Triptolide Inhibits Cell Growth and Induces G0-G1 Arrest by Regulating P21wap1/cip1 and P27 kip1 in Human Multiple Myeloma RPMI-8226 Cells

Objective： To investigate the effects of triptolide（TPL） on cell growth, cell cycle and the expressions of p21wapl/cipl and p27kipl. Methods： MTT assay was used to determine the cell viability after triptolide treatment in human multiple myeloma RPMI-8226 cells. The effect on cell cycle distribution was determined by flow cytometry. Semi-quantitative reverse transcription-PCR was used to examine the mRNA expressions of p21wapl/cipl and p27kipl. The protein expressions of p21 wapl/cipl and p27kipl were determined by Western blot. Results： Triptolide of varying concentrations induced cell viability inhibition in dose- and time-related fashion and caused Go- G1 phase arrest of cell cycle progression in RPMI-8226 cells. These effects accompanied with up-modulation of the expressions of p21 wapl/cipl and p27kipl. Conclusion： These results suggest that triptolide inhibit cell proliferation and cell cycle progression via up-regulating p21wapl/cipl and p27kipl and triptolide may exert its anti-cancer activity through this pathway.

miRNA-21种子序列反义核酸及抗多发性骨髓瘤应用

成熟microRNA的种子序列通过与其靶mRNA的3'-UTR区完全互补结合,发挥负性调节作用.针对miR-21的种子序列设计并合成8个碱基的微小反义核酸(tiny anti-miR-21,t-antimiR-21),研究t-antimiR-21对多发性骨髓瘤的抑制效应.利用LipofectamineTM2000转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞系,激光共聚焦显微镜检测荧光标记的反义寡核苷酸的细胞内定位,流式细胞仪检测转染效率;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测细胞增殖抑制率;台盼蓝拒染法测活细胞数;Annexin V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果显示:t-antimiR-21主要定位于细胞质,与antimiR-21具有相同的转染效率,但是t-antimiR-21转染后降解较快.t-antimiR-21显著抑制细胞增殖和促进细胞凋亡,最佳作用浓度为0.4μmol/L,最佳作用时间为48 h.结果表明t-antimiR-21可用于血液系统相关肿瘤的实验治疗,miRNA-21可作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点.

miR-155种子序列的反义寡核苷酸对抗多发性骨髓瘤的作用

目的:探讨针对miR-155种子序列的微小反义核酸(tiny antimiR-155,t-antimiR-155)对多发性骨髓瘤细胞的抑制效应。方法:化学合成t-anti miR-155,通过脂质体转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞株;实验分为t-antimiR-155组、随机对照组(SCR)和空白对照组;通过MTT法检测细胞增殖抑制率;使用细胞集落形成实验观察集落形成情况;流式细胞术(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡率。结果:(1)MTT筛选t-antimiR-155显著抑制RPMI-8266细胞生长的浓度,t-antimiR-155的最佳浓度是0.4μmol/L,最佳作用时间是转染后48 h。(2)细胞集落形成实验显示,相比于SCR组,t-antimiR-155组细胞形成集落的能力减弱,集落形成率显著降低。(3)相比于SCR组,t-antimiR-155组的细胞凋亡率明显增加,差异显著。结论:t-antimiR-155可能通过干扰miR-155表达有效抑制多发性骨髓瘤细胞的进展;miR-155可能作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点。

白花蛇舌草多糖诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

目的研究白花蛇舌草多糖（PEHD）对多发性骨髓瘤（MM）细胞增殖的影响，为其应用于临床治疗MM提供实验依据。方法以MM细胞株RPMI8226为研究对象。MTT法检测PEHD对RPMI8226细胞增殖的影响。AnnexinV—F｜TC／碘化丙锭（PI）双染法（AnnexinV／PI）标记的流式细胞术检测PEHD诱导RPMI8226细胞凋亡情况。Hoechst33258染色法观察PEHD诱导RPMI8226细胞凋亡的形态学改变。用Westernblot检测PEHD处理后有关凋亡信号传导通路蛋白caspase-3、-8、-9和PARP蛋白的表达以及PEHD作用前后NF—KB蛋白以及其他通路蛋白的变化情况。结果PEHD在一定浓度范围内对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用，最高抑制率达到了92．3％，在1—4mg／ml浓度范围内呈时间一剂量依赖性。不同浓度PEHD分别作用24h，RPMI8226细胞均可见凋亡小体，且凋亡小体数量随PEHD浓度增加而增加。1、2、3mg／mlPEHD诱导的细胞早期凋亡率分别为22．52％、62．31％、69．94％，高于空白对照组8．93％。1、2、3mg／mlPEHD作用24h，RPMI8226细胞caspase8、9、3和PARP蛋白表达上升，Mcl-1、Bcl-xl、Bid、Bim的表达随着PEHD浓度的增加而下降，而Bax、Bak、Bad表达上升，但p-AKT蛋白（相对分子质量60000）的表达明显下降，NF—KB蛋白表达水平明显下调。结论在一定浓度范围内的PEHD（1—4mg／m1）可明显抑制RPMI8226细胞增殖，呈时间和浓度依赖性；其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关；诱导细胞凋亡机制与其激活caspase-8、-9、-3KPARP蛋白表达，下调p-AKT及NF—KB蛋白表达有关。