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四重荧光定量rRT-PCR法检测柯萨奇病毒B1、B2、B3及其他未分型肠道病毒
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作者 龚建光 崔大伟 +3 位作者 谢国良 杨先知 郭希超 陈瑜 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期561-564,共4页
目的建立检测柯萨奇病毒(CoxB1、CoxB2、CoxB3)和其他未分型肠道病毒(EV)的四重荧光定量rRT-PCR法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化反应体系,评价建立的rRT-PCR法的灵敏度、特异性和重复性,并用该法检测535份... 目的建立检测柯萨奇病毒(CoxB1、CoxB2、CoxB3)和其他未分型肠道病毒(EV)的四重荧光定量rRT-PCR法。方法用Primer Express 3.0软件设计特异性引物和探针,优化反应体系,评价建立的rRT-PCR法的灵敏度、特异性和重复性,并用该法检测535份病毒性心肌炎患儿粪便标本和43份咽拭子标本,对阳性结果测序验证。结果 rRT-PCR法检测CoxB1、CoxB2、CoxB3和其他未分型EV灵敏度均达103copies/mL,特异性较高,检测CV均<1.0%。578份临床标本用该法检测EV为153份,其中CoxB1病毒69份,CoxB2病毒18份,CoxB3病毒27份,其他未分型EV 39份。随机选取CoxB1、CoxB2、CoxB3病毒检测阳性样本各10例测序,均与该法的检测结果一致。结论建立的四重荧光定量rRT-PCR法可同时检测并区分CoxB1、CoxB2、CoxB3病毒和其他未分型EV,可用于此类病毒引起的暴发疫情的实验室应急诊断。 展开更多
关键词 肠道病毒 柯萨奇病毒 rrt-pcr
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鸡传染性法氏囊病病毒RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:5
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作者 孙洁 卢体康 +13 位作者 曾少灵 杨俊兴 詹爱军 林庆燕 曹琛福 陈兵 廖立珊 阮周曦 陶虹 张彩虹 刘建利 花群义 吕建强 秦智锋 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第12期6-10,共5页
鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐... 鸡传染性法氏囊病(IBD)是危害我国养禽业的主要疫病之一,呈世界性分布,对养鸡业造成重大危害。在国际种禽贸易中,对IBDV检测是口岸检疫的主要对象之一。为了建立标准的鸡传染性法氏囊病病毒分子检测方法,采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的带有通用引物和酶切位点的特异性引物,通过对6株不同毒株的反复试验,优化了针对A片段VP2基因的常规反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法 (IBDV-VP2(604)-RT-PCR)和针对B片段VP1基因的RT-PCR检测方法(IBDV-VP1(642)-RT-PCR);针对A片段VP2基因设计特异性引物和探针,建立了优化IBDV特异性实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)检测方法(IBDV-VP2-rRT-PCR)。将传染性法氏囊病疫苗-法倍灵(IBDV-BLEN)疫苗株进行系列稀释,两种RT-PCR检测方法的灵敏度均为10-3,而IBDV-VP2-rRT-PCR检测方法灵敏度为10-4。所建立的三种分子生物学检测方法特异,与其他家禽病毒无任何交叉反应。通过对自2007年以来18批221份田间样品检测表明,所建立的方法准确可靠,适合对鸡传染性法氏囊病病毒进行快速灵敏检测和监测。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病 常规RT-pcr 实时荧光定量RT-pcr 快速检测
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H9亚型鸭源禽流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立 被引量:4
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作者 万春和 林甦 +7 位作者 施少华 林秋敏 陈红梅 程龙飞 傅光华 林芳 林建生 黄瑜 《福建农业学报》 CAS 2010年第4期387-391,共5页
针对H9亚型禽流感HA基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-ti me RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为8.33×102拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍。扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特... 针对H9亚型禽流感HA基因保守序列设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的荧光定量RT-PCR(real-ti me RT-PCR,RRT-PCR),最低检测限为8.33×102拷贝质粒DNA,与常规PCR相比,灵敏度高出100倍。扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(83.83±0.22)℃,组内变异系数为0.52%~1.48%,组间变异系数为0.71%~2.21%,可重复性好;对H5亚型禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭源禽1型副粘病毒无扩增;检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4.5 h。 展开更多
关键词 H9亚型禽流感病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量pcr(rrt-pcr)
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荧光定量RT-PCR检测中、强毒力新城疫病毒方法的建立及验证 被引量:4
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作者 曹军平 胡新岗 +6 位作者 吴双 胡顺林 赵国 王晓泉 刘晓文 陈长春 刘秀梵 《中国动物检疫》 CAS 2012年第4期32-36,共5页
根据新城疫病毒F基因的裂解位点序列,设计合成一对引物和TaqMan探针,以本室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株F基因阳性重组质粒作为中、强毒力新城疫病毒RNA定量检测的标准品,建立检测方法。结果表明本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值... 根据新城疫病毒F基因的裂解位点序列,设计合成一对引物和TaqMan探针,以本室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株F基因阳性重组质粒作为中、强毒力新城疫病毒RNA定量检测的标准品,建立检测方法。结果表明本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.999,灵敏度约为3拷贝/μL,对禽流感病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为中、强毒力新城疫病毒检测提供了一种快速高效的定量检测方法。对28株标准分离株强弱毒力的检测与经典病毒分离方法符合率达100%,对187份临床样品的检测,二者结果符合率接近90.0%。在新城疫病毒临床样品快速检测、流行病学监测等方面显示良好的应用前景。 展开更多
关键词 新城疫病毒 中、强毒株 荧光定量RT-pcr 建立 验证
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甲型H1N1(2009)流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价 被引量:2
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作者 秦智锋 张彩虹 +10 位作者 孙洁 刘建利 卢体康 阮周曦 林庆燕 吕建强 曹琛福 曾少灵 陈书琨 廖立珊 花群义 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期48-53,共6页
自甲型H1N1(2009)流感病毒于2009年在世界多个国家暴发流行后,许多国家的猪群中检测到该病毒的存在,因此建立快速准确的甲型H1N1流感病毒的检测方法成为迫切需求。本研究针对甲型H1N1(2009)流感病毒NA基因设计特异性引物和探针,建立甲型... 自甲型H1N1(2009)流感病毒于2009年在世界多个国家暴发流行后,许多国家的猪群中检测到该病毒的存在,因此建立快速准确的甲型H1N1流感病毒的检测方法成为迫切需求。本研究针对甲型H1N1(2009)流感病毒NA基因设计特异性引物和探针,建立甲型H1N1(2009)流感病毒特异性实时荧光RT-PCR快速检测方法。并将该方法与WHO推荐美国CDC建立的检测方法和美国农业部推荐的检测方法进行比较。通过田间试验验证该方法在实际应用中的效果。结果表明:本研究建立的方法对检测甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的灵敏度达到10-6,与WHO推荐的A型流感病毒实时荧光PCR检测方法的灵敏度一致,并且高于美国农业部推荐方法的检测灵敏度(10-5);该方法特异性强,与经典型H1N1和其他亚型流感病毒株无任何交叉反应。与香港兽医化验所进行了检测比对,检测灵敏度和特异性完全一致。近3 800份的田间试验表明,所建立的方法准确可靠。本研究所建立检测方法快速灵敏,检测结果准确可靠,适合用于甲型H1N1(2009)流感病毒的分子生物学检测和监测。 展开更多
关键词 甲型H1N1(2009)流感病毒 实时荧光RT-pcr 快速检测
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双重荧光实时RT-PCR技术鉴定H9N2亚型禽流感病毒
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作者 李燕 单军 韩晓冬 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期486-490,共5页
采用双重荧光实时RT-PCR技术,建立一种简便易行的H9N2亚型禽流感病毒的快速鉴定方法。通过比对GenBank甲型禽流感病毒H9N2亚型的HA和NA基因序列,设计特异性针对HA和NA的引物,分别选用FAM和JOE两种不同荧光标记探针,构建双重实时荧光PCR... 采用双重荧光实时RT-PCR技术,建立一种简便易行的H9N2亚型禽流感病毒的快速鉴定方法。通过比对GenBank甲型禽流感病毒H9N2亚型的HA和NA基因序列,设计特异性针对HA和NA的引物,分别选用FAM和JOE两种不同荧光标记探针,构建双重实时荧光PCR一步法反应体系,同时检测样本中的HA和NA基因。结果显示:扩增曲线和特异性实验结果显示,该体系具有很好的扩增效率,且仅特异性识别H9N2亚型AIV的HA、NA基因,与相关病毒或其他亚型无交叉反应。采用重组质粒pMD19-T构建HA、NA阳性质粒,10倍梯度稀释液为模板,进行荧光定量PCR。结果证实,本研究所建立的双重荧光定量RT-PCR体系敏感性能达到10个RNA拷贝数。采用本方法检测60份感染动物样品及60份环境样品,与传统PCR方法相比,检测敏感性提高了100倍;与病毒分离鉴定方法比较,二者的鉴定结果完全吻合。该方法具有特异性强、灵敏度高、快速易操作等优点,是H9N2亚型禽流感病毒鉴定的有效方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2 双重荧光实时RT-pcr技术
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快速诊断鸽瘟方法的研究 被引量:5
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作者 刘小银 岳华 《中国家禽》 北大核心 2007年第11期18-21,共4页
从疑似鸽瘟的6例临床病例中分离到5株鸽Ⅰ型副黏病毒(SCP1~SCP5),经本实验室建立的检测中、强毒力新城疫(NDV)病毒的SYBRGREENⅠRT-PCR(RRT-PCR)方法诊断,确诊为中、强毒力新城疫毒感染,用常规RT-PCR扩增SCP1包括F蛋白裂解位点的基因片... 从疑似鸽瘟的6例临床病例中分离到5株鸽Ⅰ型副黏病毒(SCP1~SCP5),经本实验室建立的检测中、强毒力新城疫(NDV)病毒的SYBRGREENⅠRT-PCR(RRT-PCR)方法诊断,确诊为中、强毒力新城疫毒感染,用常规RT-PCR扩增SCP1包括F蛋白裂解位点的基因片段,并进行克隆、序列测定。分析表明,SCP1编码F蛋白的基因片段裂解位点处的序列为112K-R-114Q-K-R-117F,与新城疫强毒在这一区域的序列相符;与21株已报道的NDV进行核苷酸同源性比较,并建立进化树,聚类为基因Ⅵ型。 展开更多
关键词 新城疫病毒 鸽瘟 rrt—pcr 诊断
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基因A型鸭甲肝病毒弱毒株免疫雏鸭的8种细胞因子mRNA变化分析
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作者 张焕容 张冰 +1 位作者 王栋 岳华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1215-1221,共7页
为研究基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)MY弱毒株对雏鸭细胞因子表达的影响,阐明细胞因子在DHAV-A弱毒疫苗免疫中的作用,利用荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测DHAV-A MY弱毒株接种1日龄SPF雏鸭后0.25、0.5、1、2、3和5d共6个时间点肝、脾和... 为研究基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)MY弱毒株对雏鸭细胞因子表达的影响,阐明细胞因子在DHAV-A弱毒疫苗免疫中的作用,利用荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,检测DHAV-A MY弱毒株接种1日龄SPF雏鸭后0.25、0.5、1、2、3和5d共6个时间点肝、脾和脑组织中IFN-α、IFN-β、IFN-γ,以及IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8和TNF-α共8种细胞因子的mRNA转录水平,并结合各时间点DHAV-A的荷载量进行分析。结果表明:肝和脑组织中2d时间点以及脾组织中3d时间点病毒荷载量达到最高;三种组织中,8种细胞因子的转录水平均随着病毒荷载量的增加而升高,且在各组织病毒荷载量最高时间点,8种细胞因子的转录水平均极显著升高(P<0.01),结果证明DHAV-A MY弱毒株可刺激雏鸭抗病毒细胞因子IFN-α、IFN-β、IFN-γ和TNF-α以及炎性细胞因子IL-1β、IL-2、IL-6和IL-8mRNA的转录,本研究丰富了DHAV-A MY弱毒株的免疫机制。 展开更多
关键词 基因A型鸭甲肝病毒 弱毒株 细胞因子 荧光定量RT-pcr
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rRT-PCR与微量中和实验法用于脊灰病毒血清定型的比较
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作者 陈玫 张俊棉 +2 位作者 赵娜 郭玉 张振国 《预防医学情报杂志》 CAS 2017年第8期732-735,共4页
目的对实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)法和微量中和实验2种脊灰病毒的血清型鉴定方法进行评价。方法按世界卫生组织(WHO)《脊髓灰质炎实验室手册》第4版进行病毒分离,用rRT-PCR法和微量中和实验方法对分离到的L20B阳性分离... 目的对实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)法和微量中和实验2种脊灰病毒的血清型鉴定方法进行评价。方法按世界卫生组织(WHO)《脊髓灰质炎实验室手册》第4版进行病毒分离,用rRT-PCR法和微量中和实验方法对分离到的L20B阳性分离物进行PV的血清型鉴定,用rRT-PCR法进行型内鉴定。结果 rRT-PCR法与微量中和实验对L20B阳性分离物进行脊灰病毒的血清型定型,2种方法检测脊灰病毒阳性率差异无统计学意义,检测NPEV阳性率差异也无统计学意义;rRT-PCR方法检测脊灰病毒的灵敏度为100%,特异度为100%;检测NPEV的灵敏度为63.16%,特异度为100%。结论作为WHO推荐使用的新的型内鉴定方法,rRT-PCR法对于脊灰病毒的血清型定型与常规微量中和实验一致率为100%,该方法方便快捷,可以缩短检测时限;对于NPEV的检测特异度较高,但灵敏度低于微量中和实验。 展开更多
关键词 急性弛缓性麻痹 脊髓灰质炎病毒 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 微量中和实验
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Epidemiology of SARS-CoV-2 and Emergence of UK Variant in Zintan City of Libya
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作者 Abdulwahab Kammon Abdulhmid Giweli +7 位作者 Esadk Erhouma Elhadi Rammah Ashour Elusta Salem Knifo Walid Ali Walid Benbubaker Fawzi Ebrahim Ali Elarabi 《Open Journal of Epidemiology》 2021年第4期349-359,共11页
<strong>Introduction:</strong> Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) is an infectious respiratory disease caused by SARS-CoV-2. The disease was first broke out in Wuhan City, Hubei Province, China and subseq... <strong>Introduction:</strong> Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) is an infectious respiratory disease caused by SARS-CoV-2. The disease was first broke out in Wuhan City, Hubei Province, China and subsequently spread to all countries and was considered by WHO as a worldwide pandemic. This study is aimed to determine the epidemiology of SARS-CoV-2 and the presence of UK variants in Zintan city of Libya taking some risk factors into account. <strong>Methods:</strong> In a cross-sectional retrospective study, a total of 15486 nasopharyngeal swabs were collected from COVID-19 suspected patients, travelers and people need disease-free certificates for hospital admission, etc. The samples were collected during the period from August 2020 to June 2021 and tested using real-time RT-PCR (rRT-PCR) kits for SARS-CoV-2 and UK variants. Age groups, sex, and monthly weather were considered as risk factors. <strong>Results:</strong> The positivity rate of COVID-19 in Zintan city was estimated to be (3891;25.12%) for the period from August 2020 to June 2021. Females showed significantly (p < 0.05) higher positivity rate (2100;54%) as compared to males (1791;46%). Out of the 3891 positive cases, 52 were deceased. The Case Fatality Rate (CFR) was 1.33 recorded significantly in cases aged ≥ 65 years which was higher in males (56.66%) than females (43.33%). The peak of the first wave of infection was recorded in October 2020 (590;15.15%) whereas the peak of the second wave of infection was recorded in April 2021 (727;18.71%). The positivity rate was decreased as the temperature increased. UK variant is detected firstly in May 2021 with the percentage of 6.2% of tested samples.<strong> Conclusions:</strong> Health Authorities are encouraged to continue implementing the control measures during the decrease phase of infection to stop transmission of the virus in the next wave. Early detection of new variants and studying their genetic characteristics play a valuable role in prevention and control. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 UK Variant EPIDEMIOLOGY Zintan Libya rrt-pcr
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鸭坦布苏病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法的建立 被引量:21
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作者 万春和 朱海侠 +4 位作者 施少华 黄瑜 程龙飞 傅光华 陈红梅 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期973-978,共6页
根据鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DFV)NS5基因序列特征设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),该方法检测DFV NS5基因2.74×103~2.74×107拷贝/μL反应范围内有很好的线... 根据鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DFV)NS5基因序列特征设计引物,建立基于SYBR GreenⅠ检测模式的实时荧光定量RT-PCR(real-time RT-PCR,RRT-PCR),该方法检测DFV NS5基因2.74×103~2.74×107拷贝/μL反应范围内有很好的线性关系。扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰,无引物二聚体,Tm值为(86.23±0.18)℃,对禽流感病毒、鸭肝炎病毒、鸭源禽1型副黏病毒、鸭减蛋综合征病毒、番鸭呼肠孤病毒核酸均无阳性信号扩增,可重复性好,组内变异系数为0.52%~1.48%,组间变异系数0.71%~2.21%。检测速度快,从样本处理到报告结果仅需4h。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量RT-pcr
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利用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应方法检测血液中伤寒沙门菌 被引量:2
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作者 樊粉霞 娄静 +3 位作者 陈建才 聂艳妮 阚飙 闫梅英 《疾病监测》 CAS 2012年第6期471-474,共4页
目的建立实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法检测伤寒沙门菌。方法针对伤寒沙门菌STY1631基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立... 目的建立实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)方法检测伤寒沙门菌。方法针对伤寒沙门菌STY1631基因设计特异性引物,通过优化反应条件,建立检测该靶基因的rRT-PCR方法,利用51个血清型的纯培养伤寒和非伤寒沙门菌菌株、常见非沙门致腹泻病原菌以及发热为主要症状的8种常见病原菌核糖核酸(RNA)评价该方法的特异性及敏感性,同时对伤寒沙门菌全血模拟标本进行敏感性检测。结果利用该方法检测48株伤寒沙门菌均阳性,其余33种非伤寒沙门菌血清型、致腹泻的其他5种肠道致病菌以及发热为主要症状的8种常见非沙门菌也均扩增阴性。在对纯菌总RNA检测中,rRT-PCR的最低检测限为1 pg/反应,即194个拷贝/反应。以全血模拟样品提取核酸为模板的检测中,敏感性达1×102cfu/ml。结论建立了敏感性高、特异性好的rRT-PCR检测血液中伤寒沙门菌的方法,为伤寒沙门菌感染的快速诊断及不明原因发热症状的病原初步鉴别提供了简便的手段,可用于对伤寒的早期诊断、预防控制及临床治疗。 展开更多
关键词 伤寒沙门菌 实时荧光定量反转录-聚合酶链反应 检测
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应在脊髓灰质炎病毒型内鉴定中的应用
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作者 唐海淑 崔惠 +3 位作者 宁静 翟啸虎 甫尔哈提.吾守尔 关静 《疾病预防控制通报》 2015年第2期1-4,44,共5页
目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)对脊髓灰质炎病毒(PV)进行型内鉴定,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法奠定基础。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对WHO发放的PV株和实验室分离的PV株进行型内鉴定(ITD)和... 目的应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rRT-PCR)对脊髓灰质炎病毒(PV)进行型内鉴定,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法奠定基础。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对WHO发放的PV株和实验室分离的PV株进行型内鉴定(ITD)和疫苗衍生PV株(VDPV)筛选。结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果大部分相符,但有2株Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗类似株(SL)PV2-SL被错判为非疫苗类似株(NSL),假阳性率为3.03%;1株Ⅲ型SL被错判为NSL,假阳性率为1.92%。结论在新疆脊髓灰质炎实验室rRT-PCR可以应用于脊髓灰质炎病毒的常规监测及型内鉴定。 展开更多
关键词 荧光定量逆转录-聚合酶链反应(rrt-pcr) 脊髓灰质炎病毒 型内鉴定
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