巢式RT-PCR在猪传染性胃肠炎病毒检测中的应用

建立对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的巢式RT-PCR(RT-nested PCR)检测方法,为该病的诊断和流行病学调查提供更为可靠和敏感的手段。根据GenBank中收录的TGEV,纤突蛋白S基因的核酸序列设计了2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR、RT-nested PCR方法,在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的RT-nested PCR诊断方法。试验结果成功扩增出长度为886 bp和690 bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。表明RT-nested PCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此法简单省时、灵敏性高。

深圳市HFRS疫源地鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒的基因特征对应性研究

目的 了解深圳市肾综合征出血热（HFRS）疫源地鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒二者的病原学特征及联系,为HFRS的防控提供科学依据.方法 收集疑似HFRS病人急性期血清标本,并在相同区域开展笼日法捕鼠,无菌取鼠肺.分别采用ELISA和直接免疫荧光法筛选阳性标本,选择代表性血清标本以及鼠肺标本进行逆转录-套式聚合酶链反应（RT-nested PCR）扩增部分M和S片段及核苷酸序列测定,与国内外的汉坦病毒毒株一起进行同源性比对和系统进化树分析.结果 472份鼠肺经直接免疫荧光检测共获得阳性鼠肺47份,带毒率为9.96%.对60份IgM抗体阳性的血液标本进行RT-nested PCR扩增,检出12份阳性,阳性率为20%.从代表性的8份鼠肺和8份病人血清中提取的标本二者之间M片段核苷酸序列的同源性高达95%以上,S片段之间的同源性高达96.5%以上.其推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%～100%、98.4%～100%.深圳市HFRS疫源地鼠携带的汉坦病毒和人感染汉坦病毒均为汉城型S2亚型.结论 深圳市流行的汉坦病毒为SEO型S2亚型.无论是同一地区的鼠和人之间,还是不同地区的鼠和人之间,汉坦病毒都是具有较高的同源性.