RS21-C6分子的原核表达、纯化、抗体制备及免疫组织化学分析

目的 :在原核细胞中表达胸腺发育相关分子RS2 1 C6重组蛋白 ,制备RS2 1 C6的多克隆抗体 ,研究RS2 1 C6分子在胸腺组织中的分布。方法 :在大肠杆菌中表达和纯化RS2 1 C6重组蛋白 ,免疫家兔制备多克隆抗体 ,以免疫组织化学实验分析RS2 1 C6分子在小鼠胸腺的分布。结果 :成功表达和纯化了RS2 1 C6重组蛋白 ,并制备获得高效价的特异性多克隆抗体。免疫组织化学显示RS2 1 C6分子在胸腺髓质区有较强的表达 ,在皮髓质交界处和皮质区也有散在分布。从胸腺细胞分布类型来看 ,RS2 1 C6分子共表达于胸腺淋巴细胞和基质细胞。结论 :RS2 1 C6分子在胸腺分布广泛 ,且具有较高的表达水平 ,推测其在胸腺细胞发育的不同阶段均可发挥作用 ,是一个可能具有多种功能的胸腺发育相关分子。

小鼠T细胞发育相关基因RS21-C6的表达谱及其编码蛋白的细胞内定位

研究了小鼠T细胞发育相关基因RS21-C6的表达谱及其在细胞内的定位,提取小鼠8种组织及处于5个发育阶段的胸腺细胞总RNA,逆转录成cDNA后,利用RS21-C6基因特异性引物,观察了RS21-C6基因的表达;同时构建pEGFP-N3/RS21-C6重组表达载体,在激光共聚焦荧光显微镜下观察了细胞内荧光分布。RT-PCR结果表明RS21-C6基因在所检测的组织和细胞中除骨骼肌和CD4SP胸腺亚群外均有不同程度的表达,激光共聚焦荧光显微镜观察结果表明,RS21-C6-GFP(绿色荧光蛋白)融合蛋白表达在胞浆内,RS21-C6-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果。

人RS21-C6基因的克隆及其原核表达

从小鼠胸腺细胞克隆的新基因RS21-C6的cDNA 648 bp与人表达序列标签(EST)数据库进行同源性比较,得到71个EST片段,通过EST拼接获得一致性序列,经设计引物,并采用RT-PCR方法,从人新生儿脐带血单个核细胞、肝脏、淋巴结及Jurkat细胞系 cDNA中扩增出一700bp的片段,利用快速扩增cDNA末端(RACE)方法,扩增其5′和3′端序列,得到此基因的全长序列(1118 bp),其中包含一个513 bp的开放阅读框,编码170个氨基酸,该基因在核酸水平与小鼠基因的同源性为83％,其演绎蛋白水平的一致性为75％,相似性为83％。此基因的GenBank登录号为AF210430。此外,已成功表达此基因的谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-RS21-C6融合蛋白,其表达量占总菌体蛋白的32.5％。