA RP11-554D14.7在NSCLC组织及细胞中的表达水平;CCK8、集落形成实验检测RP11-554D14.7对NSCLC细胞增殖能力的影响;流式细胞技术检测RP11-554D14.7对NSCLC细胞凋亡能力的影响;生物信息学分析和荧光素酶报告基因技术研究RP11-554D14.7对miR-21的调控。结果:RP11-554D14.7在NSCLC组织及细胞中表达下调,上调RP11-554D14.7的表达抑制NSCLC细胞增殖并诱导细胞凋亡;miR-21可直接结合到RP11-554D14.7的序列中。结论:下调的RP11-554D14.7在NSCLC的发生发展过程中可能是一个抑癌基因,可作为NSCLC一个候选的治疗靶点。

lncRNA RP11-169D4.1-001对喉鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-169D4.1-001对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响。方法使用慢病毒载体构建稳定过表达RP11-169D4.1-001的喉鳞癌细胞系,采用实时细胞分析、细胞克隆形成、流式细胞周期、流式细胞凋亡、细胞划痕实验、Transwell实验检测RP11-169D4.1-001在LSCC细胞增殖、凋亡、迁移中的作用。结果RP11-169D4.1-001在LSCC细胞增殖、迁移过程中发挥抑制作用。过表达RP11-169D4.1-001可抑制LSCC细胞增殖、迁移能力,将细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡。结论RP11-169D4.1-001在LSCC细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为中发挥抑癌作用,有望成为喉癌治疗的分子靶标。