基于RT-HPLC的古代mtDNA序列差异性分析

线粒体DNA具有突变速度快、重组率低、严格母系遗传、拷贝数多等特点,近年来成为分子考古研究中的一个热点。为了研究古墓群中的血亲关系,可以从古墓葬遗留骨骸、牙齿中提取和扩增mtDNA片断进行分析。通过设计2对部分重叠的引物,扩增线粒体16055-16218区域目标片段,进行反相高效液相色谱分析,确认四个样品对应片断在反相柱上的保留时间上存在差异,以此推断扩增片段在序列上可能存在差异。为利用mtDNA分析人类母系血缘关系奠定了基础。

柳叶红茎黄芩不同部位中4种黄酮类活性成分质量浓度的RT-HPLC法测定

采用RT-HPLC法,以KINETEX-C18为色谱柱(4.6mm×100mm,2.6μm)、水—四氢呋喃—磷酸(体积比为80∶10∶0.2)和乙腈为流动相,流速0.7mL/min,柱温30℃,检测波长275nm,建立了柳叶红茎黄芩的根、茎、叶中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素质量浓度的RP-HPLC测定方法.结果表明:4种活性成分总量由多到少依次为根、茎、叶,其中汉黄芩苷的质量浓度比其它三种的高.表明实验方法操作简便、快捷、重现性好、准确率高,可用于评价该药材的药用价值.

2,4-二硝基氟苯柱前衍生RT-HPLC法测定γ-氨基丁酸

以富含γ-氨基丁酸（GABA）的大豆胚芽乳、黄酒、有机糙米、绿茶和杨梅为研究对象,采用2,4-二硝基氟苯（FDNB）柱前衍生和等度洗脱,建立一种快速测定γ-氨基丁酸含量的RT-HPLC方法。该方法简便,分析时间短（〈7 m in）,灵敏度高,稳定性和重现性好。优化后色谱条件如下：HypersilODS2 C18,流动相为乙腈∶水∶磷酸盐缓冲液（pH=7.2,体积比为20∶20∶60）,检测波长为360 nm。在最适条件下,γ-氨基丁酸的线性检测范围为0.016~1.000 mg/mL,线性关系良好,回收率为96.5%~104.0%。

苯甲曲秦片剂含量及溶出度反相HPLC测定

目的 建立苯甲曲秦片剂的含量、溶出度反相HPLC测定方法。方法Capcell-pak C18色谱柱，甲醇／1-庚烷磺酸钠缓冲液为流动相，检测波长为256nm，流速1．0ml／min，以水杨酰胺作为内标计算含量。Capcell-pak C18色谱柱，乙晴/0.025mol／L磷酸二氢钾溶液缓冲液为流动相，检测波长为210nm，流速1.0ml／min，外标法计算溶出度。结果 含量试验线性范围为：9.375～150mg／100ml，r=0.9999，回收率为103．35％，RSD为0．61％。溶出度线性范围为：1．25～20mg／100ml，r=0．9999。结论 该条件下反相HPLC测定苯甲曲秦片剂的含量、溶出度方法快速简便。

芬特明片剂含量以及溶出度样品含量的反相HPLC测定

目的:用反相HPLC测定方法检测芬特明片剂的含量和溶出度。方法:Capcell-pakC18色谱柱,甲醇为流动相,检测波长为254nm,流速1.0ml.min-1,以咖啡因作为内标计算含量。Capcell-pakC18色谱柱,甲醇/辛烷磺酸钠离子溶液作为流动相,检测波长为208nm,流速1.0ml.min-1,外标法计算溶出度。结果:含量试验线性范围为:18.75～300mg.100ml-1,r=0.9999,回收率为100.06%,RSD为0.22%。溶出度线性范围为:1～16mg.100ml-1,r=0.9999。结论:该条件下反相HPLC测定芬特明片剂的含量、溶出度药物含量测定方法快速简便,结果满意。

盐酸特比奈芬软膏含量反相HPLC法测定

目的：用反相HPLC测定方法检测盐酸特比萘芬软膏的含量。方法：Capcell-pak C18色谱柱,0.05M KH2PO4/乙晴为流动相,检测波长为225nm,流速1.0 ml·min^-1,外标法计算含量。结果：含量试验线性范围为：0.1-200 mg·100 ml^-1,r=0.9999,回收率为101.09%,RSD为0.84%。结论：该条件下反相HPLC测定盐酸特比萘芬软膏的含量快速简便,结果满意。

HPLC法测定酒石酸哌马色林原料药的有关物质

目的建立测定酒石酸哌马色林原料药有关物质含量的反相高效液相色谱法。方法采用COSMOSIL PAQ-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相A为0.02 mol·L^(-1)磷酸二氢钠水溶液(用三氟乙酸调节pH至3.0),流动相B为甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长226 nm,柱温35℃,进样量为20μL。结果酒石酸哌马色林与各有关物质均能达到基线分离,各有关物质在质量浓度0.03~0.6 mg·L^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,r≥0.999 1,回收率为90%~108%(RSD≤5%,n=9),3批样品中有关物质的含量质量分数均低于0.1%。结论本方法可以用来检测酒石酸哌马色林原料药中的有关物质。

葡萄酒有机酸的HPLC分析中色谱条件的优化

本文优化了反相高效液相色谱测定葡萄酒有机酸的色谱条件。研究表明,采用Waters Atlantis T3反相C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),保护柱为Waters Atlantis T3 Security Guard(4.6mm×1.5mm,5μm),含1%甲醇的0.02mol/L磷酸二氢钾(pH2.7)为流动相,等度洗脱,流速为0.8mL/min,UV紫外检测器,柱温40℃,检测波长为210nm和243nm,能将7种有机酸有效分离。精密度和回收率分析表明,该方法操作简单、准确率高。

葛根素腹腔注射在家兔房水中的药代动力学研究

目的 测定腹腔注射葛根素后不同时间家兔房水中的质量浓度 ,计算其药代动力学参数 ,研究药代动力学特点。方法 44只健康新西兰成年家兔随机分为 11组 ,各组每只家兔腹腔注射葛根素 80mg/kg加等量 5 %葡萄糖液 ,在用药后 0、0 5、1、2、3、4、6、8、12、16、2 4h取房水 ,采用反向高效液相色谱法 (RP HPLC)进行测定。 3P87软件拟合药代动力学参数。结果 注射后其质量浓度在正常家兔房水呈二室模型 ,3P87软件拟合药代动力学参数数值为 :达峰质量浓度(Cmax)为 1 613 μg/ml,达峰时间tmax为 1 680h ,半衰期t1/ 2α为 1 3 5 8h、半衰期t1/ 2 β为 19 72 2h ,表观分布面积 (V/F)为 4 888L ,曲线下面积 (AUC)为 8 5 0 1μg/(ml·h) ,清除率 (CL)为 2 165L/h。实测值 :3 0min为 ( 0 778± 0 2 89) μg/ml,2h达峰值为( 2 3 18± 0 14 7) μg/ml ,随后逐渐下降 ,2 4h几乎测不到。 结论 本方法灵敏、特异、准确 ,可用于房水中葛根素质量浓度测定 ;葛根素通过腹腔注射能透过血房水屏障进入房水 ,半衰期长。此结果为葛根素全身用药治疗眼部疾病提供了实验依据。

一种利用RT-HPLC分析乳酸菌产生物胺的方法

具有脱羧酶活性的乳酸菌可通过氨基酸的脱羧反应产生具有潜在安全风险的生物胺。本文利用脱羧酶培养基初步筛查61株乳酸菌产生物胺情况,再通过RT-HPLC法测定其在发酵液和发酵乳中的生物胺含量。用10%的三氯乙酸提取样品中的生物胺,采用苯甲酰氯衍生处理后,以甲醇/水为流动相,进行梯度洗脱,流速0.8mL/min,紫外检测器波长为254nm。结果显示,组胺和酪胺得到良好的分离,在给定的浓度范围内呈现良好的线性关系(R2>0.995)。在发酵液和发酵乳中添加生物胺混合标准溶液,平均回收率为97.92%-101.14%,相对偏差RSD<5%。结果表明,发酵液与发酵乳中生物胺的RT-HPLC法,是一种快捷、稳定、灵敏度高的检测方法,其与脱羧酶培养基法结合可以准确地实现对乳酸菌产生物胺的评价。

羊胎盘免疫活性小分子肽的分离纯化

目的:从羊胎盘中分离纯化出具有免疫活性的小分子肽。方法:采用常规方法制备羊胎盘超滤液,利用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)对羊胎盘提取液进行分离纯化及纯度分析,并利用E-玫瑰花环实验对各组分进行免疫活性评价,利用Edman降解法对其组分进行N端测序。结果:利用RP-HPLC工艺成功分离出纯度较高的3种小分子肽,并确定其中两者具有免疫活性;对活性较强的肽进行测序、检索,结果表明为未知组分。结论:RP-HPLC是分离、分析活性肽类较理想的手段之一,并证实了羊胎盘含有具有免疫活性的小分子肽。

反相高效液相色谱法测定紫穗槐中的鱼藤酮

测定紫穗槐不同部位的鱼藤酮质量分数,以研究紫穗槐不同时期鱼藤酮质量分数的变化规律。采用反相高效液相色谱法,首次对紫穗槐中的鱼藤酮进行质量分数测定,并确定其定量方法。结果表明,采用该方法测量准确,重复性好。紫穗槐叶7月份质量分数最高为0.0115 mg/g,种子9月份质量分数最高为0.0307 mg/g。

湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲分布及与LDC表达的关系

目的:测定湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量,分析石杉碱甲分布与赖氨酸脱羧酶基因(LDC)表达的关系。方法:采用HPLC测定蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量,HPLC条件:Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.08 mol/L醋酸铵(32∶68,V/V),流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,检测波长为308nm。以肌动蛋白基因为内参物,通过半定量RT-PCR比较LDC在根、茎、叶中的表达量。结果:石杉碱甲在0.5～10.0μg/mL线性关系良好,平均加样回收率为102%,RSD为0.32%;湘西蛇足石杉根、茎、叶中石杉碱甲含量分别为(118.35±0.77)μg/g、(411.09±2.47)μg/g、(562.15±2.86)μg/g;半定量RT-PCR分析表明LDC在根、茎、叶中表达量无明显差异。结论:湘西蛇足石杉不同部位石杉碱甲含量差异显著;推测赖氨酸脱羧酶不是石杉碱甲生物合成中的关键酶。

大鼠肺微血管内皮细胞磷酸二酯酶mRNA表达与活性检测

目的检测大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）内磷酸二酯酶（PDE）同功酶mRNA表达及基础酶活性,明确PMVECs存在的PDE亚型及体外活性。方法采用植块法分离培养PMVECs,RT-PCR法测定PDE mRNA表达,以高效液相色谱（PHLC）检测环核苷酸在酶反应前后的含量变化,计算PDE活性。结果检测结果显示,PMVECs中含有PDE1A、1C、2A、3A、3B、4A、4B、4C、4D、5A、7A、7B、8A、8B、9A、10A、11A共17种PDE mRNA,而PDE1BmRNA未见表达,酶量在5~20μl范围内与PDE活性存在良好的线性关系。结论PMVECs中存在17种PDE基因表达,并有较高的基础酶活性。

转基因青蒿环境释放试验及评价

在环境释放条件下,研究了3种转基因青蒿品系及其亲本品种的农艺性状,分析了各个农艺性状指标之间的相关性。利用实时荧光定量逆转录PCR技术检测3种转基因青蒿目的基因表达变化差异,并利用HPLC-ELSD技术测定青蒿材料中的青蒿素含量。研究表明:在田间栽培条件下,转基因青蒿植物个体发育正常;转基因青蒿在株高、冠幅、茎粗、叶间距、叶形、叶片宽度方面与其受体材料无显著差异,但在个别时间点存在例外;转基因青蒿和其亲本材料的生长趋势大致相似;3种转基因青蒿目的基因表达变化显著,转基因青蒿中青蒿素含量明显增高,与预期结果一致。

复合调味粉中罂粟成分的实时荧光PCR检测方法

研究建立了复合调味粉中罂粟成分检测的实时荧光PCR方法,检出限0.1%,灵敏度10pg,与高效液相色谱法比较,检出限更低,特异性更好。该方法可作为对复合调味粉中非法添加罂粟成分鉴定的检测方法,也可为其他罂粟相关方法研究提供借鉴和参考。

小鼠肝脏羧酸酯酶的cDNA克隆、表达及应用

从小鼠肝脏中克隆羧酸酯酶(CES)基因家族成员Ces1f的cDNA,在大肠杆菌中表达,并验证重组酶对农药的作用。采用RT-PCR克隆Ces1f cDNA,与pUCm-T载体连接测序后,亚克隆至表达载体pET-32a,构建重组表达质粒pET-32a-Ces1f,转化到宿主菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,经SDS-PAGE鉴定,采用Ni柱对表达产物进行纯化并测重组CES的酶比活,利用HPLC验证重组酶对不同农药的作用。结果显示:成功获得纯化的77kDa的重组CES蛋白,其酶液的比活为55.37U/mg,HPLC检测发现重组CES对西维因、呋喃丹及甲基对硫磷等具有降解作用。成功表达重组CES,其对农药具有降解作用,为环境中农药残留的降解奠定了基础。

通脉降脂片质量标准分析

目的建立通脉降脂片质量标准。方法采用TLC法对处方中笔管草、川芎、荷叶、三七进行定性鉴别,采用HPLC法测定处方中三七的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量。结果 TLC鉴别笔管草、川芎、荷叶、三七斑点清晰,专属性强,空白对照无干扰;测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1平均回收率分别为:98.9%、100.4%、101.7%,RSD分别为1.27%、0.70%、0.74%,(n=9)。结论本方法结果准确,重现性良好,可用于通脉降脂片的药品质量控制。

甘油对红曲霉CG-6莫纳可林K合成及相关基因表达的影响

研究甘油对红曲霉CG-6莫纳可林K合成及相关基因表达的影响,采用高效液相色谱和荧光定量PCR法测定莫纳可林K产量及相关基因表达量的变化。结果表明:甘油浓度在0～12%时,随其浓度增加,胞内和胞外总莫纳可林K积累量呈先增加后减少趋势,甘油浓度为8%时,胞内和胞外总莫纳可林K积累量均达到最大,分别为9 474. 4、7 005.8μg/(g干菌重);甘油浓度为8%,随着培养时间延长,莫纳可林K合成相关基因mokA、mokD、mokE、mokG、mokH、mokI表达量较对照组逐渐升高,mokB、mokC表达量变化不大,mokF表达量逐渐下降;甘油浓度大于8%培养9 d时,mokB、mokC、mokD、mokE、mokF、mokG、mokH出现下调趋势。实验结果为研究甘油等碳源对红曲霉次级代谢产物合成及相关基因表达影响提供了参考。

青海地区胡芦巴中胡芦巴碱含量分析

[目的]采用HPLC外标法对胡芦巴碱的含量进行定量分析。[方法]用浓度50%甲醇超声提取青海产胡芦巴中胡芦巴碱,以甲醇∶水=12∶88为流动相,在波长265nm下,采用RP-HPLC法测定其含量。[结果]结果表明：胡芦巴碱的线性范围为3.28～52.5μg/ml,R^2=0.9995,加样回收率为97.3%。互助县胡芦巴中胡芦巴碱的含量最高,为4.90mg/g;湟中县葫芦巴种子次之;西宁葫芦巴地上部分的胡芦巴碱的含量为1.89mg/g。[结论]地区间土壤和气候因子差异较大,可能是胡芦巴中胡芦巴碱含量差异大的相关影响因素,值得进一步研究。