定量RT-PCR检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达

目的 :检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 ) m RNA的表达水平 ,并探讨其临床价值。方法 :采用实时荧光定量 RT- PCR法检测 5 1例经病理学确诊的结直肠癌患者和 30例健康对照者外周血 CK2 0 m RNA的表达水平。结果 :结直肠癌患者中 CK2 0 m RNA阳性率为 2 7.4 5 % ,而健康对照组阳性率为 6 .6 7% ,两者相比差异有统计学意义 (P<0 .0 2 5 )。随着临床分期的提高 ,患者外周血中 CK2 0 m RNA的表达率随之提高 ,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义 (P>0 .0 5 )。Dukes'C期与 D期患者中 >10拷贝 / ml者高于 A期与 B期患者。结论 :检测结直肠癌患者外周血 CK2 0 m RNA的表达水平可发现早期脱落的肿瘤细胞 。

RT-PCR方法检测外周血CK-20在膀胱癌微转移灶的临床意义

目的 研究膀胱癌微转移的情况及临床意义。方法 以靶向细胞角蛋白 2 0 (Cyokeratinck 2 0 )逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)检查 91例膀胱癌微转移情况。结果 91例膀胱癌中检出CK 2 0mRNA37例 ,阳性率 41% ,其中证实有转移的 2 0例中 17例阳性 ( 85 % ) ,发现无淋巴结转移的Ⅰ～Ⅱ期患者行TRRBP术后 15个月 2例复发者CK 2 0 mRNA均表达阳性 ;2 5例健康对照组均为阴性。结论CK 2 0RT PCR较常规组织学检查具有更高敏感性 ,提高了微转移的检出率 ,对判断患者预后 ,指导术后辅助治疗具有重要意义。

定量RT-PCR检测结肠癌患者门静脉血CK20 mRNA的表达

目的检测结肠癌患者门静脉血中细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达水平,并探讨其临床价值。方法采用实时荧光定量RT-PCR检测31例病理学确诊的结肠癌患者门静脉血和20例健康对照者外周血CK20mRNA的表达水平。结果结肠癌患者中CK20mRNA阳性率为25.81%,而对照组阳性率为5%,两者相比差异有统计学意义(P<0.025)。随着临床分期的具体化,患者门静脉血中CK20mRNA表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义(P>0.05)。DukesLC期与D期患者中>10拷贝/ml者高于A期与B期患者。结论术中检测结肠癌患者门静脉血CK20mRNA表达水平,对判断肝脏微转移有一定的提示意义。

莱斯康(Lexicon)RT-20光盘播放机

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一步法Real-time RT-PCR检测结直肠癌前哨淋巴结CK20 mRNA的表达

目的 探讨结直肠癌前哨淋巴结定位和检测CK20 mRNA的意义.方法 对49例结直肠癌患者术中注射美蓝定位前哨淋巴结,用一步法Real-time RT-PCR检测前哨淋巴结CK20 mRNA表达以确定转移病灶.结果 49例结直肠癌患者中成功确定了前哨淋巴结47例,共115枚,每例1～5枚,平均2.4枚/例,检出成功率为95.92％.47例患者前哨淋巴结中,常规病理学证实有11例为肿瘤细胞所浸润,阳性检出率为23.40％；一步法Real-time RT-PCR检测有20例CK20呈阳性表达,阳性检出率为42.55％.两种方法的阳性检出率有显著差异（P＜0.05）.结论 利用一步法Real-time RT-PcR技术检测CK20 mRNA表达可明显提高结直肠癌前哨淋巴结转移病灶的检出率.

大肠癌患者外周血癌细胞CK20检测及其意义

目的:探讨大肠癌患者外周血癌细胞角蛋白20(cytokeratin,CK20)检测与转移复发的关系。方法:以非同位 素RT-PCR方法,检测30例大肠癌患者术前和术后外周血中大肠癌细胞的标志物CK20,同时检测20例健康者外周血作对 照。结果:30例患者外周血中查出CK20阳性表达23例,阳性率76.67%,20例健康者外周血均无CK20表达。CK20阳性检 出与Dukes分期、淋巴结转移和肝转移存在显著性差异(P<0.05),术后3天内外周血CK20阳性检出较术前多出2例。随访 发现,外周血CK20扩增阳性者,术后发生肝转移的机会增加(33.3%)。结论:检测大肠癌患者外周血微转移癌细胞CK20可 提高大肠癌临床分期的准确性,帮助综合判断患者的预后,且可能有助于早期诊断大肠癌肝脏微小转移。

胃肠道癌外周血CK20 mRNA的表达及临床意义

背景与目的:检测上皮组织特异性标志物,如CK19、CK20、多形上皮粘蛋白的核心蛋白(MUC1)及CEA等,在外周血、淋巴结及骨髓中的表达,是诊断早期胃肠道癌微转移的重要手段之一。本研究通过检测手术前、后胃肠道癌患者外周血细胞角蛋白20信使核糖核酸(CK20mRNA)的表达,了解胃肠道癌血行播散转移情况及在围手术期综合治疗中的意义。方法:采用巢式逆转录-聚合酶链式反应(Nest-RT-PCR)检测62例胃肠道癌患者手术前后外周血CK20mRNA的表达状况。结果:62例样本中,34例(54.3%)术前CK20mRNA检测为阳性,31例(50.0%)术后CK20mRNA检测为阳性,对照组10例正常人及12例良性胃肠病患者CK20mRNA测定均为阴性。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CK20mRNA阳性率依次为37.5%、36.3%、66.7%、100.0%。Ⅰ、Ⅱ期患者与Ⅲ、Ⅳ期患者比较,两者间CK20mRNA的阳性率(分别为36.9%和83.3%)有显著性差异(P<0.05)。胃肠道癌的分化程度及癌栓的形成与外周血CK20mRNA的表达无关。有局部淋巴结转移患者与无淋巴结转移患者的阳性表达率有显著性差异(P<0.01)。手术前后外周血CK20mRNA阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论:外周血CK20mRNA检测可作为胃肠道癌微转移的判断指标之一,对临床正确分期及治疗起指导作用。

CK19/20检测对结直肠癌微转移的诊断意义

目的 探讨 CK19/20mRNART-PCR检测对结直肠癌微转移的诊断意义。方法 采用RT-PCR逆转录多聚酶链反应）方法检测42例结、直肠癌患者及对照组6例非恶性病变腹部手术患者骨髓血、门静脉血和外周血CK19mHNA及 CK20 mRNA的表达。结果 对照组6例患者无 CK19及 CK20阳性表达,CK19及CK20在42例结、直肠癌患者骨髓血、门静脉血及外周血中阳性表达分别为24/42、21/42、11/42及27/42、18/42、11/42,两间无显著差异（P>0.05）,骨髓和门静脉中表达比外周血高（P<0.01）,Dukes C 期患者表达高于Dukes A、B期（P<0.05）。结论 CK19、CK20的RT-PCR检测是较敏感和特异的结、直肠癌微小转移指标,阳性表达患者有较高发生远处转移的危险。

应用套式RT-PCR方法检测大肠癌患者外周血中的肿瘤细胞

目的 探讨应用套式RTPCR检测大肠癌患者外周血中的肿瘤细胞的可行性及其临床意义。方法 以CK20mRNA为靶基因，应用套式RTPCR方法检测10名健康人，17名非恶性消化系疾病患者，32名大肠癌患者手术前、后3天外周血中的肿瘤细胞。结果 CK20 mRNA在空白对照组中均呈阴性表达。大肠癌患者CK20表达情况为：2名Duke'sA期患者外周血中未检出CK20阳性细胞，15名Duke'sB期患者外周血中CK20mRNA阳性表达4例，10名Duke'sC 患者外周血CK20mRNA阳性表达6例，5名Duke'sD期患者外周血中CK20mRNA阳性表达4例。32名大肠癌患者中，术前CK20mRNA阳性总检出率为43.8%;A、B 期阳性率为23.5%；C、D期阳性率为66.7%。结论 以CK20为靶基因，应用套式RTPCR检测大肠癌患者外周血中的肿瘤细胞是一非损伤性且特异性、敏感性较高的检测方法。它将有助于肿瘤经血液微转移的早期诊断，并将有助于指导辅助化疗和监测其疗效。

乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血CK20的检测与其临床病理分期相关性研究

目的 :检测乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血中细胞角蛋白 2 0 (cytokeratin2 0 ,CK2 0 )并分析其临床病理联系。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)检测乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血CK2 0mRNA ,并以 6 0例健康者作为对照。结果 :6 0例健康对照组外周血CK2 0mRNA均为阴性。实验组 138例CK2 0mRNA表达阳性为 5 3/ 138,其中CK2 0mRNA表达阳性分别为乳腺癌 16 / 4 4 ,胃癌 2 2 / 5 7及大肠癌 15 / 37。CK2 0mRNA表达阳性在TNM及Dukes(大肠癌 )分期中分别为 :I期 (乳腺癌 1/ 6 ;胃癌 2 /11) ,II期 (乳腺癌 2 / 12 ;胃癌 4 / 19) ,III期 (乳腺癌 10 / 18;胃癌 12 / 2 1)及IV期 (乳腺癌 3/ 8;胃癌 4 / 6 ) ,(P <0 .0 5 ,I,IIvsIII,IV) ;大肠癌A期 (1/ 7) ,B期 (4 / 16 ) ,C期 (7/ 10 )及D期 (3/ 4 ) ,(P <0 .0 5 ,A、B及C、D期间 )。胃癌及大肠癌病理改变在低未分化及中高分化癌间经 χ2 检验有显著差异。结论 :RT -PCR方法检测乳腺癌、胃癌及大肠癌患者外周血中CK2

CK-19、CK-20、CEA mRNA检测在乳腺癌患者外周血微转移的意义

目的:探讨外周血细胞角蛋白(cytokeratin CK)-19、CK-20以及CEA mRNA检测在乳腺癌诊治中的意义。方法:应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测40例乳腺癌患者外周血CK-19、CK-20、CEAmRNA在术前、术后3d、术后14d(化疗前)、术后35d(化疗后)的表达,以健康志愿者及乳腺良性肿瘤各10例作为对照,统计分析手术及化疗后乳腺癌患者血循环肿瘤标志物的表达状况,同时根据CK-19的表达水平,分析影响乳腺癌外周血微转移的相关临床病理因素。结果:术前,乳腺癌组CK-19、CK-20、CEA mRNA阳性者分别为26例(65%)、20例(50%)、16例(40%),与对照组相比,3组P值均<0.01;手术后,3组阳性者分别为14例(35%)、10例(25%)、8例(20%),3组阳性率均较术前明显下降(P=0.013,P=0.037,P=0.023);化疗前3组阳性者分别为19例(47.5%)、15例(37.5%)、10例(25%);化疗后则为6例(15%)、2例(5%)、2例(5%),3组化疗后的阳性率亦有显著降低(P=0.003,P=0.001,P=0.025)。根据CK-19 mRNA表达水平,Logistic相关性分析,乳腺癌外周血微转移与淋巴结转移(P=0.0087)、TNM分期(P=0.0125)和病理类型(P=0.0451)有相关性。结论:CK-19、CK-20、CEA在乳腺癌患者外周血中有高表达,其表达状况高低与肿瘤负荷相关。乳腺癌外周血微转移相关性因素为淋巴结转移、TNM分期和肿瘤类型。

鸡传染性法氏囊病病毒核酸A片段RT-PCR扩增及序列测定

本文对鸡传染性法氏囊病毒ＪＳ－２０株核酸Ａ片段分３段进行巢式ＲＴ－ＰＣＲ扩增，用琼脂糖凝胶电泳从扩增产物中精制回收目的 ｃＤＮＡ片段，核苷酸序列测定平均每个反应测 ５５０ｂｐ，每个ｃＤＮＡ片段从两个不同方向进行序列测定，以相互验证。将多个测序反应的结果拼接，得到长为 ３１３０ｂｐ的核酸序列。

人膀胱癌细胞角蛋白20 mRNA表达的研究

目的 评估细胞角蛋白 2 0mRNA(CK2 0mRNA)是否可以作为膀胱癌临床诊断的一种有用标志物。方法 对 84例肉眼血尿患者的尿液进行尿脱落细胞学及CK2 0mRNA标记物RT/PCR检测。分析参数包括肿瘤数目、大小及WHO分级 ,术前或活检前尿脱落细胞学和CK2 0mRNA标志物。结果 病理活检证实 2 2例移行细胞癌中 ,CK2 0mRNA 18例为阳性 ,4例阴性 ;6 2例非膀胱癌患者中 ,CK2 0mRNA标志物 2例假阳性。与尿脱落细胞学比较 ,CK2 0mRNA标志物对膀胱移行细胞癌诊断的特异性和阳性预报值更高 ,分别为 96 .8%比 77.4 % (U =3.2 1,P <0 .0 1) ,90 %比 5 1.7% (U =2 .81,P <0 .0 1) ;但两者在敏感性和阴性预报值间无显著性差异 (U值分别为 :1.0 4和 1.2 1,P >0 .0 5 )。CK2 0mRNA表达与肿瘤分级间无明显相关性。结论 通过RT/PCR方法检测CK2 0mRNA是诊断膀胱移行细胞癌的一种良好生物标志物 ,其特异性明显优于尿脱落细胞学。

绵羊精子膜蛋白PH-20 mRNA在睾丸和附睾中表达的分析

提取绵羊睾丸总RNA,并以此为模板,采用RT-PCR技术扩增出精子表面特异性蛋白PH-20的cDNA。应用T/A克隆策略,将扩增的PH-20基因克隆入T载体,通过酶切和测序进行鉴定,结果表明,PH-20 mRNA在绵羊睾丸和附睾中均有表达。

巢式RT-PCR检测胃癌患者外周血循环癌细胞的研究

目的 分析胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA及CEAmRNA的异常表达及意义。方法 采用RT PCR方法检测 5 2例胃癌患者术前外周血中CK 2 0mRNA及CEAmRNA的表达。结果 胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为 42 .3 % (2 2 /5 2 )及 5 1.9% (2 7/5 2 ) ,CK 2 0mRNA和CEAmRNA两者中至少 1个基因为阳性的表达率为 63 .5 % (3 3 /5 2 )。胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA表达与胃癌的远处转移有关 ,CEAmRNA表达、CK 2 0mRNA和CEAmRNA都表达、CK 2 0mR NA和CEAmRNA两者中至少 1个表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和远处转移相关 (P <0 .0 5 )。结论 胃癌患者外周血CK 2 0和CEA的RT PCR检测有助于患者预后的判断 ;联合检测CK 2

结肠癌病人手术前后血中CK-20 mRNA检测的临床意义

目的探讨结肠癌病人手术前后外周血中CK-20 mRNA水平变化的情况,从而判断肿瘤微转移情况。方法采用逆转录多聚酶链式反应方法(RT-PCR方法),以CK-20 mRNA为靶基因,检测了38例结肠癌病人手术前后CK-20mRNA表达情况。结果结肠良性疾病组CK-20 mRNA表达均为阴性。结肠癌组(38例)术前CK-20 mRNA阳性率为23.7%(9/38),术后阳性率为37%(14/38),术后明显高于术前(P<0.05)。A组(术中先结扎回流静脉及切断相应系膜)术前术后阳性率为30%(6/20),B组(不结扎回流静脉及不切断相应系膜)术前阳性率为35%(7/20),术后阳性率为50%(19/20),B组术后阳性率明显高于术前(P<0.05)。结论结肠癌病人(B期、C期)术前已有部分病人血中存在游离癌细胞,手术中的牵拉刺激可能增加癌细胞扩散的可能性,术中先结扎回流静脉及切断相应系膜可起到阻止癌细胞血行播散的可能性。

大肠癌患者外周血CK20表达及p53基因突变的研究(英文)

目的建立高效、快速的外周血Cytokeratin 20(CK20)表达的检测方法,探讨大肠癌患者外周血中CK20的表达与微转移的关系,研究大肠癌与p53基因突变的关系。方法运用荧光监测技术结合RT-PCR,检测36例大肠癌患者术前和术后不同时间外周血中的CK20的表达。用SSCP技术对大肠癌患者进行p53基因的突变检测。结果36例患者术前的外周血中检出CK20表达的有27例,阳性率为75%,手术后24 h患者外周血中检出CK20表达的有30例,阳性率为83.3%,术后早期化疗结束后仅13例为阳性,阳性率为36%。36例患者的p53基因的SSCP突变检测中未检测到突变。结论运用荧光RT-PCR技术检测外周血中CK20的表达可以监测癌症微转移的发生,简便快速,检出率高。

大肠癌患者免疫状态与CK-20 mRNA表达的相关性研究

目的通过研究大肠癌患者免疫状态与CK-20 mRNA表达的相关性,为大肠癌的免疫治疗提供思路。方法用ELISA法检测46例大肠癌患者术前血清中白介素-2(IL-2),IL-6,IL-10,干扰素(INF)γ的水平;用RT-PCR方法检测46例大肠癌患者外周血的表达。结果大肠癌患者血清中IFN-γ,IL-2水平均低于正常对照组,IL-6,IL-10水平均高于正常对照组。与CK-20 mRNA阴性患者相比,CK-20 mRNA阳性表达的大肠癌患者外周血IFN-γ,IL-2,IL-6,IL-10水平均有显著性差异。结论大肠癌患者免疫状态与CK-20 mRNA的表达有相关性,对于及时监测大肠癌的微转移,为大肠癌患者相应治疗提供帮助。

运用荧光PCR进行大肠癌患者外周血中CK20表达的研究

目的探讨荧光PCR法检测大肠癌患者外周血中CK20的表达情况并分析其与微转移的关系。方法运用荧光RT-PCR技术对大肠癌患者外周血CK20的表达进行检测。结果40例大肠癌患者外周血中检出CK20表达的有26例,检出率为65%。结论运用荧光RT-PCR技术检测外周血中CK20的表达可以监测癌症微转移的发生,适于临床推广。

AP-2α对基质金属蛋白酶-20作用的研究

目的:通过研究AP-2α转录因子对基质金属蛋白酶-20(matrix metalloproteinase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,进一步明确AP-2α的功能,为研究AP-2α在釉质形成中的作用奠定基础。方法:利用RT-PCR法、双荧光素酶报告基因检测系统、染色体免疫共沉淀技术等来分析AP-2α与MMP-20启动子区域的转录调控能力。结果:小鼠成釉细胞转染AP-2αsiRNA后,成釉细胞中MMP-20 mRNA的表达水平显著上调。染色体免疫共沉淀结果显示,AP-2α可能通过与MMP-20启动子特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达。双荧光素酶报告基因检测显示预测结合位点突变后,AP-2α对MMP-20启动子的表达水平无显著影响。结论:AP-2α基因沉默可显著上调MMP-20的mRNA表达水平;而AP-2α过表达可显著抑制MMP-20活性。提示AP-2α转录因子与成釉细胞内MMP-20启动子的特征性序列相互作用,从而调控MMP-20的表达水平。