X连锁隐性遗传视网膜色素变性一家系RPGR和RP2基因的突变分析

目的对1个X连锁视网膜色素变性(XLRP)家系进行RPGR和RP2基因的突变分析。方法采集该家系11个成员(患者3例,正常人8例)的外周静脉血,提取基因组DNA。应用PCR方法扩增RPGR和RP2基因的全部外显子和内含子交界处序列,包括RPGR基因15号外显子开放阅读框,产物直接测序进行突变分析。结果在RP2发现了1个多态数据库已报道的单核苷酸多态(SNP);在RPGR基因中发现了11个SNP,其中3个为已知SNP,8个为本研究首次报道。所有序列变异与疾病表型无共分离现象。结论排除了RPGR和RP2基因突变导致该家系XLRP的可能性。

桔梗科rps2基因簇断裂对进化速率的影响

保守的rps2基因簇(rps2-atpI-atpH-atpF-atpA)在桔梗科的叶绿体基因组中发生了断裂。为探究该基因簇断裂后,相关基因的进化速率是否发生变化,本研究选取50种桔梗科植物和2种睡菜科植物的叶绿体基因组序列进行系统发育关系的构建,对rps2基因簇相关基因的进化速率、选择压力以及适应性进化过程进行分析。结果显示,桔梗科中rps2基因簇发生断裂的物种均来自风铃草亚科,且在系统发育树上组成单系分支;与未断裂物种相比,断裂物种中相关基因的进化速率均值降低;基因间的非同义替换速率存在显著差异。适应性进化分析中,位点模型在atpI和rps2基因中检测到正选择位点。本研究结果表明基因簇断裂可能具有系统发育意义,基因簇断裂后进化速率会发生改变,不同基因也经历了不同的进化历程。

两个家系中X连锁视网膜色素变性的RP2基因无义突变

目的 检测引起 2个家系产生X连锁视网膜色素变性的RP2基因突变。方法 根据RP2基因外显子和内含子DNA序列合成 8对引物 ,以人基因组DNA为模板 ,PCR扩增出包含RP2基因所有外显子的 8个片段。扩增产物纯化后直接测序。通过比较病人和正常人相应的DNA序列 ,检测基因突变位点。结果 在 2个家系中首次检测到RP2基因的同一个无义突变 35 8C→T。突变位于RP2基因的第 2外显子。它使该基因编码精氨酸的遗传密码CGA变为终止密码TGA ,引起发病。结论 该突变的检出有助于RP2蛋白的功能分析和X连锁视网膜色素变性的基因诊断。

人RP2基因在果蝇胚胎细胞中的表达

将质粒ｐＪＬＡ５０３中的ＲＰ２编码ｃＤＮＡ用ＰＣＲ的方法扩增，并与ｐＩＮＤ－３ｍｙｃ质粒上的人ｃ－ｍｙｃ编码 序列连接到果蝇转基因载体ｐＵＡＳＴ上，构建了ＵＡＳ－ＲＰ２－３ｍｙｃ和ＵＡＳ－ＲＰ２（ｄｅｌ６）－３ｍｙｃ融合 质粒．用脂质体转染的方法，将质粒导入果蝇培养细胞系Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ ｌｉｎｅ２（Ｓ２），并用ＰＣＲ 加以证实，然后通过Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测证明了ＲＰ２和ＲＰ２ ｄｅｌ６的表达．证明了人的 ＲＰ２基因在果蝇细胞中表达的可能性，说明果蝇系统是可以用来分析人的ＲＰ２基因功能 的．

采用花器喷雾法并基于Cre/lox系统定点整合拟南芥Rps2基因的技术体系研究

定点整合是一种指导目的基因以精确单拷贝进入基因组预定位点的转基因技术,用于解决常规转基因技术带来的系列问题.在拟南芥〔Arabidopsis thaliana（Linn.）Heynh.〕中,已通过根外植体法转化实施了基因的定点整合,但这一过程存在杂菌污染、分化困难和生长周期长等问题,且定点整合效率极低,无法进行推广应用.

肉苁蓉的生药学研究(3):基于质体rps2基因和rpl16-rpl14基因间隔序列分析列当科植物的生源关系

中国药典中记载药材肉苁蓉的原植物仅为列当科植物Cistanche deserticola，而中药材市场上存在一定数量的生药来自C.salsa和C.tubulosa，难以从形态学和化学特征加以鉴别。本次通过比较其rps2基因和rpl16～rpl14基因间隔区的核苷酸序列，分析这些植物的分类和生源关系。

粪便DNA甲基化分析对结直肠癌早期诊断的意义

目的探讨人粪便中分泌型卷曲相关蛋白2（SFRP2）基因甲基化分析用于结直肠癌（CRC）早期诊断的可行性。方法从30例结直肠癌人及30例正常对照者的粪便中分别提取DNA，采用甲基化特异性PCR（MSP）技术分析其SFRP2基因甲基化状态。结合临床病理对照，用统计学方法计算该检测的敏感度，特异性。确证粪便SFRP2基因甲基化分析可望成为CRC早期无创诊断或CRC高风险人群筛查的新途径。

一个视网膜色素变性家系的基因诊断和产前诊断

目的寻找一个视网膜色素变性家系的致病基因突变，并对该家系进行产前基因诊断。方法运用高通量测序对该家系的先证者173个遗传性眼病相关基因的序列进行检测，用Sanger测序法对高通量测序的结果进行验证，并对家系的其他患者与携带者进行致病基因突变的检测。结果 先证者存在X染色体连锁、与视网膜色素变性相关的RP2基因第2外显子c.570_571 ins GAAGATGCTGT插入突变，家系中的女性携带者均有该致病基因的杂合突变，男性患者均携带有该致病基因的半合子突变。结论该家系视网膜色素变性的遗传方式为X-染色体连锁隐性遗传，RP2基因第2外显子的c.570_571 ins GAAGATGCTGT插入突变可能为该家系视网膜色素变性的致病突变，可以根据该突变对家系中的携带者进行产前基因诊断。