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香蕉ACC合成酶cDNA的PCR扩增及序列测定 被引量:14
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作者 金志强 彭世清 +2 位作者 邵寒霜 孔德骞 郑学勤 《热带作物学报》 CSCD 1998年第1期48-51,共4页
从香蕉果实中提取总RNA,经反转录成cDNA第一链,根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物,经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1.1Kb的产物,对该序列测定结果表明,该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保... 从香蕉果实中提取总RNA,经反转录成cDNA第一链,根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物,经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1.1Kb的产物,对该序列测定结果表明,该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保守区中的7个,并且包括该酶的活性中心。 展开更多
关键词 香蕉 ACC合成酶 pcr CONA 序列测定
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两种甲病毒基因组序列的一步RT-PCR检测 被引量:2
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作者 邓永强 于曼 +4 位作者 秦鄂德 范宝昌 杨保安 司炳银 祝庆余 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期34-36,共3页
目的 通过对不同扩增条件的优化 ,建立两种马脑炎病毒的快速RT -PCR检测方法。方法 根据东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒基因组相应序列设计引物 ,然后采用两步法及两种一步法分别对其基因组序列进行RT -PCR扩增 ,并用琼脂糖凝胶电泳... 目的 通过对不同扩增条件的优化 ,建立两种马脑炎病毒的快速RT -PCR检测方法。方法 根据东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒基因组相应序列设计引物 ,然后采用两步法及两种一步法分别对其基因组序列进行RT -PCR扩增 ,并用琼脂糖凝胶电泳进行观察。结果与结论 三种方法均可从两种马脑炎病毒感染的乳鼠脑和细胞上清中扩增出单一的DNA片段 ,其大小与预期的相一致。与其他两种方法相比 ,本研究所建立的一步法更为简便快速、价格低廉 ,为进一步组装这些病毒的检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 甲病毒 基因组序列 检测 rtpcr 脑炎病毒
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广西黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)黄瓜分离物的RT-PCR检测及CP基因序列分析 被引量:2
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作者 廖富荣 林石明 +5 位作者 秦碧霞 陈青 沈建国 陈涵 黄蓬英 蔡健和 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第5期663-668,共6页
利用黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber Green Mottle Mosaic Virus,CGMMV)的特异性引物对来自广西一温室栽培的黄瓜病样进行RT-PCR检测,结果扩增得到了与预期大小相符的目的片段(650 bp)。序列分析表明,该目的片段包含有CGMMV完整的CP基因... 利用黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber Green Mottle Mosaic Virus,CGMMV)的特异性引物对来自广西一温室栽培的黄瓜病样进行RT-PCR检测,结果扩增得到了与预期大小相符的目的片段(650 bp)。序列分析表明,该目的片段包含有CGMMV完整的CP基因序列、部分运动蛋白基因(MP)及3'端非编码区(3'-UTR)序列,其中CP基因全长486 bp,与已报道的CP基因序列同源性为91.2%~99.4%。经系统发育分折,明确该GX-CS分离物与日本、法国、印度等分离物属于CGMMV同一类群,并推测该分离物与广西的葫芦(GX-BG)分离物具有相同的起源关系。 展开更多
关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 rtpcr 序列分析
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庚型肝炎病毒PCR产物直接序列测定方法的建立及应用 被引量:2
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作者 凌斌华 庄辉 +3 位作者 汪兴太 李奎 崔怡辉 朱永红 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期137-138,共2页
以PCR产物为测序模板,γ32PATP标记的PCR扩增引物为测序引物,用TaqDNA聚合酶为测序酶,建立了庚型肝炎病毒(HGV)cDNA序列分析方法。应用本法测定1份PCR阳性产物的HGVcDNA序列,图谱呈清晰... 以PCR产物为测序模板,γ32PATP标记的PCR扩增引物为测序引物,用TaqDNA聚合酶为测序酶,建立了庚型肝炎病毒(HGV)cDNA序列分析方法。应用本法测定1份PCR阳性产物的HGVcDNA序列,图谱呈清晰的序列梯,其序列与GBVC(U36380)和HGV(U44402)的相应片段序列比较,同源性分别为8565%(191/223)和852%(190/223)。与用荧光法测定的另一株HGV序列有高度一致性。对同一样品两端测序,重叠部分序列完全一致。表明PCR产物直接测序法可用于HGV核酸序列分析。 展开更多
关键词 庚型肝炎病毒 pcr 序列测定 直接测序法
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中国对虾杆状病毒PCR扩增产物的DNA序列测定及分析 被引量:3
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作者 汪岷 马洪明 +3 位作者 戴继勋 包振民 苏冬梅 邵济钧 《海洋水产研究》 CSCD 1998年第2期5-9,共5页
采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒(WSBV)的一对特异引物;对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增,获得了预期的1447bp的扩增产物,将PCR产物用QIAEXII(玻璃奶)纯化;直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明,中国对虾的杆... 采用台湾报道的白点综合征相关杆状病毒(WSBV)的一对特异引物;对中国对虾的杆状病毒进行PCR扩增,获得了预期的1447bp的扩增产物,将PCR产物用QIAEXII(玻璃奶)纯化;直接进行序列测定。部分序列测定及分析结果表明,中国对虾的杆状病毒的部分DNA序列与台湾WSBV的相关序列的同源性为98.7%,经计算机分析该段基因序列有6个ORF(开放读框)。该PCR引物可以用于中国对虾杆状病毒及其相关病毒的检测与比较研究。 展开更多
关键词 中国对虾 杆状病毒 DNA序列 pcr扩增产物 测定
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PCR产物直接测序还是克隆测序?——密叶杉属rDNAITS序列的测定方法 被引量:11
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作者 李春 香杨群 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2002年第6期698-704,共7页
通过PCR产物直接测序和克隆测序对三种密叶杉属 (Athrotaxis)植物rDNA内转录间隔区 (ITS)及5 .8SrDNA序列进行了测定与分析。实验表明A .selaginoidesrDNA重复序列间的纯合程度很高 ,对PCR产物直接测序就可以测定其ITS区序列。而A .laxi... 通过PCR产物直接测序和克隆测序对三种密叶杉属 (Athrotaxis)植物rDNA内转录间隔区 (ITS)及5 .8SrDNA序列进行了测定与分析。实验表明A .selaginoidesrDNA重复序列间的纯合程度很高 ,对PCR产物直接测序就可以测定其ITS区序列。而A .laxifolia、A .cupressoides的ITS1重复序列间的纯合程度较低 ,各重复单位间序列存在插入 /缺失 ,只有对PCR产物进行克隆测序才能确定其序列。A .laxi folia、A .cupressoides的ITS2区尽管也存在多态性 ,但不同重复序列的浓度比较平均 ,对PCR产物直接测序就可确定重复序列间的变异情况。本实验表明尽管是同一属的三种植物 ,但其rDNA重复序列间的纯合程度不同 ,同一植物ITS的不同区域 ,其重复序列间的纯合程度也不同 ,针对不同的ITS片段可采用不同的方法以测定其序列。 展开更多
关键词 pcr产物 直接测序 克隆测序 密叶杉属 RDNA ITS序列 测定方法 协同进化
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新型的DNA序列测定策略:PCR产物直接测序 被引量:4
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作者 施红 《生物技术通讯》 CAS 2000年第2期154-155,共2页
关键词 DNA 序列测定 pcr产物直接测序
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保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序列测定 被引量:2
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作者 安洪明 耿志洲 +1 位作者 高爱武 陈宇萍 《中国公共卫生》 CSCD 北大核心 2000年第10期931-933,共3页
为明确保定肾综合征出血热 (HFRS)疫区的型别 ,采用RT PCR方法 ,检测急性期HFRS病人血清的汉坦病毒(HV)RNA ,并进行分型及部分核苷酸序列的测定 ,并与国内外HV的代表株进行比较。结果 31份急性期病人血清经RT PCR分型 ,2 4份为汉城型 (... 为明确保定肾综合征出血热 (HFRS)疫区的型别 ,采用RT PCR方法 ,检测急性期HFRS病人血清的汉坦病毒(HV)RNA ,并进行分型及部分核苷酸序列的测定 ,并与国内外HV的代表株进行比较。结果 31份急性期病人血清经RT PCR分型 ,2 4份为汉城型 (SEO型 ) ,2份为汉滩型 (HTN型 ) ,并测得SEO型C3株M基因 (位于 1985— 2 314位 ) ,HTN型LBY株M基因 (位于 1996— 2 314位 )核苷酸序列与国内外代表株的核苷酸和氨基酸序列相比较 :C3与 76 118、A9、LBY核苷酸同源性分别为 :6 8 79%、6 7 5 8%、6 8 0 3% ;氨基酸同源性分别为 :77 2 7%、77 2 7%、78 3%。C3与Seoul、R2 2相比 ,核苷酸同源性分别为 :95 15 %、93 94% ;氨基酸均为 97 2 7%。LBY与 76 118、A9、Seoul、R2 2核苷酸同源性分别为 :98 75 %、87 15 %、6 8 34 %、6 8 0 3% ;氨基酸同源性分别为 :10 0 %、96 2 3%、78 3%、78 3%。首次发现与韩国 76 118株同型(HTN型 )HV在保定的存在 。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 血清 pcr分型 核苷酸序列测定
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SARS病毒基因的PCR扩增及序列测定 被引量:1
9
作者 石缨 金梅枝 +5 位作者 朱美财 占志 高和 刘春灵 蔡庆 周平 《空军总医院学报》 2003年第3期135-137,F004,共4页
目的 利用 RT- PCR技术检测 SARS疑似或临床确诊病人咽拭子、血清及白细胞中的 SARS病毒 ,并分析了扩增产物内一个可能的突变位点。 方法 采用 Trizol试剂或病毒 RNA提取试剂盒 ,抽提 SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的 RN... 目的 利用 RT- PCR技术检测 SARS疑似或临床确诊病人咽拭子、血清及白细胞中的 SARS病毒 ,并分析了扩增产物内一个可能的突变位点。 方法 采用 Trizol试剂或病毒 RNA提取试剂盒 ,抽提 SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的 RNA ,进行 RT- PCR和 nest PCR反应 ,检测 SARS病毒 RNA ,并对扩增产物进行 DNA测序。 结果  14例SARS疑似患者中 2例咽拭子 RT- PCR结果阳性 ,约占 14 % ;5例临床确诊病人中 2例咽拭子 nest PCR结果阳性 ,约占 4 0 % ;6例临床确诊 SARS病人中 1例血清 nest PCR结果阳性 ,占 17% ,其他 5例疑似患者结果阴性 ;在 2 2份疑似患者外周血白细胞中未检测到 SARS病毒 ;扩增产物 DNA序列与美国和加拿大在 Gen Bank中报道的序列一致。 结论  RT- PCR方法是一种快速有效的 SARS病毒检测手段 ,为临床诊断及发病机制研究提供了依据 ;扩增片段内未发现突变。 展开更多
关键词 SARS病毒 pcr扩增 序列测定 基因扩增 发病机制
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一步法RT-PCR克隆水稻线粒体磷转运蛋白基因及其序列特征分析
10
作者 王峰 黄璐圆 +2 位作者 王宏斌 刘兵 王金发 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期303-309,共7页
以水稻广亲和品种Cpslo17幼穗为材料,用一步法RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)克隆了一个长度为1118bp的编码线粒体磷转运蛋白的OsMPT基因。序列分析表明其包含了基因完整的编码序列,编码由368个氨基酸组成的线粒体磷转运蛋白,它与玉米、... 以水稻广亲和品种Cpslo17幼穗为材料,用一步法RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)克隆了一个长度为1118bp的编码线粒体磷转运蛋白的OsMPT基因。序列分析表明其包含了基因完整的编码序列,编码由368个氨基酸组成的线粒体磷转运蛋白,它与玉米、大豆、Lotusjaponicus、Betulapendula、拟南芥的线粒体磷转运蛋白氨基酸序列相似率分别为93.5%,85.6%,83.8%,83.7%,81.1%。氨基酸疏水谱分析显示它有线粒体磷转运蛋白家族高度保守的6个跨膜结构域。水稻线粒体磷转运蛋白N端富含精氨酸(Arginine)、丙氨酸(Alanine)和丝氨酸(Serine)。iPSORT预测其蛋白N端具有定位于线粒体的信号肽序列,进一步分析表明此编码区段有6个外显子和5个内含子。RT-PCR结果表明,OsMPT基因在水稻两个亚种粳稻和籼稻的叶片中均有表达,在Cpslo17营养器官和生殖器官中都有高水平表达。水稻线粒体磷转运蛋白的克隆和表达分析将为研究其结构和生物学功能奠定基础。 展开更多
关键词 水稻 线粒体磷转运蛋白 序列分析 基因组结构 rtpcr
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RT-PCR克隆人血清白蛋白cDNA及其序列分析
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作者 凌华 丛明 +2 位作者 黄慧琴 吕家森 鲍时翔 《热带作物学报》 CSCD 2004年第4期68-71,共4页
为了构建人血清白蛋白cDNA橡胶树乳管特异性表达载体,提取人工流产胎儿肝脏组织总RNA,采用RT-PCR法得到其改良cDNA,T/A测序后,采用NCBI BLASTn软件分析测得的序列及由此推导的氨基酸序列,与NCBI数据库中公布的HSA cDNA及氨基酸序列比较... 为了构建人血清白蛋白cDNA橡胶树乳管特异性表达载体,提取人工流产胎儿肝脏组织总RNA,采用RT-PCR法得到其改良cDNA,T/A测序后,采用NCBI BLASTn软件分析测得的序列及由此推导的氨基酸序列,与NCBI数据库中公布的HSA cDNA及氨基酸序列比较其同源率。结果表明,两者分别达到99.6%和99.5%。这为后期橡胶树乳管特异表达载体的构建和以转基因橡胶树来表达人血清白蛋白的研究打下了坚实的前期技术工作基础。 展开更多
关键词 rtpcr 人血清白蛋白 DNA 乳管 胎儿肝脏 人工流产 NCBI 氨基酸序列 克隆人 特异表达
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对虾白斑症病毒(WSSV)部分克隆片段的序列测定及PCR扩增
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作者 谢数涛 何建国 +2 位作者 吕玲 吴言云 江静波 《湛江海洋大学学报》 CAS 2000年第3期22-26,共5页
对克隆的 WSSV基因组 Xba 1.8kb片段进行序列测定 ,根据所测定的核酸序列 ,通过计算机软件分析 ,设计出一对 PCR引物。所设计的 PCR引物能从纯化 WSSV及患白斑症的对虾组织中扩增出长为 92 1bp的目的 DNA片段 ,并且能检测出 0 .2~ 0 .4... 对克隆的 WSSV基因组 Xba 1.8kb片段进行序列测定 ,根据所测定的核酸序列 ,通过计算机软件分析 ,设计出一对 PCR引物。所设计的 PCR引物能从纯化 WSSV及患白斑症的对虾组织中扩增出长为 92 1bp的目的 DNA片段 ,并且能检测出 0 .2~ 0 .4μg病虾肌肉组织中的 WSSV。健康对虾、感染MBV的斑节对虾仔虾及 SINPV的扩增结果均为阴性。表明所建立的 WSSV PCR检测法灵敏而且特异。 展开更多
关键词 白斑症病毒 斑节对虾 序列测定 pcr扩增 基因克隆
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中国犬吉氏巴贝斯虫srRNA的序列测定及其在PCR诊断上的应用 被引量:2
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作者 陈启军 李德昌 +1 位作者 闫仲堂 白启 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期1-4,共4页
用特异引物BG-1和BG-2从南京株吉氏巴贝斯虫cDNA文库中克隆出ssrRNA序列,测定了该序列的核苷酸组成。通过基因库同源性查询表明,该序列与美洲株吉氏巴贝斯虫ssrRNA具有87%的同源性。本实验通过优化BG-... 用特异引物BG-1和BG-2从南京株吉氏巴贝斯虫cDNA文库中克隆出ssrRNA序列,测定了该序列的核苷酸组成。通过基因库同源性查询表明,该序列与美洲株吉氏巴贝斯虫ssrRNA具有87%的同源性。本实验通过优化BG-1和BG-2引物对ssrRNA基因的扩增反应条件,建立了对吉氏巴贝斯虫的特异、敏感的诊断方法。 展开更多
关键词 吉氏巴贝斯虫 RNA 序列测定 pcr 诊断 犬病
全文增补中
脾源鸭γ-干扰素基因的RT-PCR扩增、序列分析及表达 被引量:2
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作者 张晓宇 李凤华 +6 位作者 邵钢 宋晓林 陈艳 康丽娟 江庆国 庄国宏 江国托 《中国家禽》 北大核心 2005年第11期14-16,共3页
从丝裂原刺激的鸭脾淋巴细胞中提取基因组 RNA,采用 RT-PCR 扩增鸭干扰素γ基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,鸭干扰素γ基因序列全长477bp,开放阅读框架内401个核苷酸,共编码132个氨基酸。将鸭γ-IFN 基因定向克隆到原核表达载... 从丝裂原刺激的鸭脾淋巴细胞中提取基因组 RNA,采用 RT-PCR 扩增鸭干扰素γ基因并进行了序列分析。序列分析结果表明,鸭干扰素γ基因序列全长477bp,开放阅读框架内401个核苷酸,共编码132个氨基酸。将鸭γ-IFN 基因定向克隆到原核表达载体pBV220中,重组质粒经酶切鉴定后,转化到宿主菌 DH5a 中,温度诱导表达,SDS-PAGE 分析,表达产物与标记抗鸡干扰素抗体出现 Dot-ELISA 阳性反应。 展开更多
关键词 pcr扩增 序列分析 Γ-干扰素基因 rt 开放阅读框架 PBV220 原核表达载体 脾淋巴细胞 ELISA 干扰素γ 分析结果 基因序列 定向克隆 酶切鉴定 重组质粒 诱导表达 PAGE 阳性反应 鸡干扰素 表达产物 RNA 基因组 丝裂原 核苷酸
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蜜蜂残翼病毒RT-PCR检测及衣壳蛋白VP1基因的序列分析
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作者 隋佳辰 于寒松 +5 位作者 代佳宇 王向辉 郑言 杨倩 宋战昀 张建 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第12期157-159,共3页
为了研究蜜蜂残翼病毒(DWV)的遗传变异特点,试验从吉林某地蜂场疑似蜜蜂残翼病的病蜂中初步分离得到1株DWV毒株,采用RT-PCR技术扩增VP1基因并对其进行检验分析。结果表明:基因测序结果与Gen Bank中的DWV毒株衣壳蛋白VP1基因序列同源性为... 为了研究蜜蜂残翼病毒(DWV)的遗传变异特点,试验从吉林某地蜂场疑似蜜蜂残翼病的病蜂中初步分离得到1株DWV毒株,采用RT-PCR技术扩增VP1基因并对其进行检验分析。结果表明:基因测序结果与Gen Bank中的DWV毒株衣壳蛋白VP1基因序列同源性为99%左右;将此分离毒株DWV的VP1基因核苷酸序列与Gen Bank中的10个序列进行系统遗传进化树分析,证实其与AB070959.1、NC_005876.1的同源性最近,而与HM067437.1、KJ437447.1的同源性最低。 展开更多
关键词 蜜蜂残翼病毒(DWV) VP1基因 rtpcr 克隆 序列分析 进化树分析
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海带栽培品系和长海带ITS区的PCR扩增及序列分析 被引量:11
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作者 汪文俊 王广策 +2 位作者 张宝玉 蒋本禹 曾呈奎 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期95-101,共7页
对遗传背景清晰且具有显著表型差异的海带6个栽培品系(CUL002,CUL860,CUL1170,CUL017,CUL018,CUL901)和长海带(L.longissia)的ITS区进行了PCR扩增和序列测定,并分析了8个种17个品系(其中7种共10株从GenBank中获得)海带之间的系统进化关... 对遗传背景清晰且具有显著表型差异的海带6个栽培品系(CUL002,CUL860,CUL1170,CUL017,CUL018,CUL901)和长海带(L.longissia)的ITS区进行了PCR扩增和序列测定,并分析了8个种17个品系(其中7种共10株从GenBank中获得)海带之间的系统进化关系.结果表明:表型各异的6个海带栽培品系ITS区差别很小,其中ITS1+5.8 S rDNA序列完全相同,部分品系间ITS2序列有个别碱基差异;进化树显示与日本海带(L.japonica,AF319018)聚在一起,相似性大于98%,其中CUL901、CUL860和CUL1170的ITS序列完全相同.长海带(L. longissia)的ITS+5.8 S rDNA和日本海带(L.japonica,AF319018)的完全相同.以Undaria peterseniana为外类群,根据ITS+5.8 S rDNA序列构建进化树,6栽培品系及长海带与日本海带聚在一起;17株海带基本构成两个大的进化枝.研究结果揭示了我国海域栽培的长海带可能与日本海带(L.japonica,AF319018)为同一个种. 展开更多
关键词 pcr扩增 栽培品系 ITS区 长海带 序列分析 RDNA序列 GENBANK 系统进化关系 ITS序列 表型差异 遗传背景 序列测定 ITS2 基本构成 研究结果 进化树 日本 全相 相似性 外类群 碱基
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大黄鱼生长激素基因的分离及序列测定 被引量:10
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作者 江树勋 马鸿媚 +1 位作者 邓文汉 饶平凡 《生物工程进展》 CAS CSCD 2002年第2期88-90,共3页
本文从大黄鱼 (Pseucdosiaenacrocea)脑下垂体中提取得到总RNA ,根据近源鱼种生长激素(GH)基因保守序列设计了上游和下游引物 ,通过反转录和PCR扩增得到大黄鱼生长激素cDNA片断 ,并进行序列分析。所得到的序列与近源鱼种生长激素基因序... 本文从大黄鱼 (Pseucdosiaenacrocea)脑下垂体中提取得到总RNA ,根据近源鱼种生长激素(GH)基因保守序列设计了上游和下游引物 ,通过反转录和PCR扩增得到大黄鱼生长激素cDNA片断 ,并进行序列分析。所得到的序列与近源鱼种生长激素基因序列有较高的同源性 ,断定为大黄鱼生长激素基因序列 。 展开更多
关键词 大黄鱼 生长激素基因 分离 序列测定 反转录pcr
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Potyvirus属成员基因组全序列的简并引物PCR和RACE扩增方法 被引量:30
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作者 陈炯 陈剑平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期371-374,共4页
Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG A... Based on multi-alignment of complete polyprotein amino acid sequences of genus Potyvirus,five degenerated primers were designedThey were Sprimer(5′-GGX AAY AAY AGY GGX CAZ CC-3′),pNIa(+)(5′-TNY TGG AAM CAY TGG AT-3′),pCI2(+)(5′-GCX ACX AAX ATX ATX GAX AA-3′),pCI1(+)(5′-GTX GGX TCX GGX AAX TCX AC-3′)and pHC(+)(5′-TGY GAY AAY CAZ TTX GA-3′)(X=A,T,C or G:Y=T or C;Z=A or G;N=A or T;M=A,T or G)Using degenerated PCR and modified RACE methods,a protocol for determination of complete genome sequence of potyviruses was established and proved to be successful on five 展开更多
关键词 Potyvirus属成员 基因组分序列 pcr RACE 扩增方法 马铃薯Y病毒属 简并引物 序列测定 扩增方法
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绵羊生长激素(oGH)的分子克隆与序列测定 被引量:7
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作者 刘守仁 王新华 +4 位作者 钟发刚 沈敏 杨华 连宏军 薄新文 《中国兽药杂志》 2003年第6期8-10,共3页
 本文旨在新疆绵羊生长激素(oGH)基因的克隆。从阿勒泰×中国美利奴杂交羊脑垂体细胞中提取总RNA,分离得到具翻译活性的mRNA。用RTPCR方法扩增出编码oGH的基因,长度为671bp。将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,回收纯化。采用PCR克隆...  本文旨在新疆绵羊生长激素(oGH)基因的克隆。从阿勒泰×中国美利奴杂交羊脑垂体细胞中提取总RNA,分离得到具翻译活性的mRNA。用RTPCR方法扩增出编码oGH的基因,长度为671bp。将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,回收纯化。采用PCR克隆试剂盒将扩增产物连接至pTAdv质粒上,经PstI和XbaI双酶切鉴定正反插入后,筛选正向插入阳性克隆,并进行序列分析。结果表明克隆到的oGH基因序列与国外报道的序列有4个碱基差异,但所推导的氨基酸序列完全一致。oGH基因的开放阅读框架共含654个核苷酸,编码217个氨基酸,其中信号肽26个氨基酸,编码碱基为1~78(78bp);成熟肽191个氨基酸,编码碱基为79~651(573bp);终止密码子TAG(652~654bp)。其蛋白质的氨基酸序列与牛、人和鱼的序列同源性分别为99.08%、26.7%和5.9%。 展开更多
关键词 绵羊 生长激素 oGH 基因克隆 序列测定 rtpcr
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辣椒温和斑点病毒(PMMV)外壳蛋白基因的克隆和序列测定 被引量:7
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作者 黄粤 马荣群 +5 位作者 翟晓灵 岳文辉 潘忠强 李梅 崔健 李显日 《植物生理学通讯》 CSCD 北大核心 2005年第2期205-207,共3页
从本院分离的辣椒温和斑点病毒株系PMMV-QD中提取RNA。根据已有报道的外壳蛋白(CP)自行设计引物P1、P2,用RT-PCR扩增PMMV-QD的CP基因的cDNA,插入pMD18-T载体,转化感受态受体菌XL1-Blue,以蓝白菌落筛选转化株,用PCR检测白色菌落,确认获... 从本院分离的辣椒温和斑点病毒株系PMMV-QD中提取RNA。根据已有报道的外壳蛋白(CP)自行设计引物P1、P2,用RT-PCR扩增PMMV-QD的CP基因的cDNA,插入pMD18-T载体,转化感受态受体菌XL1-Blue,以蓝白菌落筛选转化株,用PCR检测白色菌落,确认获得了含cDNA的阳性重组子。序列测定和比较的结果表明该片段确含有PMMV的CP基因编码区,此种cDNA与国外报道的PMMV病毒株系核苷酸序列的同源性达到97.7%。 展开更多
关键词 序列测定 外壳蛋白基因 病毒 斑点 辣椒 克隆 cDNA pcr扩增 pcr检测 基因编码区 核苷酸序列 自行设计 CP基因 RNA pMD T载体 受体菌 感受态 重组子 同源性 株系 转化 菌落 引物
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