高效液相色谱-二酰胺基色谱柱HILIC模式下对人参口服液中三种人参皂苷的测定

建立高效液相色谱-酰胺基色谱柱HILIC模式,对人参口服液进行含量测定。采用Venusil HILIC为色谱柱(4.5 mm×250 mm),以水和乙腈为流动相进行等度洗脱,建立数学模型,分析整个测定流程。结果表明,人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)在10.0~500μg/mL范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))均大于0.9998,系统精密度实验RSD分别为1.01%,1.21%,1.05%,三种人参皂苷的回收率均较好。研究为人参口服液中人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)的检测提供参考和借鉴。

HILIC模式下UPLC-MS/MS测定多个注射剂中依地酸二钠含量

目的 建立并确证维生素C注射液、盐酸多巴胺注射液、注射用奥美拉唑钠、注射用泮托拉唑钠、注射用艾司奥美拉唑钠中依地酸二钠含量测定方法。方法 采用亲水作用色谱(HILIC)柱,以20 mmol/L乙酸铵溶液为流动相A,乙腈为流动相B进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,采用电喷雾电离源,多反应监测模式进行检测。结果 专属性、线性及范围、重复性、中间精密度、加样回收率、检测限与定量限、耐用性均符合规定,对照品溶液及供试品溶液稳定性均较好。结论 该方法可用于测定维生素C注射液、盐酸多巴胺注射液、注射用奥美拉唑钠、注射用艾司奥美拉唑钠、注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na含量。

HILIC/LC-MS直接分离测定大气颗粒物中的15种有机胺

本文建立了一种基于亲水作用液相色谱柱(HILIC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)的大气颗粒物有机胺的直接测定方法。颗粒物样品经甲醇提取、富集、浓缩后,对不同色谱柱与分析条件进行测试、对比,发现HILIC色谱柱可有效分离有机胺类化合物,高浓度以及低pH值的缓冲溶液可缩短大部分有机胺的保留时间,而流动相中有机相比例增加会延长保留时间。优化的HILIC/LC-MS分析方法可同时测定11种脂肪胺、2种脂环胺、1种芳香胺及1种醇胺,结合内标的有机胺标准曲线的线性相关系数R^(2)为0.991—0.999。本方法的检出限(S/N=3)为0.59—75.46 ng·mL^(-1),加标回收率为59%—92%,具有较高的精密度。该方法初步应用于青岛冬季大气细颗粒物样品中有机胺的测定,为大气有机胺的深入研究提供了方法参考与技术支撑。

苯二甲酸异构体的RPLC保留行为和热力学性质

在反相液相色谱(RPLC)中以C_(18)色谱柱为固定相,用15%~45%甲醇水溶液为流动相,研究了苯二甲酸异构体在10~50℃范围内的色谱保留行为和热力学性质。结果表明:邻苯二甲酸(PA)、对苯二甲酸(TPA)和间苯二甲酸(IPA)分子结构上的细微差异能在RPLC中清晰地体现出来。同时,根据苯二甲酸异构体与固定相之间的相互作用,测定了ΔH^(0)和ΔS^(0)的热力学参数变化。这些ΔH^(0)和ΔS^(0)的测定能为苯二甲酸异构体与疏水界面相互作用机制的研究提供一种行之有效的方法,也可为聚酯降解回收、生态环保、食品接触材料迁移物质等分析任务提供基础数据。

HILIC-MS/MS法检测动物源运动营养品中9种抗病毒药物残留

目的:加强动物源性运动营养品中抗病毒药物残留的监控.方法:建立一种亲水交互作用色谱—串联质谱测定动物源运动营养品中9种抗病毒药物组分的方法.样品前处理采用1%乙酸—乙腈提取,经PRi ME HLB小柱净化后检测.采用乙腈—10 mmol/L乙酸铵溶液(含0.1%甲酸)流动相体系,在梯度洗脱模式下,经Sielc Obelisc R柱分离,实现9种目标物组分的分离.结果:9种抗病毒药物组分在0.1~20.0ng/m L质量浓度范围内线性良好,检出限为0.1~0.5μg/kg,定量限为0.3~1.5μg/kg,加标回收率达82.3%~95.7%,相对标准偏差为3.2%~5.9%(n=5).结论:试验方法可以满足动物源运动营养品中9种抗病毒药物残留的检测需求.

高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用

蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。

应用HILIC技术检测乳制品中的尿素

基于亲水相互作用色谱(HILIC)技术,建立了可用于乳制品中尿素测定的液相色谱方法,其中固定相为Polar-Silica色谱柱,流动相为4mmol/L磷酸二氢铵溶液(pH=6.8)-乙腈(20:80,体积比),检测波长为200nm,流速为1mL/min。在该体系下,尿素保留时间适中,可与其他几种含氮极性化合物如三聚氰胺、三聚氰酸、三聚氰酸一酰胺、三聚氰酸二酰胺等实现基线分离。应用该方法测定了奶粉和液态奶制品中尿素的质量分数,其中奶粉中尿素的质量分数为1600～2400mg/kg,液态奶制品中尿素的质量分数为300～400mg/kg。

高效液相色谱法检测葡萄糖酸-δ-内酯

葡萄糖酸-δ-内酯常通过葡萄糖酸水溶液蒸发浓缩制备,所得产品常含有少量的葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯。为了检测产品中葡萄糖酸-δ-内酯的质量分数,文中建立了可快速分离分析葡萄糖酸-δ-内酯、葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯的高效液相色谱法,并优化了葡萄糖酸-δ-内酯的分析条件。以SPD-M20A二极管阵列检测器,采用Titank Hilic色谱柱分离葡萄糖酸-δ-内酯、葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯,以0.01 mol/L乙腈-磷酸水溶液(体积比90∶10)为流动相进行等度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm,进样量为20μL。结果表明,葡萄糖酸-δ-内酯在7 min内可实现较好的分离;在0.5—2.5 mg/mL内具有良好的线性关系(r>0.999),检出限为0.002 mg/mL,定量限为0.5 mg/mL,3个水平的平均加标回收率为98.8%—99.9%,相对标准偏差0.1%—0.4%(n=5)。此方法分析时间短、灵敏度高、分离效果好,可用于葡萄糖酸-δ-内酯、葡萄糖酸和葡萄糖酸-γ-内酯的同时检测。

HILIC-MS/MS测定家兔血液中的NNK及其7种代谢物

建立了亲水相互作用色谱-串联质谱(HILIC-MS/MS)分析家兔血液中NNK及其代谢物的方法。以NNK-d4、NNAL-d3和HPB-d4为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,直接进行HILIC分离和多反应监测(MRM)分析。结果表明,NNK及其代谢物的检出限在0.016～0.082 ng/mL之间,r为0.9991～1.0000,加标回收率为76.9%～116.3%,日内精密度为0.53%～6.52%。该方法适合于同时分析血液中的NNK及其7种代谢物。

运用RPLC-ICP-MS对富硒酵母中硒形态分析

分析了硒酵母片中硒的存在形态。采用蛋白酶解法水解酵母片中的蛋白质部分,并提取出构成酵母蛋白质的各种氨基酸成分,利用反相离子对色谱与电感耦合等离子质谱联用方法对其中的含硒氨基酸进行测定,确定含硒氨基酸种类。通过与含硒标准化合物在色谱柱上的保留时间比较,确定蛋白酶解液中主要的含硒氨基酸为硒代蛋氨酸。蛋白酶解提取手段和反相离子对色谱与电感耦合等离子质谱联用的检测技术,适合于酵母中的硒形态分析。

UAE-HILIC-DAD-ESI-Q-TOF/MS法测定大枣中的环磷酸腺苷

环磷酸腺苷(cAMP)是大枣中特色最为突出的重要生物活性物质,本研究建立了超声辅助提取-亲水色谱-二极管阵列检测器-电喷雾四极杆飞行时间质谱法(UAE-HILIC-DAD-ESI-Q-TOF/MS)定性定量测定大枣中cAMP的方法。采用超声辅助提取法用于cAMP的提取,采用Waters Xbridge Amide(250 mm×4.6 mm,3.5μm)亲水色谱柱进行分离,以乙腈和20 mmol/L CH3COONH4+0.2%CH3COOH为流动相,流速0.8 mL/min,柱温为室温。采用电喷雾四极杆飞行时间质谱,在正离子模式下,进行分析。采用超声提取法,cAMP的提取率较高;在优化的亲水色谱条件下,大枣水提物中cAMP与其他化合物分离良好;根据电喷雾四极杆飞行时间质谱获得的母离子和子离子的精确分子量信息,结合标准对照品的保留时间和UV信息可以对其进行准确鉴别。cAMP在0.01μg/mL～50.00μg/mL范围内具有良好的线性关系(r2=0.999 1),采用发展的方法用于金丝小枣与大红枣中的cAMP的含量测定。本文发展的UVE-HILIC-DAD-ESI-Q-TOF/MS测定大枣中cAMP的方法,分离度好、灵敏度高,为快速鉴别和测定大枣中的cAMP及资源开发研究提供了分析测定方法支持。

基于核苷类化合物HILIC-ESI-TOF/MS分析的海洋动物药指纹图谱方法

探讨了核苷类化合物指纹图谱用于不同海洋动物药真伪鉴别的可行性,为贵重动物药的鉴别提供了一种新方法.采用亲水色谱-电喷雾飞行时间质谱(HILIC-ESI-TOF/MS)对不同海洋动物药中的16种核苷类化合物进行分析,构建了基于16种核苷类化合物的特征指纹图谱,结合相似度分析和聚类分析,用于不同海洋动物药的鉴别.结果表明,基于核苷类化合物HILIC-ESI-TOF/MS分析的指纹图谱能反映不同海洋动物药各自的固有特征,结合相似度分析和聚类分析可实现对不同海洋动物药的正确区分.说明核苷类化合物指纹图谱有望成为动物药鉴别的新方法.

基于RPLC技术测定祛浊通痹方中落新妇苷含量

目的建立祛浊通痹方中落新妇苷含量的测定方法。方法采用快速液相色谱法(RPLC)。色谱柱为EclipsePlus C18柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以甲醇-水-冰醋酸(30∶70∶0.2)为流动相,柱温为25℃,流速为0.2 mL/min,检测波长为290 nm。结果落新妇苷在0.105～0.525μg范围内与其峰面积呈良好线性关系(r2=0.999 3,n=5),平均回收率为101.29%,RSD=2.76%。结论本方法分析时间短且重复性和稳定性好,可用于祛浊通痹方的质量控制。

改进的QuEChERS结合RPLC-TMS测定水产品中生物胺的研究

采用改进的QuEChERS方法，利用液相色谱-串联质谱（RPLC—TMS）检测，建立了几种水产品中生物胺的分析方法。样品用乙腈＋甲醇（9＋1）提取，无水硫酸钠除去水分，经乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和C18混合粉末净化，采用HILIC柱，以乙腈／1％甲酸水溶液为流动相梯度洗脱进行液相色谱分离。质谱分析采用电喷雾正离子电离，多反应监测模式，外标法定量。结果显示6种生物胺在10～200ng／mL范围线性关系良好。方法的定量限（LOQ，信噪比为10）为0．10mg／kg。加标水平在0．10mg／kg时，鱼、虾、蟹及鱿鱼四种阴性基质中加标的回收率在74．18％~90．15％之间，相对标准偏差（RSD，11=6）在2．22％～8．04％之间。结果表明本方法简便、快速、安全、适用于水产品中生物胺含量的定性和定量检测。

HILIC-HPLC法测定吉非替尼原料药的酸降解杂质X的含量

目的建立亲水柱-高效液相色谱法(HILIC-HPLC)测定吉非替尼原料药中的酸降解杂质X的检测方法。方法采用Waters Xbridge HILIC柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.05mol·L^(-1)的甲酸铵缓冲液(用甲酸调节p H至4.0)(85∶15,v/v)为流动相,流速1.0 m L·min^(-1),柱温25℃,检测波长240 nm。结果杂质X在9.8 min左右出峰。吉非替尼与杂质X之间的分离度大于2.0。杂质X在0.10~1.0μg·m L^(-1)与峰面积呈良好的线性关系(r=1.000,n=6),相对校正因子为0.4,定量限和检测限分别为0.08 ng和0.02 ng,回收率在99.7%~100.5%内,RSD均<1.5%(n=3)。结论经方法学验证表明,该方法的专属性、线性关系等良好,可采用加校正因子的主成分自身对照法对本品的杂质X进行控制。

高温正相色谱/反相色谱(HTNPLC/RPLC)二维联用系统的构建与应用

为解决含水正相色谱与反相色谱联用过程中的谱带展宽问题,以高温正相色谱(HTNPLC)为第一维,室温反相色谱(RPLC)为第二维,分别建立了切割模式的二维液相色谱(HTNPLC-μRPLC)和全二维液相色谱(HTNPLC×RPLC)系统。样品首先在第一维(CN色谱柱)进行正相分离,第一维洗脱产物选择性地或者交替存储在十通阀上的定量环中,然后切换十通阀将定量环内存储的样品组分转移到第二维(C18色谱柱)进行反相分离。该系统降低了第一维切割组分在第二维柱头的扩散,提高了分离度以及分离效率。采用多环芳烃混合物和天然植物甘草提取液对该二维液相色谱系统进行了评价。

全二维液相色谱(NPLC×RPLC)接口及其应用

用内径为0.53mm的填充毛细管正相液相色谱为第一维,用4.6mm(i.d.)×50mmRP-18e整体柱反相色谱为第二维,建立了定量环-阀切换接口的全二维液相色谱系统(NPLC×RPLC).第一维色谱分离洗脱出的组分交替存储在十通阀上的两个定量环中,同时定量环中前一个组分被转移到第二维进行反相分离.因为第一维的流动相流量仅是第二维的1/500,自然解决了流动相兼容问题.采用芳香族化合物的混合物和中药丹参正己烷提取液对该全二维液相系统的分离能力进行了评价.

HILIC法测定牙膏中盐酸水苏碱的含量

目的：建立HILIC法（亲水色谱法）测定牙膏中盐酸水苏碱含量的方法。方法：色谱柱：Agela Venusil HILIC（4．6×250mm 5μm 100A）；流动相：乙腈-0．2％冰醋酸溶液（80：20，V／V）；流速为1．0mL／min；检测器：ELSD；雾化器温度：80℃；蒸发器温度：60℃；蒸发器气流：1．8SLM；柱温：35℃；进样量：20灿。结果：盐酸水苏碱进样量自然对数值在1．0～5．01μg之间与峰面积自然对数值呈良好的线性关系（r=0．999），平均回收率为98．01％。结论：该方法的稳定性、重现性和准确性良好，可作为牙膏中盐酸水苏碱的质量控制方法。

豆科植物促长剂中6-苄基腺嘌呤的RPLC研究

研究了测定豆科植物促长剂中６－苄基腺嘌呤的反相高效液相色谱法（ＲＰＬＣ）．此法快速，灵敏，简便，准确，线性范围为０～２μｇ／ｍｌ，回收率为９８．３％～１０２．４％．

HILIC-MS/MS法检测鸡肉中的金刚烷胺残留

建立亲水作用色谱-串联质谱法检测鸡肉中的金刚烷胺残留,样品经二氯甲烷提取,旋转蒸发至干,用1.0 mL甲醇溶解,正己烷净化后,上机检测。采用PC HILIC-3μm,100 mm×2.0 mm(i.d)色谱柱分离,在选择反应监测模式下检测,外标法定量。结果表明:金刚烷胺在浓度1μg/L^100μg/L范围内线性关系良好,相关系数r2=0.990 2,方法检测限为1μg/kg,定量限为5μg/kg。在不同添加水平下,其平均回收率为78.7%~93.5%,变异系数为4.2%~6.5%。