乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达以及干预对其生物学特性的影响

目的检测乳腺癌细胞放疗后LncRNA RP3-340B19.3的表达水平变化,探讨干预RP3-340B19.3后对乳腺癌细胞生物学特性的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测经辐照后乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中RP3-340B19.3的表达水平;利用小干扰RNA技术抑制两株细胞系中RP3-340B19.3的表达,qRT-PCR检测其转染效率;克隆形成试验检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞存活率的改变,并计算细胞放疗增敏比(SER);流式细胞术检测RP3-340B19.3对乳腺癌细胞的细胞凋亡与细胞周期的影响。结果qRT-PCR结果显示,经辐照后MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的表达水平明显上调。转染siRNA后,MCF-7和MDA-MB-231细胞中RP3-340B19.3的相对表达量分别为0.2363±0.1538和0.3633±0.0371,均显著低于si-NC组(P<0.01)。经辐照后,RP3-340B19.3敲减组细胞克隆形成率和细胞存活分数明显下降(P<0.05),MCF-7和MDA-MB-231的细胞SER均显著升高。此外,经辐照后其细胞凋亡率显著上升(P<0.05);细胞周期发生改变,S期比例降低,细胞发生G_(0)/G_(1)期阻滞。结论乳腺癌细胞经辐照后RP3-340B19.3的表达水平明显升高,并且产生了放疗抗性。敲减RP3-340B19.3可以促进乳腺癌细胞的凋亡,抑制乳腺癌细胞的增殖,增强放射敏感性。

lncRNA RP3-340N1.2在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7细胞增殖和迁移的影响

目的:观察长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP3-340N1.2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:收集湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心2017年1月至2017年9月13例行乳腺癌根治术切除的癌组织及相应的癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测13例乳腺癌组织及癌旁组织、乳腺癌细胞株和正常乳腺上皮细胞中RP3-340N1.2的表达差异。使用Lipofectamine 3000转染试剂分别将RP3-340N1.2质粒(实验组)和阴性对照质粒(对照组)转染至乳腺癌MCF-7细胞,CCK-8法和Transwell迁移实验检测RP3-340N1.2过表达对MCF-7细胞增殖、迁移能力的影响。qRT-PCR检测RP3-340N1.2过表达对miR-134-5p和OPCML mRNA表达的影响,Western blotting检测OPCML相关蛋白的表达水平。结果:RP3-340N1.2在乳腺癌组织中表达明显低于癌旁组织(P<0.01),其在乳腺癌细胞株中表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞(P<0.01)。上调RP3-340N1.2的表达抑制MCF-7细胞的增殖和迁移能力(均P<0.05)。过表达RP3-340N1.2后MCF-7细胞中miR-134-5p表达水平明显降低(P<0.01)、OPCML mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.01),而周期调控蛋白CDK4、Cyclin D2的表达水平下调,细胞迁移调控蛋白Vimentin和N-cadherin蛋白表达下调(均P<0.01)。结论:RP3-340N1.2在乳腺癌组织和细胞株中低表达,上调RP3-340N1.2的表达可引起miR-134-5p的表达降低、OPCML mRNA表达升高,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。