长链非编码RNA RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及机制实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞和永生化胃上皮细胞GES-1中RP11-497E19.1表达水平,筛选表达最高的细胞进行后续实验。将HS-746T细胞分为si-NC组和si-RP11-497E19.1组,分别转染阴性对照寡核苷酸或RP11-497E19.1小干扰RNA。集落形成实验和Transwell实验分析转染HS-746T细胞的增殖、侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验验证RP11-497E19.1与微小RNA(miR)-545-5p的靶向关系。RT-qPCR检测转染HS-746T细胞miR-545-5p的表达。Western blot检测转染HS-746T细胞间质表皮转化因子(c-Met)/胆绿素还原酶(BVR)/活化复制因子2(ATF-2)分子通路相关蛋白的表达。结果:与GES-1细胞比较,HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞中RP11-497E19.1表达水平均上升,且HS-746T细胞RP11-497E19.1表达水平最高(均P<0.05)。与si-NC组比较,si-RP11-497E19.1组HS-746T细胞活力和细胞侵袭数降低(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实RP11-497E19.1靶向结合miR-545-5p,可负向调控miR-545-5p表达(P<0.05)。与si-NC组比较,si-RP11-497E19.1组HS-746T细胞c-Met/BVR/ATF-2分子通路蛋白c-Met、BVR、p-ATF-2、锌指蛋白1(Snail1)、锌指蛋白2(Snail2)表达降低(均P<0.05)。结论:胃癌细胞中RP11-497E19.1呈高表达,沉默RP11-497E19.1通过靶向miR-545-5p/c-Met/BVR/ATF-2分子通路抑制胃癌HS-746T细胞的增殖及侵袭。

血清RP11-88E10.5对直肠癌患者新辅助放化疗疗效与预后预测价值分析

目的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)广泛参与了结直肠癌的发生和发展。但目前关于局部进展期直肠癌对新辅助放化疗(neoadjuvant chemoradiotherapy,CRT)疗效的无创血清预测标志物的研究仍较少。本研究拟探讨血清RP11-88E10.5对CRT治疗局部进展期直肠癌疗效和预后的预测作用。方法回顾性选择2019-01-01-2019-01-14就诊首都医科大学附属北京世纪坛医院结直肠肿瘤外科的局部进展期直肠癌患者8例,于初治前搜集血清样本,根据其对CRT的疗效分为2组。对2组间的血清样本进行lncRNA测序,筛选差异表达lncRNA。从科室样本库中搜集2017-01-01-2018-12-31就诊的98例局部进展期直肠癌的初治血清标本进行验证,比较RP11-88E10.5高表达组与RP11-88E10.5低表达组对CRT的反应程度,并基于TCGA数据库分析RP11-88E10.5在直肠癌中的预后预测价值。最后通过生物信息学手段,预测RP11-88E10.5的靶基因,并对靶基因进行生物功能注释。结果对5例反应良好患者患者和3例反应不良患者的血清lncRNA测序结果进行比较,共筛选出688个差异lncRNA,其中在反应良好组上调lncRNA共548个,下调lncRNA共140个。筛选RP11-88E10.5(logFC=2.5,t=7.42,Q=0.001 498)进一步分析。从科室标本库中搜集98例直肠癌的血清标本进行低通量扩大反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)验证,根据Cutoff finder结果,以RP11-88E10.5相对表达值6.792为截点,分成高、低表达组,RP11-88E10.5高表达组的肿瘤反应率(25.0%,8/32)低于RP11-88E10.5低表达组(86.4%,57/66),χ2=36.334,P<0.001;病理完全缓解率(3.1%,1/32)低于RP11-88E10.5低表达组(21.2%,14/66),χ2=5.439,P=0.019。RP11-88E10.5预测CRT疗效的曲线下面积(area under curve,AUC)为0.79,具有较强的预测效能。TCGA数据库的预后分析结果提示,RP11-88E10.5低表达组的5年总生存率(64.3%)优于RP11-88E10.5高表达组(37.6%),差异有统计学意义,HR=2.4,P<0.001。生物信息学分析结果提示,RP11-88E10.5的功能主要富集于中性粒细胞脱颗粒、白细胞激活、免疫应答、免疫效应过程和细胞分泌过程等生物学过程中。结论血清RP11-88E10.5水平可预测CRT治疗局部进展期直肠癌的疗效,并与直肠癌不良预后相关。

下调lncRNA RP11-333E1.2表达抑制子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的机制研究

目的检测长链非编码RNA(lncRNA)RP11-333E1.2在子宫内膜癌中的表达,观察下调RP11-333E1.2对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其调控机制。方法qPCR检测45对子宫内膜癌及癌旁组织、5种子宫内膜癌细胞株(RL95-2、Ishikawa、HEC-1B、HEC-1A、AN3CA)和1种正常子宫内膜细胞株(ESC)中RP11-333E1.2的表达。以RP11-333E1.2表达最高的子宫内膜癌细胞株为转染对象,分别转染空载质粒和可干扰RP11-333E1.2表达的siRNA质粒,命名为空载体组和siRNA组。qPCR检测转染后RP11-333E1.2表达量;MTT法和Transwell侵袭实验分别检测低表达RP11-333E1.2对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭能力的影响;qPCR和Western blotting检测神经前体细胞表达发育下调基因9(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated 9,NEDD9)的mRNA和蛋白水平的表达。结果RP11-333E1.2在子宫内膜癌和癌旁组织中的相对表达水平分别为5.73±0.74和1.46±0.55,子宫内膜癌组织中RP11-333E1.2明显高表达(P<0.01)。与人正常子宫内膜细胞相比,子宫内膜癌细胞株中RP11-333E1.2明显高表达(P<0.01),Ishikawa细胞中的表达量最多(P<0.01)。与空载体组相比,siRNA组Ishikawa细胞中RP11-333E1.2表达明显降低(P<0.01)。与空载体组相比,siRNA组下调RP11-333E1.2可明显抑制Ishikawa细胞的增殖能力(P<0.05)和侵袭能力(P<0.01)。与空载体组相比,siRNA组Ishikawa细胞中NEDD9在mRNA和蛋白水平的表达明显降低(P<0.01)。结论RP11-333E1.2在子宫内膜癌中呈高表达,下调RP11-333E1.2可抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖能力和侵袭能力,其机制可能与NEDD9基因表达改变相关。

喉癌患者血浆及组织中长链非编码RNA的检测及临床意义

为研究长链非编码RNA(Long non-coding RNA,Lnc RNA)RP11-552E20.1-001在喉鳞状细胞癌患者血浆和组织中的表达水平及临床价值,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法,检测67例喉癌患者手术前后一周的血浆,以声带息肉患者血浆作对照,观察喉癌组织、转移的淋巴结和癌旁正常黏膜组织的表达情况,分析其与喉癌临床病理学特征的联系,构建受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC),探讨其诊断价值.研究发现,喉癌患者血浆Lnc RNA表达水平高于声带息肉患者,且术后较术前显著降低;喉癌组织中该链表达较癌旁组织上调,转移的淋巴结比原发病灶表达水平更高;术前血浆及喉癌组织中该链表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期显著相关.ROC曲线下面积为0.734,其敏感性为80.6%,特异性为67.2%.提示该Lnc RNA可能是喉癌诊断的潜在标记物,并在喉癌的侵袭、转移过程中起重要作用.