慢病毒介导RNA干扰抑制RRS1基因表达对胆管癌RBE细胞增殖的影响

研究慢病毒介导RNAi干扰技术抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞表达后对胆管癌RBE细胞增殖产生的影响。方法 运用RT-PCR检测手术切除的胆管癌与癌旁胆管组织标本RRS1 mRNA基因水平的表达。通过慢病毒载体介导RNA干扰技术,从转录水平沉默RRS1基因表达,RT-PCR检测抑制RRS1后在胆管癌mRNA基因水平的表达;体外实验观察抑制RRS1基因后对胆管癌RBE细胞增殖的影响,初步探讨抑制RRS1基因表达后对胆管癌细胞增殖的影响。结果 RT-PCR检测结果发现在胆管癌组织中的RRS1 mRNA基因表达水平较癌旁胆管组织明显升高,RNA干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中表达后,胆管癌RBE细胞的增殖能力受到了明显下降。结论 (1)胆管癌组织中RRS1基因表达上调。(2)慢病毒RNAi干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中的表达后,RRS1会促进胆管癌细胞的增殖能力。

核酸-某些碱性三苯甲烷染料体系的RRS及其分析应用

在Tris缓冲溶液中 ,核酸能与某些碱性三苯甲烷染料如乙基紫 (EthylViolet,EV)、结晶紫 (CrystalViolet,CV)和甲基紫 (MethylViolet,MV)结合而使共振瑞利散射 (RRS)急剧增强并产生新的RRS光谱 .以鲱鱼精DNA (HerringSpermDNA ,hsDNA)为例考察了其相应的光谱特征、影响因素和适宜的反应条件 ,体系均在hsDNA浓度为 0～ 2 0μg/mL时与散射强度呈直线关系 ,方法具有较高的灵敏度 ,其检出限 (3σ)分别为 4 7ng/mL(EV hsDNA体系 ) ,13 0ng/mL (CV hsDNA体系 )和 12 2ng/mL (MV hsDNA体系 ) .考察了某些共存物质的影响 ,并用于合成样品中核酸的测定 。

武汉地区结核分枝杆菌氨基糖苷类抗生素耐药分离株rpsL和rrs基因特征分析

目的阐明武汉地区结核分枝杆菌分离株氨基糖苷类药物耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征。方法从武汉医疗救治中心共收集69株结核分枝杆菌的临床菌株,包括耐链霉素(SM)菌株35株(其中4株同时对卡那霉素耐药)和SM敏感菌株34株(其中全敏感20株)。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。结果 35株SM耐药株中有26株(74.3%)检测到rpsL突变,突变位点集中在第43位和第88位密码子,并发现了1个新的突变类型Lys88Glu;13株耐药株(37.1%)检测到四种不同类型的rrs基因突变,分别为A1401G(17.1%,6/35)、A514C(14.3%,5/35)、G1487A(2.9%,1/35)和C517T(2.9%,1/35),1株全敏感菌株的rrs基因发生了C1029T突变。卡那霉素耐药株中只有3株检测到了rrs突变,并发现了一种rrs基因尚未见报道的G1487A突变类型。结论结核分枝杆菌对氨基糖苷类药物的耐药与rpsL和rrs突变相关,耐药基因突变类型存在地域差异。

血清蛋白与SDS作用的RRS研究及应用

在酸性 clark-lubs缓冲溶液中 ,十二烷基磺酸钠 (SDS)与牛血清白蛋白结合 ,使体系的共振 Rayleigh散射信号显著增强 .研究了相应的光谱特征 ,影响因素和适宜的反应条件 .在此条件下 ,几种血清蛋白质在一定浓度范围内与共振 Rayleigh散射信号增强呈线性关系 ,建立了定量测定蛋白质的新方法 .该法操作简便、灵敏度高、线性范围宽以及重现性较好 ,可用于多种蛋白质的测定 .本法应用于人血清样品以及合成样品中蛋白质的定量分析 ,结果满意 .

结核分枝杆菌耐链霉素与rpsL和rrS基因的相关性研究

为探讨新疆地区结核分枝杆菌对链霉素(streptomycin,STR)产生耐药性的分子机制,建立直接快速检测结核杆菌STR药物敏感性的方法。应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)银染分析技术,检测62株结核杆菌临床分离株链霉素耐药性及rpsL和rrS基因变异情况,以结核分枝杆菌标准株(H37Rv)为对照。结果发现62株结核杆菌临床分离株中,32株STR敏感株的rpsL和rrS基因未见SSCP泳动异常,30株STR耐药株中,23株(76.7%)中rpsL(21株)和rrS(5株)基因出现SSCP泳动异常,并且3株出现了rpsL和rrS双基因的SSCP泳动异常。因此,rp-sL和rrS基因突变可能是结核分枝杆菌对链霉素产生耐药性的重要分子机制,PCR-SSCP银染技术可作为快速检测结核杆菌STR药物敏感性的方法。

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rrs基因突变与其耐药水平相关性研究

研究武汉地区耐链霉素(SM)结核分枝杆菌的耐药分子机制,进一步研究阐明rrs基因突变与结核分枝杆菌耐链霉素的关系;同时探究武汉地区结核分枝杆菌"北京基因型"菌株的流行趋势,为进一步研究武汉地区耐链霉素菌株rrs基因突变与"北京基因型"的相关性奠定基础。84株结核分枝杆菌中,44株对链霉素耐药,20株耐其它药物,20株对链霉素敏感,采用PCR直接测序法分析链霉素菌株rrs基因突变情况;采用RD105缺失法鉴定84株临床分离菌株中"北京基因型"菌株。结果显示44株SM耐药菌株中,16(36.4%)株检测到rrs基因突变,其中9株1401位点A→G,6株514位点A→C突变,1株1487位点G→A突变;20株耐其它药菌株中1401位点A→G和514位点A→C突变各1株,20株敏感菌株中发现1株1029位点C→T点突变;84株临床分离菌株中有77(91.8%)株"北京基因型"菌株,7株非"北京基因型"菌株。研究表明链霉素耐药菌株rrs基因主要突变位点在514和1401位点,武汉地区"北京基因型"菌株为当地流行的结核分枝杆菌,且SM耐药菌株中突变菌株93.8%(15/16)为"北京基因型","北京基因型"菌株研究及其鉴定是有其科学价值的,值得我们重视。

整合素β_3与汉坦病毒囊膜糖蛋白在RRS系统中的相互作用

目的:采用RRS酵母双杂交系统,研究人整合素β3与汉坦病毒囊膜糖蛋白的相互作用,进一步揭示汉坦病毒入胞机制。方法:大量制备前期构建的β3-pYesM△PolyA、G1-Met和G2-Met质粒,共转染至酵母温度敏感株cdc25-2,进行双杂交鉴定。结果:双杂交结果表明,β3可与汉坦病毒囊膜糖蛋白G2在酵母菌中相互作用,而不与G1相互作用。结论:在汉坦病毒与整合素β3受体相互作用的过程中,汉坦病毒囊膜糖蛋白G2可能起到主要作用。

MTB对阿米卡星和卡那霉素耐药相关rrs与eis基因突变的研究

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因均发生突变，基因突变率为92．86％；6株菌存在g妇基因突变，突变率为21．43％。60株对照株未发现基因突变。吉林省MTB对Am和Kin存在较高的交叉耐药现象；rrs基因的突变可以作为两者交叉耐药的分子标志，为建立耐Am和（或）Km结核病快速检测技术提供分子基础。

面向RRS的集成化CAPP平台体系结构研究

分析了CAPP软件的RRS需求特性,面向RRS的需求进行了CAPP系统分析,提出了CAPP系统的软件体系结构,并介绍了按照该体系结构开发的863目标产品CAPPFramework系统。

配体调控GONR催化H_2O_2还原HAuCl_4-RRS法测定Ni^(2+)

在60℃水浴条件下,过氧化氢(H_2O_2)还原HAuCl_4生成金纳米溶胶反应缓慢,加入氧化石墨烯纳米带(GONR)等纳米酶催化剂后,反应加快。当有丁二酮肟(DMG)配体存在时,DMG吸附在GONRs表面,导致GONR的催化作用减弱;而当溶液中存在Ni^(2+)时,形成Ni(DMG)2复合物,使DMG从GONRs表面脱附,此时GONRs得到释放,使得从而GONRs催化效应活化,催化作用增强。随着Ni^(2+)浓度的增加,脱附的GONRs越多,催化H_2O_2-HAuCl_4反应加快,体系生成的金纳米粒子增多,体系的RRS信号增强,当Ni^(2+)浓度在0.07~0.98μmol·L^(-1)浓度范围内,ΔI_(540nm)与Ni^(2+)浓度呈良好的线性关系,线性方程为ΔI_(540nm)=729.31c+32.049,线性相关系数R^2=0.991 4,检测限为0.028μmol·L^(-1)。

新型 RRS 换热器的随机响应分析

利用随机振动理论讨论了由湍流脉动而引起的两种不同结构管壳式换热器管束的随机响应。计算结果表明：新型ＲＲＳ换热器与普通挡板式换热器相比，具有优良的抗振性能。

美术类大学生迷思量表(RRS10)适用性探索

为了探索迷思量表RRS10(Ruminative Responses Scale)在美术类大学生中的适用性,本文通过翻译美国Nolen-Hoeksema等人编制的RRS10量表,对题项进行修订后形成了中文版的迷思问卷,并对445名美术类本科生进行了施测。研究结果显示:通过修订,得到包括沉思与反思两个维度的RRS8迷思量表;验证性因素分析拟合指数χ~2/df=1.522、RMSEA=0.04、GFI=0.971、AGFI=0.945、CFI=0.962、IFI=0.963,模型拟合良好;量表的内部一致性信度α系数0.769。由此可见,经过修订的RRS8中文版有较好的信度,适合在美术类本科生中使用。

拟南芥青枯病抗性基因RRS1的烟草同源性检测

旨在进行烟草种质抗青枯病基因RRS1的筛选研究,于2008年、2009年及2011年选取国内外80个烟草品种,开展大田青枯病病害指数调查及RRS1基因9对特异引物的筛选工作,通过9对引物及80个烟草种质的筛选,目前已经鉴定出引物6F-6R(5'-ATGAGAAAGAGGCTCGTCAA-3'和5'-ACCACAACCCTCAAGCAGTT-3')能够有效地筛选种质,共筛选出3个烟草种质(G28、K346、LMAFC34)含有RRS1特异性扩增序列;针对引物(6R-6F)扩增的3个烟草种质材料的特异性序列进行测序,开展与RRS1基因的cDNA序列的同源性比对,为烟草种质资源的RRS1基因同源性评价奠定工作基础。

重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA与rrs基因突变特征分析

目的分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系。方法对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特征。结果 89株MDR结核分枝杆菌中有50株对Ofx耐药,其中46株(92.00%,46/50)gyrA基因发生突变,突变位点包括74、89、90、91和94位密码子;22株耐Km菌株中,19株(86.36%,19/22)发生rrs基因突变,突变类型均为A1401G。Ofx、Km耐药株的gyrA、rrs基因突变率明显高于相应敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义(χ2=62.937,P<0.001;Fisher双侧P<0.001)。结论 gyrA基因90、91、94位密码子突变是重庆市耐多药结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制;rrs基因A1401G突变则是Km耐药的主要原因。

配体调控石墨烯量子点催化活性的RRS法测定Na^+

60℃水浴条件下,过氧化氢(H_2O_2)还原氯金酸(HAuCl_4)生成金纳米粒子反应进行缓慢,加入纳米酶—石墨烯量子点(发蓝光)(GQDb)做催化剂后,H_2O_2还原HAuCl_4生成金纳米粒子反应加快,H_2O_2与HAuCl_4反应生成的金纳米粒子增多,体系中显示出较强的共振瑞利散射光谱(RRS)效应。加入焦性锑酸钾(Coke antimony potassium,CAP)配体后,GQDb被配体包裹,抑制GQDb的催化作用。当溶液中加入Na^+时,Na^+与CAP反应生成Na^+-CAP复合物,CAP从GQDb表面脱落,使GQDb恢复其催化作用。并且随着Na^+浓度增大,体系的RRS信号增强,当Na^+浓度在0.166~1.66μmol·L^(-1)范围内,其ΔI_(372nm)值与Na^+浓度呈良好的线性关系,线性方程为ΔI_(372nm)=1972.6c+219.69,线性相关系数为0.976 1,检测限为0.081μmol·L^(-1)。据此,建立了一种检测Na^+的GQDb催化RRS新方法。

慢病毒介导的RNA干扰沉默RRS1基因对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰技术抑制RRS1表达对人乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响。方法采用Western blot方法检测RRS1在MCF-7与正常乳腺上皮细胞HMEC中的表达;分别构建携带绿色荧光蛋白的shRNA-RRS1慢病毒和阴性对照慢病毒RNA干扰系统,分别感染MCF-7细胞,即得到shRRS1实验组和shCtrl阴性对照组MCF-7细胞;采用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测两组细胞的mRNA及蛋白表达,确定敲减效率;采用MTT法连续6d检测两组细胞增殖活力;采用PI染色流式细胞术检测两组细胞的细胞周期分布;采用DAPI荧光染色、Annexin V-APC单染流式细胞术及Caspase 3/7实验检测两组细胞凋亡情况;采用Transwell实验检测两组细胞迁移能力的变化。结果实验组中RRS1的表达明显高于HMEC(P<0.05);与对照组相比,实验组RRS1mRNA和蛋白水平均明显降低(P<0.05),细胞活力显著减弱(P<0.05),G1期细胞明显增加(P<0.05),且实验组细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率显著增高(P<0.05),细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。结论 RRS1在乳腺癌细胞MCF-7中高表达。敲减RRS1基因能明显诱导乳腺癌细胞凋亡及周期阻滞,同时使得细胞迁移能力明显降低。

Effect of RRS on nitrogen transition and related bacteria in rhizosphere soil

The biology safety of genetically modified organisms （GMO） has been a topic of considerable public debate in recent years. Parts of the international research on the safety of GMO focus on its effect on soil ecosystem, especially on microbial communities changing and process in soil that are essential to key terrestrial ecosystem functions. This paper studied the dynamic change of soil microbe after cultivating Roundup Ready soybean （RRS） and the effect on biochemical processing of nitrogen cycle. According to the variance analysis, the ammonifying bacteria and nitrifying bacteria quantities of RRS in the rhizosphere soil were much lower than that of other genotype soybeans. The effects of different genotype soybeans on ammoniation intensity and nitrification intensity were remarkable. The nitrification intensity and the nitrifying bacteria had the great positive correlation and sustainable development.

基于配体调控量子点催化金纳米反应-RRS测定Na^+

在60℃水浴条件下,过氧化氢(H_2O_2)还原氯金酸生成金纳米粒子反应进行缓慢,加入掺钙碳点(CD)做催化剂后,反应加快。体系中生成的金纳米粒子增多,显示出较强的共振瑞利散射效应(RRS)效应。在加入焦性锑酸钾(Coke antimony potassium,CAP)配体后,CD被配体包裹,抑制其催化作用。当溶液中Na^+存在时,形成Na^+-CAP复合物,使CD从CAP表面脱附,此时CD得到释放恢复其催化作用。且随着Na^+浓度增大,体系RRS信号线性增强,当Na^+浓度在1.72~21.5μmol·L^(-1)范围内,其ΔI_(375nm)值与Na^+浓度呈良好的线性关系,线性方程为ΔI_(375nm)=105.06x-19.761,线性相关系数为0.969 8,检测限为0.096μmol·L^(-1)据此,建立了一种检测Na^+的CD催化RRS新方法。