Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据获得的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒（DHVⅠ）RNA聚合酶基因序列，应用Primer Premier5．0软件设计了1对引物，建立了检测DHVⅠ的RT-PCR方法。该法能从DHVⅠ中扩增到440bp的条带，而对正常鸭胚尿囊液、健康鸭肝、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、雏鹅新型病毒性肠炎病毒、禽流感病毒（H5N2亚型）、鸭病毒性肿头出血症病毒、鸭源多杀性巴氏杆菌（5：A）的扩增结果均为阴性。该法最低可以检测到30pg的DHV工核酸模板。RT-PCR对DHVⅠ强毒CHv-1株人工感染发病死亡鸭肝的检测结果与病毒分离和Dot—ELISA检测结果的阳性检出率均为100％，对脾、肺、脑病料的检出率显著（P≤0．01）高于病毒分离和Dot-ELISA。RT-PCR、病毒分离和Dot—ELSA对1987～2005年采集且保存于-20℃的经病毒分离已确诊为鸭肝炎的临床送检肝病料的检出率分别为100％（19／19）、36．84％（7／19）和57．98％（11／19），对2000-2005年采集且于-20℃保存的来源于中国18个省份发病鸭群的48份肝病料的检出率分别为100％（48／48）、56．25％（27／48）和75．00％（36／48）。结果表明，建立的RT—PCR方法具有良好的特异性和敏感性，可用于DHVⅠ的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查。

应用RT-PCR方法检测人与动物的SARS冠状病毒

目的选择合适的RTPCR检测方法应用于人和与人类生活密切相关的多种野生、圈养和市售动物携带SARS样冠状病毒的检测,探索SARS样病毒的来源。方法收集深圳SARS临床诊断病例、疑似及观察病例咽漱液标本共350份,分别用TaqMan和分子信标荧光RTPCR法进行检测;收集386只动物的咽肛拭子样本及病毒分离培养物共442份样品进行了TaqMan荧光RTPCR和普通RTPCR法的检测。结果41例临床确诊病例荧光RTPCR法检出10份阳性,阳性率24.39%,TaqMan法和分子信标法检出结果8份符合(符合率88.89%)。对动物样本病毒分离培养物细胞病变样本18份进行检测,检出16份阳性,其中14份(87.5%)样本来源为果子狸。深圳东门市场及广东周边地区市场及养殖场动物样本检测结果:果子狸、貉及獾类动物总的阳性率为39.02%,而其它动物的阳性率为0,两者间差异具有显著性(P<0.01);对东门市场109只主要野生动物咽肛拭子样本进行PCR检测,阳性率44.04%,而145只野外的野生动物阳性率仅为0(P<0.01)。结论TaqMan法和分子信标法均可用于SARS检测;动物中尤其是果子狸等野生动物可能携带有SARS冠状病毒。

禽流感病毒A型和H5亚型RT-PCR检测试剂盒研究

目的 检测和鉴定A型、H5亚型禽流感病毒 (AIV) ,研发一种高效实用的检测手段。方法 根据Ming ShiuhLee报道的文献设计、合成引物 ,采用反转录和PCR一步法对A型、H5亚型禽流感病毒cDNA进行扩增和电泳鉴定 ,组装成禽流感病毒RT PCR试剂盒 ,对H1～ 15亚型AIV参考株、38份AIV国内分离株进行检测试验。结果 建立了A型、H5亚型禽流感病毒RT PCR检测方法 ,并在此基础上组装试剂盒 ,用A型试剂盒检测时 ,全部AIV毒株均为阳性 ,能检测 1 10 2 4血凝单位禽流感病毒 ;用H5亚型试剂盒检测时 ,仅有H5亚型AIV参考株和 19株H5亚型AIV分离株呈阳性 ,其余H1～H4、H6～H15参考株和H7、H9分离株以及 1株H5分株均为阴性 ,能检测1 6 4血凝单位禽流感病毒。 2种试剂盒对实验感染鸡病料检出率均为 10 0 %。结论 研制的AIVA型、H5亚型RT PCR试剂盒具有特异性强、敏感性高、稳定性和重复性好的特点。

利用RT-PCR检测库尔勒香梨苹果茎痘病毒的研究

以库尔勒香梨新鲜、冷藏、冷冻叶片和皮层为材料 ,对提取双链RNA (dsRNA)的 2种方法和提取总RNA的 3种方法进行了分析比较 ,并对总RNA的提取方法进行了改进 ,获得了纯度较高、完整性较好的dsRNA和总RNA ,在此基础上进行了反转录 (RT)和PCR扩增。在国内首次完成了对苹果茎痘病毒 (ASPV)的RT PCR检测 ,建立了ASPV有效RT PCR反应体系。用此体系扩增到ASPV一个长约 316bp的片段。实验表明以dsRNA和总RNA为模板均能成功进行RT PCR检测 ,且dsRNA优于总RNA。

桃树李坏死环斑病毒的RT-PCR检测方法研究

以桃树叶片为材料提取总RNA,根据PNRSV外壳蛋白基因设计引物,进行RT和PCR扩增,获得良好结果,对目的片段经过克隆测序,与NCBI中报道的PNRSV外壳蛋白基因序列同源性最高达98%。在建立的RT-PCR技术基础上,对RT-PCR体系中的主要影响因子进行了优化研究。

黄瓜上烟草花叶病毒的RT-PCR检测

根据烟草花叶病毒TMV的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板进行cDNA合成和PCR扩增,对2002年采集的75份黄瓜病毒病样本进行了检测,结果从感病组织中扩增出与预期的425bp大小一致的目标片段而健康组织无此扩增产物;29份材料检测到TMV,检出率达38.67%。

辽宁地区中华蜜蜂囊状幼虫病的RT—PCR检测

蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病。通过RT-PCR方法,我们在辽宁地区检测出了该病,并且辽宁地区的蜂囊状幼虫病病毒与早期我国在广东地区检测到的中蜂囊状幼虫病病毒基因序列有所不同,推测中蜂囊状幼虫病病毒可能存在地区的差异性。

狂犬病毒RT-PCR检测方法的建立

根据狂犬病毒保守序列设计引物,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)建立了一种检测狂犬病毒的方法,以期实现对严重危及人和动物生命安全的狂犬病毒直接检测。

新城疫病毒B_(95)株的RT-PCR检测

根据文献发表的 F基因序列 ,设计了 1对新城疫病毒 B95株的特异引物 NDV- P1 / P2 ,探讨了以其进行 RT- PCR检测的可行性。结果证明 ,用该引物可以扩增出 1条 310 bp的特异核酸带 ,敏感性为 0 .0 0 4 3mg/ L。

RT-PCR检测癌胚抗原基因转染树突状细胞的表达

目的 :通过向人DCs转染含人CEA真核表达质粒 ,使DCs特异性的表达和提呈CEA。方法 :RT -PCR检测转染人CEA真核表达质粒DCs的表达。结果 :转染CEA质粒的DCs,RT -PCR检测有一特异性扩增带。结论

TOFD+B扫描成像技术与RT检测的对比分析

介绍了TOFD和B扫描技术相结合与RT检测方法各种技术参数对比对比及常规应用

柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。

利用RT-PCR与PVP-ELISA检测水稻瘤矮病单头叶蝉

目前国内外对水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)的研究主要集中在其核衣壳蛋白和外衣壳蛋白的性质、结构及其与介体的亲和性、与介体传毒能力的关系等方面,本室在已有室内检测研究的基础上,利用RT-PCR和PVP-ELISA法对田间带毒叶蝉进行检测,并对2种方法的检测结果进行了比较.

长输管道PAUT检测与RT检测效果对比实证研究

目前,长输管道运行安全已成为时事热点,在研究PAUT检测、RT检测的原理和特点基础上,依据现行标准规范对PAUT检测、RT检测的优缺点和评判原则进行了对比,通过采取实证案例研究的形式,以某长输管道项目作为研究样本,分析PAUT检测和RT检测检出缺陷对比、力学性能对比,通过对比证明了PAUT检测对于缺陷的检出能力相对较高,并在此基础上进行了双百双评验证,进一步确定了PAUT检测的有效性和准确性。最后结合当前长输管道无损检测存在的问题,对将来长输管道项目检测管理提出有针对性的改进建议和方向。

油气管道环焊缝PAUT检测与RT检测的比较分析

介绍了PAUT(相控阵检测)和RT(射线检测)方法的原理及特点,对油气管道环焊缝分别进行相控阵检测和射线检测,将射线底片和相控阵图谱进行了对比。结果表明PAUT对缺陷的检出率相对较高。分析了产生的原因,指出了两种方法现场检测的优劣势。

基于热采压力管道检测DR与RT优势分析

结合中石油某油田所属的注汽热采压力管道在线检验评价项目数据,通过对DR技术和RT胶片检测法原理的阐述,从检测过程、检测结果、原始记录存储、成像能力、可修正性、技术可靠性、检测成本等方面对两种成像技术进行了优势分析。结果表明,DR技术在提高工作效率、提升检验品质、节约成本及环保等方面具有不可比拟的优势,具有更明显的准确性、可靠性和可持续发展性。

猪戊型肝炎病毒RT-nPCR检测方法的建立及应用

猪戊型肝炎病毒（以下简称为SHEV）一般是正链的RNA病毒，能够使猪感染猪戊型肝炎。现如今，此类病毒在我们国家十分普遍，如果没能将其进行控制，则会造成更大的风险。

关于RT无损检测方法研究

由于RT无损检测技术的发展越来越完善，当前已泛使用于各个领域，本文作者对RT检测中焊缝定位方法进行了全面阐述。

TOFD检测技术与RT检测技术对比

通过对含有多种缺陷的53块试件进行TOFD检测和RT检测,将两种检测结果进行比对,从而得出哪种检测方法更为有效。

核电厂不锈钢覆面带垫板焊缝中焊接缺陷的RT定位检测技术

论述了核电厂不锈钢覆面衬里的带垫板焊缝中焊接缺陷的RT定位检测方法,总结了该检测的检测重点,采取二次联合曝光方法,并运用儿何作图法进行缺陷的准确定位,以判断该缺陷的埋藏深度,为建造阶段缩短了判定周期,从而指导工程的正常进行。同时,对于焊件中的缺陷给出了一种立体拍片定位方法,可准确判定缺陷的位置;该技术的应用,可适用于各类钢结构中带垫板的焊接接头的缺陷定位,更利于压力容器、锅炉的封口焊缝的缺陷定位,减少不必要的返修,并缩短生产周期。