归龙丸对高糖诱导的RSC96神经膜细胞分泌TNF-α、IL-10的影响

目的:评估归龙丸对高糖诱导的大鼠神经膜细胞(rats schwann cell,RSC96)分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、血清白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的影响。方法:将RSC96神经膜细胞复苏及培养,在含17 mmol/L的葡萄糖培养基中培养48 h。分为S1组(维生素D_(3)+等渗乙醇溶液)、S2组(维生素D_(3)+等渗乙醇溶液+归龙丸高剂量)、S3组(维生素D3+等渗乙醇溶液组+归龙丸中剂量)、S4组(维生素D_(3)+等渗乙醇溶液组+归龙丸低剂量)、S5组(维生素D_(3)+CYP24A1抑制剂genistein的乙醇溶液)等5组,S1~S4组中分别加入维生素D_(3)及与其等浓度的乙醇,S5组加入维生素D_(3)及CYP24A1抑制剂genistein的乙醇溶液,作用48 h。48 h后应用酶联免疫吸附试验法检测各组细胞上清液中TNF-α、IL-10的水平,并通过相应的基因引物检测RSC96细胞内CYP24A1m表达水平。结果:经归龙丸和CYP24A1抑制剂组处理后的神经膜细胞,其TNF-α的水平下降,IL-10水平上升,CYP24A1m表达水平下调。结论:归龙丸可能通过抑制CYP24A1蛋白表达,间接调节维生素D_(3)使神经膜细胞TNF-α分泌减少、IL-10分泌增加,从而对高糖诱导的RSC96神经膜细胞起到保护作用。

人参环氧炔醇对体外培养RSC96细胞的实验观察

目的研究人参环氧炔醇(Panaxydol,PND)对体外培养RSC96细胞神经营养因子及髓鞘蛋白表达的影响并探讨其机制。方法用含不同血清浓度的培养基培养RSC96细胞,MTT检测其增殖能力,以获取最适宜RSC96细胞体外生长的血清浓度。在适宜的血清培养基中加入PND(10μmol/L)处理RSC96细胞,以RT-PCR、western blot及ELISA检测RSC96细胞NGF和BDNF的表达。另外,预先在培养基中加入钙离子通道阻滞剂尼非地平探讨PND可能的作用途径。结果培养基血清浓度为4mmol/L时,RSC96细胞生长形态最接近于原代Schwann细胞。PND增强RSC96细胞表达和释放NGF和BDNF(P<0.05)。尼非地平的使用,则削弱了PND对RSC96细胞的作用(P<0.05)。结论在适宜的血清培养基中,体外培养的RSC96细胞可替代原代Schwann细胞,作为研究药物对它的影响及机制的细胞模型。PND增强RSC96细胞的生物活性的作用机制可能通过Ca2+信号途径介导。

Wnt5a基因慢病毒的构建与RSC96雪旺细胞的感染研究

目的 构建大鼠Wnt5a基因慢病毒并感染RSC96雪旺细胞,观察慢病毒感染情况及Wnt5a表达情况。方法 设计大鼠Wnt5a基因特异性RNAi序列,构建并包装成可感染细胞的慢病毒,感染RSC96雪旺细胞后通过Celigo观察细胞中荧光表达,并通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)检测细胞中Wnt5am RNA的表达情况。结果 构建的Wnt5a基因慢病毒在感染RSC96雪旺细胞后可表达绿色荧光,细胞中Wnt5am RNA的平均表达量为0.206±0.056。结论 Wnt5a基因慢病毒构建成功,可为研究Wnt5a调控的周围神经损伤修复时雪旺细胞功能的相关研究提供便利。

胰岛素样生长因子-1对共培养的神经细胞和施万细胞超微结构的影响

目的分析胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对体外培养的神经细胞和施万细胞超微结构的影响。方法建立VSC4.1大鼠神经细胞与RSC96大鼠施万细胞共培养模型:将VSC4.1神经细胞与RSC96施万细胞共同培养,通过改善培养条件,使之共同生长。经相差显微镜观察,确定共培养的两种细胞可发生相互作用。透射电镜观察单独培养的神经细胞、施万细胞及共培养时细胞超微结构的变化。观察IGF-1的影响:实验分为共培养对照组和IGF-1组(20 ng/ml)。培养5天后,收集细胞进行扫描电镜和透射电镜观察。结果透射电镜观察单独培养的神经细胞及施万细胞均可见不同的分化状态,其超微结构各异。透射电镜结果:与对照组相比,IGF-1组中细胞表面绒毛状或指状突起明显增多且联系紧密。扫描电镜结果:对照组与IGF-1组中均可见RSC96细胞包绕轴突形成髓鞘(可称之为成髓的施万细胞)。对照组中所有的细胞表面均比较平滑,绒毛样突起不明显。IGF-1组的细胞表面不再光滑,神经细胞和未成髓的施万细胞表面呈明显的绒毛样突起,而包裹轴突的成髓施万细胞表面主要呈片层状突起。结论 IGF-1可引起VSC4.1神经细胞和RSC96施万细胞超微结构及表面形态的改变。这或许是引起其功能改变的外在表现形式。

富血小板凝胶上清对施万细胞活性的影响

目的:观察富血小板凝胶上清(PRP-r)对大鼠施万细胞(SCs)增殖和分泌神经再生相关活性物质的影响。方法:实验分为PRP-r组和control组。利用大鼠腹主动脉血制备富血小板血浆(PRP),用CaCl激活PRP得到PRP-r。CCK-8检测RSC96的增殖能力,ELISA检测RSC96培养上清中神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)水平,Western Blot检测RSC96细胞中神经细胞黏附分子(NCAM)、p75神经营养因子受体(p75NTR)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S100钙结合蛋白B(S100B)的表达。结果:RSC96的增殖能力在PRP-r作用下显著提高,与对照组相比,培养上清中NGF、BDNF、GDNF水平增加,细胞中NCAM、p75NTR、GFAP、S100B蛋白表达上调。结论:PRP-r可以促进RSC96细胞增殖,促进神经营养因子分泌及相关蛋白的表达。

高糖对RSC96雪旺细胞的损伤机制

目的观察高浓度葡萄糖对雪旺细胞增殖及凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法将体外培养的RSC96雪旺细胞分为正常对照组(25 mmol/L)和高糖组(100 mmol/L),分别应用M TT及流式细胞技术观察高糖对RSC96细胞增殖及细胞凋亡的影响。应用Western blotting观察高糖对Lipin-1、神经生长因子(NGF)蛋白表达的影响,并应用免疫荧光技术进一步验证在高糖刺激下Lipin-1蛋白表达变化。结果与正常对照组比较,高糖组对RSC96细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05)。与正常对照组晚期凋亡率(1.56±0.72)%相比,高糖组细胞晚期凋亡率(12.40±0.65)%明显增加。高糖显著降低Lipin-1和NGF蛋白表达(P<0.05)。结论高糖显著抑制雪旺细胞增殖并促进细胞凋亡;同时显著降低了Lipin-1和NGF的蛋白表达。提示高糖对神经细胞的损伤作用可能存在多种机制。

葛根素对高糖诱导的RSC96细胞凋亡和自噬相关蛋白的影响

目的探讨葛根素对高糖诱导的RSC96细胞损伤的保护作用是否与自噬调节有关。方法建立体外RSC96细胞高糖损伤模型,根据Westernblot检测CleavedCaspase-3蛋白判断造模成功与否。通过CCK-8法确定葛根素干预浓度。免疫细胞化学法检测Beclin-1蛋白的表达;Western blot检测Cleaved Caspase-3、LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1蛋白的表达。结果与高糖组相比,葛根素预处理可显著提高高糖诱导后RSC96细胞的存活率(P<0.05),抑制Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白的表达(P<0.05),增强p62蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根素可改善由高糖诱导的RSC96细胞损伤,其机制可能与其抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达、提高p62蛋白表达有关。[营养学报,2020,42(3):281-286]