lncRNA RPL22P1-201通过调控miR-216b-5p表达影响前列腺癌细胞增殖、细胞周期和多西紫杉醇的敏感性

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)RPL22P1-201通过介导miR-216b-5p表达对前列腺癌细胞增殖、细胞周期以及多西紫杉醇敏感性的作用机制。方法:基于Cancer LncRNA Census数据库分析前列腺癌组织和正常组织中RPL22P1-201的表达差异。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测前列腺癌细胞株(DU-145、C4-2B、PC3、22Rv1、LNCaP)和正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)中RPL22P1-201表达水平。将PC3细胞分为si-RPL22P1-201组(转染RPL22P1-201干扰序列)和si-NC组(转染si-NC序列),集落形成实验检测PC3细胞增殖能力,流式细胞术检测PC3细胞周期,CCK-8法检测多西紫杉醇处理后各组PC3细胞的增殖情况,双荧光素酶报告基因实验验证RPL22P1-201与靶基因的结合,qRT-PCR检测miR-216b-5p表达水平,Western印迹检测TrkB、CDK4、cyclin D2、cyclin D3、CDK6蛋白表达水平。结果:前列腺癌组织中RPL22P1-201表达水平高于正常组织(P<0.01),前列腺癌细胞株中RPL22P1-201表达水平高于正常前列腺上皮细胞(P<0.01),si-NC组和si-RPL22P1-201组集落数量分别为(256.1±28.79)个和(78.77±14.52)个,差异有统计学意义(P<0.01)。si-NC组和si-RPL22P1-201组G0/G1细胞率分别为(43.18±4.56)%和(68.85±3.40)%,S细胞率分别为(36.84±2.28)%和(24.27±2.74)%,G2/M细胞率分别为(19.98±2.69)%和(6.88±1.57)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-RPL22P1-201组在多西紫杉醇作用下的细胞存活率均低于si-NC组(均P<0.05),RPL22P1-201能够与miR-216b-5p配对结合(P<0.01)。相比si-NC组,si-RPL22P1-201组PC3细胞中miR-216b-5p表达降低(P<0.01),TrkB、CDK4、cyclin D2、cyclin D3、CDK6蛋白表达均降低。结论:RPL22P1-201在前列腺癌中高表达,沉默RPL22P1-201通过升高miR-216b-5p表达抑制前列腺癌PC3细胞增殖和细胞周期,并增强PC3细胞对多西紫杉醇的敏感性。

核糖体蛋白RPL22在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:检测并比较核糖体蛋白L22(ribosomal protein L22,RPL22)在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析其在乳腺癌组织中的表达意义及其对乳腺癌预后的影响。方法:选择行乳腺癌改良根治术的62例患者,采用免疫荧光法检测乳腺癌及癌旁组织RPL22的表达,运用qRT-PCR检测乳腺癌及癌旁组织中RPL22 mRNA的表达,分析RPL22表达与临床病理参数的相关性。检索TCGA数据库,探究RPL22与患者预后的关系。结果:免疫荧光结果显示RPL22在乳腺癌组织中的表达低于癌旁组织;qRT-PCR结果显示乳腺癌组织中RPL22 mRNA的表达水平低于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。乳腺癌组织中RPL22表达与肿瘤大小(r=-0.403)、HER-2阳性(r=-0.390、Ki67表达(r=-0.370)、淋巴结转移(r=-0.422)以及三阴性乳腺癌(TNBC)发生(r=-0.311)呈负相关。检索TCGA数据库,发现RPL22在乳腺癌组织中的表达水平明显降低,RPL22低表达组总生存率低于高表达组,差异有统计学意义(P=0.036)。结论:乳腺癌组织中RPL22表达水平较癌旁组织明显降低,并与乳腺癌不良预后有关,提示RPL22可作为乳腺癌诊断以及预后的生物学指标。

角质细胞生长因子-2与核糖体蛋白L22相互作用的发现及在哺乳动物细胞中的验证

通过聚合酶链式反应从人胎肝cDNA文库中钓取KGF 2cDNA ,构建诱饵蛋白载体 pAS2 1 KGF 2并对其自身转录激活活性进行鉴定 ,利用酵母双杂交系统筛选人胎肝cDNA文库 ,挑选双阳性克隆 .DNA序列分析和同源检索显示 ,所获侯选蛋白为人核糖体蛋白L2 2 (RPL2 2 ) .将KGF 2和侯选蛋白分别克隆至哺乳动物细胞双杂交的BD、AD质粒中 ,共同转染COS 7细胞 ,通过CAT分析验证了KGF 2和侯选蛋白之间的相互作用 .为阐明KGF 2作用的分子机制提供有益线索 .