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Molecular Cloning and Expression of RSSG58 Gene in Rice Sperm Cells 被引量:3
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作者 苗琛 苟小平 +4 位作者 兰利琼 鲍锦库 徐莺 王胜华 陈放 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第2期234-241,共8页
Myosins, a large family of structurally diverse mechanoenzymes, which, upon interaction with actin filaments, convert energy from ATP hydrolysis into mechanical force, play an important role in male reproductive proce... Myosins, a large family of structurally diverse mechanoenzymes, which, upon interaction with actin filaments, convert energy from ATP hydrolysis into mechanical force, play an important role in male reproductive processes. In this study we report the rice ( Oryza sativa L.) RSSG58 gene, which was cloned from the cDNA library of rice sperm cells by using sperm cell mainly expression subtractive clone as probe. This gene encodes a putative 66.7 W polypeptide, which shows similarity to the myosin heavy chain of Arabidopsis thaliana, and consists of 579 amino acids with an isoelectric point (pI) of 4.885. RSSG58, which is a member of a divergent gene family, generates transcripts of 2 278 bp and 2 437 bp that differ only in their polyadenylation sites. Southern hybridization showed that RSSG58 has only one copy in rice genome and RSSG58 transcripts are most abundant in sperm cells, with two distinct signals. The RT-PCR analysis indicated that the transcriptions of the RSSG58 gene were various in the different development stages and tissues. The greatest accumulation of RSSG58 mRNA was detected in sperm cells, while weaker expression was detected in leaves, microspore mother cells, unicellular microspore pollen stage, two-cell stage pollens, mature pollens and pollinated ovaries. These results suggest that RSSG58 is especially abundantly expressed in rice sperm cells. 展开更多
关键词 molecular cloning rssg58 gene sperm cell EXPRESSION RICE
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水稻精细胞基因RSSG58启动子的克隆分析及表达载体构建 被引量:2
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作者 苗琛 兰利琼 +4 位作者 鲍锦库 唐琳 徐莺 王胜华 陈放 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期153-158,共6页
根据公布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种"桂朝2号"黄化苗基因组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58.经对Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具... 根据公布的水稻基因组测序的比较和水稻精细胞优势表达的RSSG58基因cDNA序列,以水稻品种"桂朝2号"黄化苗基因组DNA为模板,用PCR方法克隆出RSSG58在起始密码子以前的上游调控序列Pr58.经对Pr58启动子进行的鉴定和分析表明,具备大多数高等植物启动子的保守元件,预计它对RSSG58基因在的特异表达方面具有一定的作用.为了鉴定RSSG58基因的基本启动子元件,将RSSG58基因5′侧翼序列做缺失片段分析,由PCR从Pr58中得到3个不同大小两端带有HindⅢ,BamHⅠ酶切位点的片段Pr58Ⅰ,Pr58II和Pr58III,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报告基因GFP的植物表达载体pRGFPⅠ,pRGFPII和pRGFPⅢ,用于农杆菌介导法水稻遗传转化.其目的是为进一步在模式植物中研究其表达功能奠定基础. 展开更多
关键词 精细胞 载体构建 启动子 水稻 rssg58基因 表达载体 绿色荧光蛋白 基因克隆
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RSSG58基因在水稻精细胞中的表达 被引量:1
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作者 苗琛 兰利琼 +6 位作者 张小林 鲍锦库 曾宇 杨满业 白洁 蔡应繁 陈放 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2003年第3期251-256,共6页
RSSG5 8是利用抑制差减杂交技术从水稻精细胞文库中筛选到的在精细胞中优势表达的基因 ,推测其编码的蛋白质与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性 (4 6 % ) ,并具有肌球蛋白特色的结构域。把RSSG5 8基因开放编码框连接到表达载体pQE30... RSSG5 8是利用抑制差减杂交技术从水稻精细胞文库中筛选到的在精细胞中优势表达的基因 ,推测其编码的蛋白质与拟南芥的肌球重链蛋白有一定的同源性 (4 6 % ) ,并具有肌球蛋白特色的结构域。把RSSG5 8基因开放编码框连接到表达载体pQE30上 ,重组质粒在E .coliM15中表达出N端融合了 6×His的融合蛋白。SDS PAGE分析表明 ,表达产物的分子量约为 6 6kD ,其表达量占菌体总蛋白的 8.6 %。分离纯化融合蛋白来免疫家兔 ,制得了高效价、高特异性的多克隆抗体。Western杂交显示 ,在分离的精细胞内该基因编码的蛋白表达量很高 ,而成熟花粉和二细胞中只有微弱表达 ,单细胞花粉、花粉母细胞没有杂交信号 ,表明RSSG5 8基因在精细胞中优势表达。 展开更多
关键词 rssg58基因 精细胞 重组蛋白表达 抗血清 Western杂交 水稻
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