长链非编码RNA RP5-919F19对胃癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA RP5-919F19对胃癌细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测RP5-919F19在胃癌细胞(MGC-803、SGC-7901和BGC-823)以及人正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)中的表达情况;构建干扰RP5-919F19表达的小干扰RNA序列(siRNA-1~3)并采用脂质体法转染胃癌细胞,根据转染情况分为转染干扰效率最高siRNA序列的干扰组、转染阴性对照(si-NC)序列的NC组和不行任何转染的空白对照(Blank)组,采用qPCR、MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测RP5-919F19水平、增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2/9水平。结果胃癌细胞的RP5-919F19水平均高于GES-1细胞,其中SGC-7901细胞的水平最高(P<0.05);与转染si-NC序列的SGC-7901细胞相比,转染siRNA-1~3序列的RP5-919F19水平均降低,其中序列siRNA-2对应的RP5-919F19水平最低(P<0.05);选取SGC-7901细胞和siRNA-2序列进行后续分组实验。与Blank组和NC组相比,干扰组的RP5-919F19水平降低且处理48~72 h后细胞增殖活力减弱(P<0.05)。干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.971±3.869)%和(69.573±9.601)个,均低于Blank组的(61.887±4.421)%和(152.707±23.176)个及NC组的(59.216±4.557)%和(161.820±15.442)%(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,干扰组MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。Blank组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论RP5-919F19在胃癌细胞中高表达且发挥促癌作用,通过外源siRNA手段下调其表达可抑制SGC-7901细胞的增殖和迁移侵袭能力,可能与抑制MMP-2和MMP-9表达有关,是胃癌潜在的治疗靶点。

LncRNA RP5-919F19在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的相关性

目的研究长非编码RNA(long non-coding RNA,Lnc RNA)RP5-919F19在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的相关性。方法收集临沂市中心医院2020年1月到2022年1月手术取下的非肿瘤胃黏膜(距癌组织3 cm以上)和胃腺癌组织。应用TRIzol试剂盒提取细胞和组织总RNA,应用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA,应用实时定量PCR试剂盒进行定量分析。应用SGC-7901和AGS人胃癌细胞,构建RP5-919F19敲减和过表达模型,应用CCK-8实验确认细胞增殖能力,应用Transwell侵袭实验确认胃癌细胞的侵袭能力。结果对79例胃癌组织和癌旁正常组织中RP5-919F19表达检测,发现RP5-919F19在胃癌组织中的相对表达量为1.51±0.05,明显高于癌旁正常组织的0.82±0.04(P<0.05)。对不同病理情况患者的RP5-919F19水平进行对比分析,分析结果显示患者不同TNM分期、是否出现远处转移、淋巴结转移和不同浸润深度患者的RP5-919F19表达差异存在统计学意义(P<0.05),不同肿瘤大小、年龄和性别患者RP5-919F19表达差异无统计学意义(P>0.05)。对AGS胃癌细胞转染RP5-919F19过表达和对照质粒,对细胞RP5-919F19效率进行检测,检测结果发现,过表达组细胞的RP5-919F19表达水平为1.83±0.14,相对对照组的0.82±0.05高(P<0.05),对SGC-7901胃癌细胞转染RP5-919F19敲除和对照载体,对细胞RP5-919F19效率进行检测,检测结果发现,敲除组细胞的RP5-919F19表达水平为0.42±0.07,相对对照组的0.89±0.08低(P<0.05)。应用CCK-8对胃癌细胞增殖能力进行检测,研究结果显示,RP5-919F19过表达组AGS细胞在培养24 h和48 h的增殖能力均相对对照组有明显提高(P<0.05),而RP5-919F19敲除组SGC-7901细胞在培养24 h和48 h的增殖能力均相对对照组低(P<0.05)。Transwell侵袭实验示RP5-919F19过表达组AGS细胞的侵袭和迁移能力均相对对照高(P<0.05),RP5-919F19敲除组SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力均相对对照组低(P<0.05)。Western blot结果显示,相对于对照组细胞,下调Lnc RNA RP5-919F19 SGC-7901细胞的信号转导蛋白亚基7A(signal transduction protein subunit 7A,COPS7A)蛋白表达降低。结论LncRNA RP5-919F19在胃癌组织中表达异常增高,RP5-919F19表达增高会促进胃癌细胞增殖转移。

半边旗抗肿瘤活性成分5F对照品的制备和鉴定

制备并鉴定了半边旗抗肿瘤活性成分11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)的对照品。采用二氧化碳超临界萃取、有机溶剂萃取、柱层析、重结晶方法进行分离、纯化以制备半边旗5F化合物单体;采用TLC、HPLC-MS检测杂质;采用HPLC峰面积归一化法测定纯度;采用理化性质、波谱特征鉴定其化学结构。结果表明,从半边旗地上部分的二氧化碳超临界萃取物中分离得到纯度为99.2%的5F对照品。该对照品可以作为半边旗药材以及主要成分为5F的药物制剂含量测定的对照物。