慢病毒介导的RNA干扰沉默RRS1基因对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰技术抑制RRS1表达对人乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响。方法采用Western blot方法检测RRS1在MCF-7与正常乳腺上皮细胞HMEC中的表达;分别构建携带绿色荧光蛋白的shRNA-RRS1慢病毒和阴性对照慢病毒RNA干扰系统,分别感染MCF-7细胞,即得到shRRS1实验组和shCtrl阴性对照组MCF-7细胞;采用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测两组细胞的mRNA及蛋白表达,确定敲减效率;采用MTT法连续6d检测两组细胞增殖活力;采用PI染色流式细胞术检测两组细胞的细胞周期分布;采用DAPI荧光染色、Annexin V-APC单染流式细胞术及Caspase 3/7实验检测两组细胞凋亡情况;采用Transwell实验检测两组细胞迁移能力的变化。结果实验组中RRS1的表达明显高于HMEC(P<0.05);与对照组相比,实验组RRS1mRNA和蛋白水平均明显降低(P<0.05),细胞活力显著减弱(P<0.05),G1期细胞明显增加(P<0.05),且实验组细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率显著增高(P<0.05),细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。结论 RRS1在乳腺癌细胞MCF-7中高表达。敲减RRS1基因能明显诱导乳腺癌细胞凋亡及周期阻滞,同时使得细胞迁移能力明显降低。

拟南芥青枯病抗性基因RRS1的烟草同源性检测

旨在进行烟草种质抗青枯病基因RRS1的筛选研究,于2008年、2009年及2011年选取国内外80个烟草品种,开展大田青枯病病害指数调查及RRS1基因9对特异引物的筛选工作,通过9对引物及80个烟草种质的筛选,目前已经鉴定出引物6F-6R(5'-ATGAGAAAGAGGCTCGTCAA-3'和5'-ACCACAACCCTCAAGCAGTT-3')能够有效地筛选种质,共筛选出3个烟草种质(G28、K346、LMAFC34)含有RRS1特异性扩增序列;针对引物(6R-6F)扩增的3个烟草种质材料的特异性序列进行测序,开展与RRS1基因的cDNA序列的同源性比对,为烟草种质资源的RRS1基因同源性评价奠定工作基础。