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转基因水稻对水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)抗性评价 被引量:7
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作者 雷娟利 吕永平 +2 位作者 金登迪 陈剑平 陈声祥 《浙江农业学报》 CSCD 1999年第5期217-222,共6页
采用人工繁殖带毒褐飞虱( Nelaparvata Lugens) 攻毒接种,结合症状观察和RTPCR 检测方法,对57 个含有水稻齿叶矮缩病毒(RRSV) S7 ,S9 和S10 基因片段的转基因水稻对水稻齿叶矮缩病毒的抗... 采用人工繁殖带毒褐飞虱( Nelaparvata Lugens) 攻毒接种,结合症状观察和RTPCR 检测方法,对57 个含有水稻齿叶矮缩病毒(RRSV) S7 ,S9 和S10 基因片段的转基因水稻对水稻齿叶矮缩病毒的抗性进行了评价。总体而言,大多数转基因稻发病率比受体品种的发病率要低。从中初步得到对RRSV 具有较强抗性的水稻转基因系315 和316 ,其发病率分别为15 .8 % 和13 .3 % ;具有中等抗性的水稻转基因系184 和328 ,发病率分别为26 .9 % 和28 .0 % ;而对照受体品种和当地感病品种的发病率则分别为100 % 和84 .2 % 。将RTPCR 的方法用于转基因稻抗性的检测,可提高检测的灵敏度。 展开更多
关键词 转基因水稻 水稻 齿叶矮缩病毒 RT-PCR 抗性
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欧洲型和美洲型PRRSV双重PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 张松林 刘磊 +4 位作者 张太翔 马永彪 王文秀 肖娜 沈志强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期26-30,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)严重危害着养猪业的健康发展,给养猪业造成了巨大的经济损失。按照血清型和遗传性差异,PRRSV可划分为欧洲型和美洲型。欧洲型主要流行于欧洲地区,美洲型主要流行于美洲及亚太地区。我国每年从英国和法国等欧洲国家进口生猪占进口生猪总数的40%左右,但是在我国关于欧洲型PRRSV的报导却很少。为此,论文设计了2对能特异性扩增欧洲型和美洲型PRRSV的引物,建立并优化了可同时检测欧洲型和美洲型PRRSV的双重PCR方法。应用该方法能在3h内对样品进行检测并获得结果,本方法的建立对这两种病毒亚型的快速检测有十分重要的意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 欧洲型 美洲型 双重PCR
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基于HP-PRRSVN蛋白的快速免疫检测方法的建立 被引量:2
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作者 姚瑶 赵宇亮 +1 位作者 王勇鑫 赵宝华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期853-858,共6页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)能引起猪的繁殖障碍等疾病,是世界养猪业中的一大难题。本研究以HP-PRRSV病毒的N(核衣壳)蛋白为研究基础,原核表达N蛋白后,获得纯化蛋白,进行动物免疫,获得单克隆抗体株,优化间接ELISA和胶体金试纸条... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)能引起猪的繁殖障碍等疾病,是世界养猪业中的一大难题。本研究以HP-PRRSV病毒的N(核衣壳)蛋白为研究基础,原核表达N蛋白后,获得纯化蛋白,进行动物免疫,获得单克隆抗体株,优化间接ELISA和胶体金试纸条的条件。纯化后重组核衣壳蛋白的纯度大于90%;Western blot出现明显的反应条带;建立间接ELISA试验方法,且无明显交叉反应;筛选出9株针对N蛋白的抗体,特异性较好;组装的胶体金试纸条可检测最低稀释抗原质量浓度约为5mg/L。该试验为快速检测PRRSV、提高检测速率奠定一定的基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 核衣壳蛋白 单克隆抗体 胶体金试纸
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水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白的原核表达、抗血清制备及初步应用 被引量:3
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作者 丁新伦 谢荔岩 +1 位作者 潘贤 吴祖建 《激光生物学报》 CAS CSCD 2012年第6期546-550,共5页
水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白由基因组片段S10编码。从RRSV福建沙县分离物(RRSV-F)中获取该病毒的全基因组,根据RRSV泰国分离物核苷酸序列设计特异性引物获得S10编码区,利用Directional TOPO克隆技术,将S10连接至克隆表达载体pET100/D-TOP... 水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白由基因组片段S10编码。从RRSV福建沙县分离物(RRSV-F)中获取该病毒的全基因组,根据RRSV泰国分离物核苷酸序列设计特异性引物获得S10编码区,利用Directional TOPO克隆技术,将S10连接至克隆表达载体pET100/D-TOPO构建重组质粒,并进行了序列测定和分析。重组质粒经IPTG诱导在BL21star(DE3)E.coli中高效表达约35 kD Pns10蛋白。将Pns10蛋白免疫新西兰大白兔制备了特异性的抗血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶7 680,Western blot分析表明抗血清特异性强。表达产物及抗血清在Pns10蛋白的结构和功能研究中具有重要的应用价值,制备的抗血清可用于水稻病株和传播介体的检测以及病毒病的诊断。 展开更多
关键词 水稻齿叶矮缩病毒(rrsv) Pns10蛋白 原核表达 抗血清制备和应用
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水稻锯齿叶矮缩病毒抗血清的制备及其应用 被引量:1
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作者 谢联辉 林奇英 王少峰 《植物病理学报》 CAS 1984年第3期147-151,共5页
采用人工接种发病的水稻锯齿叶矮缩病株茎叶的榨出液,以低速离心(4000rpm)结合聚乙二醇(PEG)的方法所得部分提纯的病毒,进行家兔免疫注射制备抗血清,结果以注射后3~4周的效价最高,可达1:4096,α-最适比值为1:13。应用这种方法制备成的... 采用人工接种发病的水稻锯齿叶矮缩病株茎叶的榨出液,以低速离心(4000rpm)结合聚乙二醇(PEG)的方法所得部分提纯的病毒,进行家兔免疫注射制备抗血清,结果以注射后3~4周的效价最高,可达1:4096,α-最适比值为1:13。应用这种方法制备成的水稻锯齿叶矮缩病毒(RRSV)的抗血清,进行了水稻矮缩病毒(RDV)病株与RRSV病株的鉴别诊断和RRSV毒源寄主的检测。结果证明,具卷叶、缺刻的RDV病株确非RRSV复合感染所致。毒源寄主测定表明,在供试的7种田间常见杂草中,有5种表现为阳性反应;经生物学回接证实,5种中有蟋蟀草、水蜈蚣和游草3种能成功地将RRSV传给水稻而引起发病。 展开更多
关键词 rrsv 病株 抗血清 蟋蟀草 矮缩 水稻 锯齿
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒样品对细胞的敏感性
6
作者 张春玲 邹勇 +3 位作者 张婉华 周宗清 李春华 蒋凤英 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第1期62-65,共4页
从疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的发病猪场采集组织和血清样品并按病料分成2组,通过反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测样品中高致病性PRRSV发生变异的Nsp2部分基因,初步筛选出PRRSV阳性样品后分别通过Marc-145和PAM细胞分离... 从疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的发病猪场采集组织和血清样品并按病料分成2组,通过反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测样品中高致病性PRRSV发生变异的Nsp2部分基因,初步筛选出PRRSV阳性样品后分别通过Marc-145和PAM细胞分离培养。结果表明:从45份阳性病料中成功分离到29份高致病性PRRSV,其中从血清样品中成功分离的约占总数72.5%,从组织样品中成功分离的约占总数27.5%;通过Marc-145细胞分离获得的病毒有19份,通过PAM细胞分离获得的有24份,其中有14份是Marc-145和PAM共同分离得到。试验获得的血清是高致病PRRSV分离的理想样品,该病毒对Marc-145和PAM细胞的敏感性差异不显著。 展开更多
关键词 高致病性Prrsv 细胞 敏感性分析
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水稻齿叶矮缩病毒基因片段的分离及体外翻译 被引量:2
7
作者 陆惠华 龚祖埙 曹天钦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期167-172,共6页
通过1%琼脂糖电泳和十六烷基溴代三甲胺介导RNA相转移分离法,将水稳齿叶矮缩病毒基因组分为5个组份,基因组双链RNA经羟甲基汞变性后,在兔网状红细胞溶胞物翻译体系中,能高效地表达病毒蛋白质。每个RNA片段至少能编码一种蛋白蛋,但各个... 通过1%琼脂糖电泳和十六烷基溴代三甲胺介导RNA相转移分离法,将水稳齿叶矮缩病毒基因组分为5个组份,基因组双链RNA经羟甲基汞变性后,在兔网状红细胞溶胞物翻译体系中,能高效地表达病毒蛋白质。每个RNA片段至少能编码一种蛋白蛋,但各个片段的翻译活性有明显差异。分析了该病毒基因组各组份与其表达产物的对应关系。 展开更多
关键词 rrsv 呼肠孤病毒 基因组 分离
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西南稻区稻飞虱及引起水稻矮缩病病毒的分布研究 被引量:15
8
作者 梁燕 吴建祥 +5 位作者 齐会会 白玉路 许存宾 周雪平 胡培松 彭云良 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期1466-1471,共6页
2010-2012年5-8月在西南稻区的四川、云南、广西、贵州和重庆等地对稻飞虱及其传播病毒病植株进行田间调查和室内鉴定.结果表明,白背飞虱在西南地区分布最广,且在各个调查均有发现;褐飞虱主要分布在西南稻区的东部和南部,四川盆地西部未... 2010-2012年5-8月在西南稻区的四川、云南、广西、贵州和重庆等地对稻飞虱及其传播病毒病植株进行田间调查和室内鉴定.结果表明,白背飞虱在西南地区分布最广,且在各个调查均有发现;褐飞虱主要分布在西南稻区的东部和南部,四川盆地西部未见;而灰飞虱则主要分布在温度较低的滇西高原和四川盆地北部甚至更北的西南稻区,并在飞虱危害较轻的2011年成为田间优势种群;除滇西高原外,西南稻区各地水稻生长季节部分白背飞虱携带南方水稻黑条矮缩病毒,带毒率在2.5%~10.0%之间;南方水稻黑条矮缩病是西南稻区水稻当前最主要病毒病,历年在贵州东南部发生危害,部分田块矮化株带毒率达到100.0%,但在滇西高原和四川盆地未见其危害;在褐飞虱和白背飞虱混合发生地区,南方水稻黑条矮缩病毒和水稻锯齿矮缩病毒能复合侵染水稻;而在白背飞虱和灰飞虱混合发生地区的云南保山发现有水稻条纹叶枯病,在四川新都则发现了水稻黑条矮缩病. 展开更多
关键词 稻飞虱 南方水稻黑条矮缩病毒 水稻黑条矮缩病毒 条纹叶枯病毒 水稻锯齿矮缩病毒 西南稻区
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水稻齿叶矮缩病毒在水稻病叶及传毒媒介昆虫组织内的形态 被引量:5
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作者 沈菊英 彭宝珍 +2 位作者 龚祖埙 林瑞芬 金登迪 《上海农业学报》 CSCD 1989年第2期15-18,共4页
用饲毒后的褐稻虱进行单虫单苗接种,稻苗发病率达60%以上。对病株的叶脉脉肿部位及相应编号的褐稻虱唾液腺进行超薄切片后,在电子显微镜下观察,病株的筛管细胞和传毒昆虫的唾液腺细胞内可见到大量病毒颗粒,并以晶状排列或者包裹于管状... 用饲毒后的褐稻虱进行单虫单苗接种,稻苗发病率达60%以上。对病株的叶脉脉肿部位及相应编号的褐稻虱唾液腺进行超薄切片后,在电子显微镜下观察,病株的筛管细胞和传毒昆虫的唾液腺细胞内可见到大量病毒颗粒,并以晶状排列或者包裹于管状组织中。病毒颗粒大小约为70nm,具有45nm致密核心为双链RNA的组成部分,在核酸和核衣壳之间尚有空隙。本文对病毒的细微结构进行了讨论,并提供进一步证据,说明我国发现的RRSV和国外报道起源于东南亚的RRSV是同一种病毒。 展开更多
关键词 水稻 齿叶矮缩病毒 病毒形态 寄主细胞超薄切片 褐稻虱 传毒媒介昆虫组织
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病毒来源的转基因水稻对靶病毒的抗性评价
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作者 雷娟利 金登迪 +3 位作者 吕永平 Narayana Upadhyaya 龚祖埙 陈声祥 《浙江农业学报》 CSCD 2003年第4期215-218,共4页
通过连续3年对236个病毒来源的转基因水稻系(包括T1,T2和T3代)对靶病毒水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的抗性进行评价,发现抗性与所转RRSV基因片段有相关性,且随着繁殖世代的增加,转基因水稻的抗性逐渐减弱。
关键词 转基因水稻 水稻齿叶矮缩病毒 抗性 检测
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广西南方水稻黑条矮缩病毒及水稻齿叶矮缩病毒的分子检测 被引量:9
11
作者 刘红艳 章友爱 +3 位作者 廖咏梅 李子玲 王凯学 陈保善 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期955-960,共6页
【目的】探索南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的分子检测技术,了解两种病毒在广西的分布,为生产上开展两种病害的防治奠定基础。【方法】用RT-PCR技术检测采自广西各地的水稻、杂草及稻飞虱样品;用CF-11纤维素粉... 【目的】探索南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)和水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的分子检测技术,了解两种病毒在广西的分布,为生产上开展两种病害的防治奠定基础。【方法】用RT-PCR技术检测采自广西各地的水稻、杂草及稻飞虱样品;用CF-11纤维素粉提取水稻茎叶组织中的dsRNA,1.5%琼脂糖凝胶电泳观察dsRNA图谱。【结果】从水稻、稗草、五节芒、李氏禾和白背飞虱样品中获得850bp左右的SRBSDV序列,从水稻和褐飞虱样品中获得700bp左右的RRSV序列;首次从五节芒和李氏禾中检测到SRBSDV。SRBSDV单独侵染、SRBSDV和RRSV复合侵染可见8条dsRNA条带,但带谱不一致;RRSV单独侵染可见5条dsRNA带。在供检测的181株水稻样品中,除了来自北海、贵港和梧州市的水稻样品外,其余样品均检测到SRBSDV;除了来自梧州、贺州、玉林、贵港和来宾的水稻样品外,其余样品均检测出RRSV;其中带SRBSDV的样品数占44.8%,带RRSV的样品占21.5%,两种病毒复合感染占11.0%。【结论】研究设计的特异性引物能用于RT-PCR检测SRBSDV和RRSV、水稻样品提取dsRNA能快速直观地鉴定SRBSDV、RRSV单独感染及混合感染水稻。用设计的引物首次检测出SRBSDV的两种新寄主五节芒和李氏禾。 展开更多
关键词 南方水稻黑条矮缩病毒 水稻齿叶矮缩病毒 RT-PCR DSRNA 广西
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南繁区水稻病毒病发生情况及分子鉴定 被引量:2
12
作者 谢海霞 张雨良 +5 位作者 杨樱子 黄启星 郭运玲 王健华 刘志昕 郭安平 《热带农业科学》 2015年第1期53-58,共6页
对海南岛南部三亚、琼海、陵水等南繁水稻产区市县的病毒病发生情况进行调查,同时根据国内外已报道的10种主要水稻病毒设计特异PCR检测引物,对23个疑似水稻病毒样品进行分子检测,结果表明:海南南繁区水稻病毒病主要有2种,即由南方水稻... 对海南岛南部三亚、琼海、陵水等南繁水稻产区市县的病毒病发生情况进行调查,同时根据国内外已报道的10种主要水稻病毒设计特异PCR检测引物,对23个疑似水稻病毒样品进行分子检测,结果表明:海南南繁区水稻病毒病主要有2种,即由南方水稻黑条矮缩病毒(southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)引起的南方水稻黑条矮缩病和由水稻齿叶矮缩病毒(rice ragged stunt virus,RRSV)引起的水稻齿叶矮缩病;经分子检测鉴定了6例南方水稻黑条矮缩病样品和14例水稻齿叶矮缩病样品,检出2个交叉复合感染的样品,2种病样的检出率分别为26.09%和60.87%,其余8种水稻病毒均未检测到。研究结果表明,南方水稻黑条矮缩病毒和水稻齿叶矮缩病毒是南繁水稻种植区域需重点防治的病害对象。 展开更多
关键词 南繁 水稻 黑条矮缩病 齿叶矮缩病 分子鉴定
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一例仔猪圆环病毒与蓝耳病毒混合感染的诊治
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作者 陈静 贺永明 《辽宁农业职业技术学院学报》 2019年第1期14-16,共3页
2017年12月份,辽宁省某猪场的仔猪发病死亡,通过临床症状、病理剖检及RT-PCR、PCR方法检测,确诊为猪圆环病毒Ⅱ型和蓝耳病毒的混合感染。结合该场的实际情况,提出了综合防治措施,并及时控制猪病。
关键词 仔猪 圆环病毒 蓝耳病毒 混合感染
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Suppression of Jasmonic Acid-Mediated Defense by Viral-Inducible MicroRNA319 Facilitates Virus Infection in Rice 被引量:28
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作者 Chao Zhang Zuomei Ding +16 位作者 Kangcheng Wu Liang Yang Yang Li Zhen Yang Shan Shi Xiaojuan Liu Shanshan Zhao Zhirui Yang Yu Wang Luping Zheng Juan Wei Zhenguo Du Aihong Zhang Hongqin Miao Yi Li Zujian Wu Jianguo Wu 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2016年第9期1302-1314,共13页
MicroRNAs (miRNAs) are pivotal modulators of plant development and host-virus interactions. However, the roles and action modes of specific miRNAs involved in viral infection and host susceptibility remain largely u... MicroRNAs (miRNAs) are pivotal modulators of plant development and host-virus interactions. However, the roles and action modes of specific miRNAs involved in viral infection and host susceptibility remain largely unclear. In this study, we show that Rice ragged stunt virus (RRSV) infection caused increased accumulation of miR319 but decreased expression of miR319-regulated TCP (TEOSINTE BRANCHED/ CYCLOIDEA/PCF) genes, especially TCP21, in rice plants. Transgenic rice plants overexpressing miP,319 or downregulating TCP21 exhibited disease-like phenotypes and showed significantly higher susceptibility to RRSV in comparison with the wild-type plants. In contrast, only mild disease symptoms were observed in RRSV-infected lines overexpressing TCP21 and especially in the transgenic plants overexpressing miR319- resistant TCP21. Both RRSV infection and overexpression of miR319 caused the decreased endogenous jasmonic acid (JA) levels along with downregulated expression of JA biosynthesis and signaling-related genes in rice. However, treatment of rice plants with methyl jasmonate alleviated disease symptoms caused by RRSV and reduced virus accumulation. Taken together, our results suggest that the induction of miR319 by RRSV infection in rice suppresses JA-mediated defense to facilitate virus infection and symp- tom development. 展开更多
关键词 miR319 rice ragged stunt virus rrsv TCP21 viral infection jasmonic acid
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