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Ameliorative Effect of Ginsenoside RT-5 on CDDP-Induced Nephrotoxicity 被引量:1
1
作者 JIANG Yongtao QIU Xiaolei +5 位作者 MA Jinbo Lü Guangyao WANG Zongliang ZHANG Jingwen FU Fenghua WANG Hongbo 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS CSCD 2015年第4期343-349,共7页
The aim of this study is to explore whether RT-5, one novel active ginsenosides from Ginseng, has protective effects against cisplatin(CDDP)-induced nephrotoxicity in vivo. One model of acute renal failure induced b... The aim of this study is to explore whether RT-5, one novel active ginsenosides from Ginseng, has protective effects against cisplatin(CDDP)-induced nephrotoxicity in vivo. One model of acute renal failure induced by CDDP in rats and one model of xenograft tumors of human cervical cancer in nude mice are established. Four groups are assigned: control, CDDP, RT-5, CDDP plus RT-5, in which the RT-5 is administered via oral gavage 24 h before CDDP intraperitoneal injection. The significant increase in blood urea nitrogen and creatinine are induced by CDDP treatment at 6 mg/kg, which are attenuated by pre-treated with RT-5 at 10 mg/kg. RT-5 could ameliorate CDDP-induced morphological damages in kidney by PAS staining, and reduce tubular apoptosis evaluated by TUNEL staining. Pretreatment with RT-5 notably inhibits CDDP-induced oxidative stress in kidney tissues. Interestingly, RT-5 does not interfere with the in vivo anti-cancer effects of CDDP against the growth of xenograft tumors in nude mice. These data suggest that co-treatment RT-5 with CDDP might attenuate the following nephrotoxicity without inhibiting its anti-tumor efficiency, which could provide one novel strategy for cancer treatment in clinics. 展开更多
关键词 nephrotoxicity ginsenosides rt-5 cisplatin(CDDP)
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副流感病毒5型荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
2
作者 吴华伟 秦义娴 +6 位作者 陈晓春 高金源 邓永 刘丹 苏佳 薛青红 陈延飞 《中国兽药杂志》 2021年第9期1-7,共7页
为建立检测副流感病毒5型(PIV5)的荧光定量RT-PCR方法,针对PIV5 L基因设计筛选出一对特异性引物和探针,对退火温度、引物浓度、探针浓度进行了优化,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示:最适退火温度为54.7℃,最适引物浓度为... 为建立检测副流感病毒5型(PIV5)的荧光定量RT-PCR方法,针对PIV5 L基因设计筛选出一对特异性引物和探针,对退火温度、引物浓度、探针浓度进行了优化,并进行了敏感性、特异性和重复性试验。结果显示:最适退火温度为54.7℃,最适引物浓度为0.5μmol/L,最适探针浓度为0.1μmol/L。检测灵敏度为10 copies、0.8 TCID50,特异性结果显示与BPIV3等22种常见病毒及原辅材料均无交叉,重复性试验显示不同模板浓度重复检测变异系数均小于1.5%,重复性良好。 展开更多
关键词 副流感病毒5 荧光定量 rt-PCR
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木质素合成酶基因F5H的RT-PCR引物筛选
3
作者 付月 薛永常 姚奇 《辽宁林业科技》 北大核心 2007年第4期9-11,59,共4页
据EMBL核酸序列库中发表的白杨杂种F5H的cDNA序列,利用Primer 5.0软件设计3组扩增引物。通过PCR及RT-PCR扩增反应,筛选出一组比较合适的引物,确定该引物对的最适反应体系和程序参数。利用该引物对,从正在分化的2年生欧美杨107茎的次生... 据EMBL核酸序列库中发表的白杨杂种F5H的cDNA序列,利用Primer 5.0软件设计3组扩增引物。通过PCR及RT-PCR扩增反应,筛选出一组比较合适的引物,确定该引物对的最适反应体系和程序参数。利用该引物对,从正在分化的2年生欧美杨107茎的次生木质部提取的mRNA中RT-PCR扩增出一个867bp的木质素合成特异表达的f5h基因片段。将其克隆到pGM-T载体上,构建了f5h在大肠杆菌中的表达载体,并对引物筛选进行讨论。 展开更多
关键词 F5H RT—PCR 引物筛选 木质素
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荧光定量RT-PCR检测去下颌下腺大鼠睾丸annexin 5 mRNA和Bax mRNA的表达
4
作者 王晨阳 马百坤 +5 位作者 侯林 徐会茹 黄祝 蒋超 黄宇烽 姚兵 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期106-110,共5页
目的观察下颌下腺切除对大鼠睾丸膜联蛋白5(annexin 5)和Bax mRNA表达的影响。方法切除大鼠下颌下腺,分别于术后14d、28d和42d处死大鼠,提取睾丸总RNA,反转录,设计特异性引物和Taqman探针,荧光定量RT-PCR检测annexin 5和Bax mRNA的表达... 目的观察下颌下腺切除对大鼠睾丸膜联蛋白5(annexin 5)和Bax mRNA表达的影响。方法切除大鼠下颌下腺,分别于术后14d、28d和42d处死大鼠,提取睾丸总RNA,反转录,设计特异性引物和Taqman探针,荧光定量RT-PCR检测annexin 5和Bax mRNA的表达。结果荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,切除下颌下腺14d和28d后,实验组大鼠睾丸annexin 5 mRNA分别升高了38.5%和55.3%,但无显著性差异;实验组大鼠睾丸Bax mRNA分别升高了70.6%和80.5%,其升高具有显著性差异(P<0.05和P<0.01);切除下颌下腺42d时,实验组大鼠睾丸annexin 5和Bax mRNA分别升高5.6%和2.3%,几乎恢复到与对照组相同的水平。结论下颌下腺切除后14d和28d可造成大鼠睾丸annexin 5和Bax mRNA的表达升高;切除后42d,annexin 5和Bax mRNA又恢复到正常水平。 展开更多
关键词 下颌下腺 睾丸 ANNEXIN 5 BAX 荧光定量rt-PCR 大鼠
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葡萄microRNA156b和microRNA172c及其靶基因在冬芽二次成花过程中的表达特性研究 被引量:4
5
作者 王晨 张演义 +3 位作者 房经贵 宋长年 刘洪 王西成 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期59-64,共6页
利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用R... 利用半定量RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测‘藤稔’葡萄microRNA156b(Vv-miR156b)和microRNA172c(Vv-miR172c)及其靶基因(Vv-SPL9和Vv-AP2)在摘心处理(5月14日、5月20日、5月28日)后不同发育时期冬芽中的表达情况,并利用RLM-5'-RACE验证了miRNAs作用其靶基因的方式。结果表明:仅5月28日摘心处理的冬芽能够进行花芽分化并形成花序,而其他处理及对照未能花芽分化。2种RT-PCR检测结果基本一致,5月28日摘心处理的2条miRNAs表达水平明显下降,且花序中有最低表达。相应的靶基因在冬芽二次成花过程中的表达水平呈现出与其miRNAs相反的变化趋势。RLM-5'-RACE结果显示,2条miRNAs介导靶基因裂解,裂解位点均在miRNAs 5'端的第10和11位碱基之间。表明microRNA156b和microRNA172c通过介导相应靶基因的裂解调控其靶基因的表达,从而影响葡萄冬芽的二次成花。 展开更多
关键词 葡萄 microRNAs 靶基因 冬芽 实时荧光定量rt-PCR RLM-5'-RACE
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木质素合成酶基因F5H的克隆及其鉴定 被引量:7
6
作者 付月 李学龙 薛永常 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第8期1553-1555,共3页
通过RT-PCR从正在分化的2年生欧美杨107号茎的次生木质部提取mRNA,扩增出一基因片段,与pGM-T载体连接,重组质粒经EcoRI酶切、特异性引物扩增、测序鉴定。结果表明,该基因片段长度为867bp,与EMBL核酸序列库中VanDoorsselaere等发表的白... 通过RT-PCR从正在分化的2年生欧美杨107号茎的次生木质部提取mRNA,扩增出一基因片段,与pGM-T载体连接,重组质粒经EcoRI酶切、特异性引物扩增、测序鉴定。结果表明,该基因片段长度为867bp,与EMBL核酸序列库中VanDoorsselaere等发表的白杨杂种F5H的cDNA序列(PAJ10324)相比,同源性高达99.19%,可以断定所扩增的DNA片段即为F5H基因片段。 展开更多
关键词 F5H rt-PCR 木质素 载体构建
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愤怒、郁怒反应模型大鼠海马5-HTR2C的基因表达 被引量:12
7
作者 王杰琼 张惠云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期325-328,共4页
目的怒是影响人类健康的重要情志因素,分为愤怒和郁怒两种表达方式,两者诱发病证的机制尚未完全明确。该文主要探索愤怒、郁怒情志反应的微观机制。方法采用居住入侵和社会隔离的方法制备愤怒、郁怒反应大鼠模型,并分别予以调肝方药经... 目的怒是影响人类健康的重要情志因素,分为愤怒和郁怒两种表达方式,两者诱发病证的机制尚未完全明确。该文主要探索愤怒、郁怒情志反应的微观机制。方法采用居住入侵和社会隔离的方法制备愤怒、郁怒反应大鼠模型,并分别予以调肝方药经前平颗粒、经前舒颗粒干预,以正常大鼠作为对照,分别取愤怒、郁怒模型组以及经前平、经前舒给药组大鼠的海马用以基因芯片检测,初步筛选出与愤怒、郁怒密切相关的基因5-HTR2C、GABABR2和5-HTR3B,运用RT-PCR和Western blot技术仅对海马中基因5-HTR2C进一步进行检测。结果与正常组相比,5-HTR2C mRNA和蛋白表达在愤怒、郁怒反应大鼠海马中均增高(P<0.01),而且愤怒组的改变程度明显大于郁怒组,上述改变在模型用药组均得到不同程度的改善,基本可恢复到正常水平。结论愤怒、郁怒情志刺激可导致海马基因5-HTR2C的表达水平改变,调肝方药在一定程度上可缓解上述情况,说明5-HTR2C与怒密切相关,且与愤怒关系更加密切,以上结果为下一步的研究提供方向和线索。 展开更多
关键词 愤怒 郁怒 大鼠 rt-PCR WESTERN BLOT 5-HTR2C
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类固醇激素对鼻息肉嗜酸性粒细胞及IL-5表达的影响 被引量:4
8
作者 徐珏 杜慧敏 +5 位作者 兰龙江 马兵良 罗旭东 王建秋 温晓红 唐成武 《中国现代医生》 2011年第17期6-8,共3页
目的研究类固醇激素对鼻息肉嗜酸性粒细胞及IL-5的作用。方法收集20名患者新鲜的鼻息肉组织切成碎片,分成4等份,置于含有不同浓度地塞米松(DXM)的培养基中,对照组不加DXM,24h后检测悬浮液的细胞活力,并对嗜酸性粒细胞计数。检测培养液... 目的研究类固醇激素对鼻息肉嗜酸性粒细胞及IL-5的作用。方法收集20名患者新鲜的鼻息肉组织切成碎片,分成4等份,置于含有不同浓度地塞米松(DXM)的培养基中,对照组不加DXM,24h后检测悬浮液的细胞活力,并对嗜酸性粒细胞计数。检测培养液上清和组织匀浆中IL-5的含量。结果组织培养液上清和鼻息肉组织匀浆中IL-5含量各组与对照组之间有显著性差异(P<0.05),且随DXM浓度升高而降低。培养液上清中嗜酸性粒细胞数量各组与对照组之间有显著性差异(P均<0.05),且随DXM浓度升高而降低。结论皮质类固醇可抑制鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞活化及IL-5的表达水平。 展开更多
关键词 鼻息肉 糖皮质激素 白介素-5 嗜酸性粒细胞 rt-PCR
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DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定 被引量:1
9
作者 陈居杲 王玉刚 +4 位作者 赵昆朋 谷欣 黎燕 马远方 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期791-793,共3页
目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达... 目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力。结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coliBL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制。结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础。 展开更多
关键词 DIL5 rt-PCR 原核表达
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促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响 被引量:15
10
作者 戈一峰 王大勇 +7 位作者 蒋超 张艳梅 韩雪峰 卢坤刚 崔英霞 黄宇烽 黄祝 姚兵 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1138-1142,共5页
目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH... 目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist,GnRHa)(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)和GnRH拮抗剂(GnRH-antagonists,GnRHant)(10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的改变。结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01)。同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45%(p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义。结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSDmRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究。 展开更多
关键词 GNRH类似物 荧光定量PCR 大鼠睾丸间质细胞 膜联蛋白5 3β-羟类固醇脱氢酶
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miR-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达及意义 被引量:3
11
作者 陈琳 姚丽 +5 位作者 张佳瑞 任拼 王姝妹 兰淼 张伟 李艳红 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第8期1936-1939,共4页
目的:检测miR-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达,并分析miR-542-5p的表达与浆液性卵巢癌临床病理特征之间的关系,探讨其意义。方法:采用实时荧光定量PCR技术分析100例浆液性卵巢癌组织及50例正常输卵管伞端组织中miR-542-5p的表达。结果:... 目的:检测miR-542-5p在浆液性卵巢癌中的表达,并分析miR-542-5p的表达与浆液性卵巢癌临床病理特征之间的关系,探讨其意义。方法:采用实时荧光定量PCR技术分析100例浆液性卵巢癌组织及50例正常输卵管伞端组织中miR-542-5p的表达。结果:浆液性卵巢癌组织中miR-542-5p的表达显著低于正常输卵管伞端组织(P<0.05)。miR-542-5p的表达与浆液性卵巢癌各临床病理特征之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-542-5p可能作为抑癌基因参与了浆液性卵巢癌的发生,对于卵巢癌的早期诊断及治疗具有潜在意义。 展开更多
关键词 浆液性卵巢癌 MIRNA miR-542—5p 实时荧光定量PCR
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石榴果肉PgF3′5′H基因克隆及不同温度处理下的表达分析 被引量:4
12
作者 关晓弯 陈磊 +1 位作者 涂佳丽 张水明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期435-443,共9页
为探讨不同温度处理对采后石榴果肉花青苷含量的影响及花青苷合成相关基因(F3′5′H)在石榴果肉花青苷生物合成途径中的作用,该研究以"玉石籽"石榴为试材,于不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理下测定石榴果肉花青苷含量,同时利用... 为探讨不同温度处理对采后石榴果肉花青苷含量的影响及花青苷合成相关基因(F3′5′H)在石榴果肉花青苷生物合成途径中的作用,该研究以"玉石籽"石榴为试材,于不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理下测定石榴果肉花青苷含量,同时利用RACE技术克隆了石榴果肉花青苷合成相关基因,命名为PgF3′5′H,GenBank登录号为KU058892;并利用RT-PCR技术分析PgF3′5′H基因在不同贮期温度下石榴果肉中的表达特性。结果表明:(1)不同温度处理下,石榴果肉花青苷含量随着贮藏时间(0~56d)的增长呈上升趋势;在整个贮藏过程中,15℃条件下,花青苷含量最高,10℃次之,5℃和0℃则处于较低水平;15℃时花青苷含量在14d后表现不稳定。(2)PgF3′5′H基因全长cDNA为1 199bp,开放阅读框918bp,编码305个氨基酸,在N端36~39处含有细胞色素P450家族基因的特征保守氨基酸序列(CYP基序"PPGP");生物信息学分析表明,该基因编码的氨基酸序列与巨桉的EgF3′5′H2、麻风树的JcF3′5′H2和荷花的NnF3′5′H2氨基酸序列一致性分别高达86%、82%和81%。(3)在0℃、5℃、10℃处理条件下,石榴果肉PgF3′5′H基因表达量随着贮藏时间(0~56d)的延长均呈上升趋势,15℃处理下,石榴果肉PgF3′5′H基因表达量不稳定;石榴果肉PgF3′5′H基因表达与花青苷含量呈显著正相关关系。研究结果为深入探讨采后石榴果肉花青苷的含量变化奠定了基础。 展开更多
关键词 石榴果肉 花青苷 温度 PgF3′5′H RACE rt-PCR
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从基因水平对IL-5与IL-10在日本血吸虫感染小鼠中作用的探讨 被引量:4
13
作者 田小军 薛燕萍 +1 位作者 黄敏君 诸欣平 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2001年第4期204-211,共8页
本研究对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL 5和IL 10 2种细胞因子从mRNA转录水平进行研究 ,以探索这 2种细胞因子mRNA转录水平的动态变化与肉芽肿形成与调节的可能性。日本血吸虫尾蚴感染雄性BALB C小鼠后 ,分别... 本研究对日本血吸虫感染小鼠脾细胞体外在SEA与ConA诱导下产生的IL 5和IL 10 2种细胞因子从mRNA转录水平进行研究 ,以探索这 2种细胞因子mRNA转录水平的动态变化与肉芽肿形成与调节的可能性。日本血吸虫尾蚴感染雄性BALB C小鼠后 ,分别于感染后 3周、 5周、 8周、 10周和 12周取小鼠脾脏 ,制备脾细胞单细胞悬液并于含ConA或SEA的培养基中培养后提取脾细胞总RNA。RT PCR及凝胶分析法被用来分析总RNA样品中IL 5及IL 10mRNA转录水平。研究结果显示 ,未感染和感染 3周小鼠脾细胞均无IL 5和IL 10的表达 ,感染后第 5周的小鼠脾细胞出现IL 5特异性条带 ,感染后第 8周IL 5表达明显增强 ,感染后第 10周IL 5mRNA转录水平下降 ,感染后第 12周未能检测到IL 5表达 ,表明IL 5表达的动态变化与肉芽肿的形成、发展及调节相平行。IL 10mRNA转录也于感染后第 5周出现 ,但感染后第 8周、第 10周、第 12周与第 5周相比 ,IL 10的表达水平并无明显改变 ,显示IL 10mRNA转录水平并未随着肉芽肿的调节而变化。本研究结果提示IL 5可能在肉芽肿形成和调节过程中可能起重要作用 ;而IL 10可能并未直接参与肉芽肿的调节 ,但其转录可能与防止宿主过度肉芽肿炎症反应有关。 展开更多
关键词 IL-5 感染后 IL-10 肉芽肿 小鼠 脾细胞 MRNA转录 基因水平 动态变化 总RNA
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牛病毒性腹泻病毒通用型RT-PCR检测方法的建立 被引量:7
14
作者 郭春娟 吴星星 +5 位作者 王璐 季新成 冉多良 买买提.黑牙斯丁 王克栋 熊浩 《新疆农业大学学报》 CAS 2012年第3期217-221,共5页
为建立一种快速、特异、简便的检测牛病毒粘膜腹泻病病毒Ⅰ、Ⅱ型抗原的通用RT-PCR方法,根据GenBank上已发表的牛病毒性粘膜腹泻病毒(BVDV)Ⅰ、Ⅱ型5’端非编码区保守序列设计合成了两条引物,其中上游引物为兼并引物。应用一步法RT-PCR... 为建立一种快速、特异、简便的检测牛病毒粘膜腹泻病病毒Ⅰ、Ⅱ型抗原的通用RT-PCR方法,根据GenBank上已发表的牛病毒性粘膜腹泻病毒(BVDV)Ⅰ、Ⅱ型5’端非编码区保守序列设计合成了两条引物,其中上游引物为兼并引物。应用一步法RT-PCR技术分别对Ⅰ(Oregon C24V)、Ⅱ型(279)标准株进行扩增,将PCR产物胶回收后连与pMD18-T载体,经PCR、酶切鉴定条带均正确(288bp),测序结果与预期一致。同时设牛疱疹病毒Ⅰ型、牛传染性鼻气管炎、猪瘟病毒、蓝舌病病毒、口蹄疫病毒、MDBK细胞作对照,结果均为阴性;并对新疆各地州的样品进行检测。优化反应条件后,检测其灵敏度为10-1 TCID50/mL。经对400份临床样品检测,阳性检出率为10.75%,明显高于ELISA检测。试验表明,该方法具有特异、灵敏、高效、快速、重复性好等特点,可用于牛病毒粘膜腹泻病的临床检测及流行病学检测。 展开更多
关键词 牛黏膜腹泻病毒 5’-UTR 一步法rt-PCR 检测
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葡萄卷叶伴随病毒4和5简并引物和多重PCR检测 被引量:1
15
作者 范旭东 董雅凤 +2 位作者 张尊平 任芳 裴光前 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期95-97,114,共4页
研究建立了葡萄卷叶伴随病毒4和5(Grapevine leafroll associated virus 4and 5,GLRaV-4and 5)的简并引物及多重PCR检测方法。比较了单一PCR、多重PCR和简并引物检测方法的灵敏度,并对简并引物的特异性进行了分析。结果表明,采用简并引... 研究建立了葡萄卷叶伴随病毒4和5(Grapevine leafroll associated virus 4and 5,GLRaV-4and 5)的简并引物及多重PCR检测方法。比较了单一PCR、多重PCR和简并引物检测方法的灵敏度,并对简并引物的特异性进行了分析。结果表明,采用简并引物和多重PCR对这两种病毒进行检测,其灵敏度与单一PCR相同,且简并引物仅对葡萄卷叶伴随病毒4和5具有特异性。本研究建立的方法能够同时、快速、灵敏地检测上述2种葡萄卷叶病毒,提高了检测效率,降低了检测费用。 展开更多
关键词 葡萄卷叶伴随病毒4和5 多重rt-PCR 检测 简并引物
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猴副流感病毒5型实时荧光定量PCR方法的建立与初步应用 被引量:2
16
作者 冯育芳 李晓波 +5 位作者 邢进 付瑞 王吉 卫礼 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第10期40-43,共4页
目的建立猴副流感病毒5型(SV5)实时荧光定量PCR方法,并初步应用于猴样本检测。方法根据SV5病毒NP基因保守片段设计特异引物和TaqMan探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立SV5实时荧光定量PCR方法;对该方法的线性、敏感性、... 目的建立猴副流感病毒5型(SV5)实时荧光定量PCR方法,并初步应用于猴样本检测。方法根据SV5病毒NP基因保守片段设计特异引物和TaqMan探针,使用分子生物学方法制备质粒标准品,建立SV5实时荧光定量PCR方法;对该方法的线性、敏感性、特异性及稳定性进行测定;并使用该方法对24个猴样品进行检测。结果成功建立SV5实时荧光定量PCR方法;该方法线性范围为(6.8×10^9~6.8×10^5)copy/μL,灵敏度为6.8copy/μL,批内变异系数(CV)为0.63%~8.71%,批间CV为1.52%-12.38%,而且方法特异性好;在24个猴肺样品中未检测出阳性。结论该方法的建立为实验动物和动物源性生物制品中SV5的定量检测奠定了基础。 展开更多
关键词 猴副流感病毒5 实时荧光定量PCR 定量检测
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福尔马林致痛大鼠背根节内5-HT受体亚型mRNA的表达变化 被引量:4
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作者 刘翔宇 武胜昔 +4 位作者 王亚云 王文 周亮 黄静 李云庆 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期28-31,共4页
目的:探讨外周5-HT受体亚型在外周伤害性感受中的作用.方法:用反转录PCR技术观察大鼠单侧足底皮下注射福尔马林致痛后背根节内5-HT1~7受体亚型mRNAs的表达变化.结果:在大鼠足底皮下注射福尔马林后1 h,注射侧腰段背根节内5-HT1A、5-H... 目的:探讨外周5-HT受体亚型在外周伤害性感受中的作用.方法:用反转录PCR技术观察大鼠单侧足底皮下注射福尔马林致痛后背根节内5-HT1~7受体亚型mRNAs的表达变化.结果:在大鼠足底皮下注射福尔马林后1 h,注射侧腰段背根节内5-HT1A、5-HT1B、5-HT2A、5-HT3、5-HT4和5-HT7受体亚型mRNAs的表达水平显著升高,而5-HT1D、5-HT1F、5-HT2C、5-HT5A和5-HT6受体亚型mRNAs的表达在福尔马林致痛后无明显变化.在正常和福尔马林致痛大鼠的背根节内均未检测到5-HT1E、5-HT2B和5-HT5B受体亚型mRNAs的表达.结论:5-HT1A、5-HT1B、5-HT2A、5-HT3、5-HT4和5-HT7受体亚型可能参与了福尔马林诱导的炎性痛,且它们在外周伤害性信息的传递方面可能发挥不同的作用. 展开更多
关键词 5-HT受体 背根神经节 反转录PCR 大鼠
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PDCD5基因在初诊Graves'病患者PBMCs中表达情况的初步研究 被引量:5
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作者 金秀平 李明 +5 位作者 赵杰 马绍杰 贾伟 陈冬 吴乃君 张秀军 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期241-243,共3页
目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性... 目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P<0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P<0.05)。结论PDCD5 mRNA在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关。 展开更多
关键词 PDCD5 Graves'病 凋亡 外周血单个核细胞 反转录-聚合酶链式反应
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慢传输型便秘大鼠胃肠黏膜5-羟色胺3受体的表达 被引量:6
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作者 索静宇 徐华 +2 位作者 毕淑英 张旭 郑倩 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2013年第27期2815-2819,共5页
目的:研究5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-H T)3受体在慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)大鼠胃肠黏膜的表达,探讨其在慢传输型便秘中的发病机制.方法:将24只健康Wistar大鼠随机分为实验组及对照组,实验组予以复方苯乙哌啶... 目的:研究5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-H T)3受体在慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)大鼠胃肠黏膜的表达,探讨其在慢传输型便秘中的发病机制.方法:将24只健康Wistar大鼠随机分为实验组及对照组,实验组予以复方苯乙哌啶混悬液[8 mg/(kg·d)]灌胃建立慢传输便秘模型,对照组予以等剂量的生理盐水灌胃.每5d记录1次大便粒数、大便干质量及大鼠体质量.饲养90 d后停药1 wk,判断模型是否成功.采用实时荧光聚合酶链反应法(Real-time PCR,RTPCR)检测5-HT3受体在慢传输型便秘模型大鼠胃、小肠及结肠的表达.结果:通过比较实验组及对照组的日均粪便粒数、平均每粒粪便质量及首粒黑便排出时间可判断造模成功.RT-PCR能特异性扩增5-HT3受体,5-HT3受体在慢传输型便秘大鼠胃、小肠、结肠组织中的表达均低于正常对照组(0.744±0.065,P<0.05;0.294±0.044,P<0.001;0.16±0.027,P<0.001).结论:慢传输型便秘大鼠胃肠黏膜存在5-HT3受体表达下调,其可能与STC发病机制有关. 展开更多
关键词 慢传输型便秘 5-HT3受体 RT—PCR 胃肠黏膜
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5-HT受体亚型mRNAs在大鼠背根神经节和三叉神经节的表达—原位杂交组织化学法研究 被引量:1
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作者 武胜昔 朱敏 +2 位作者 王亚云 王文 李云庆 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期131-135,T025,共6页
应用原位杂交组织化学技术观察了大鼠背根节和三叉神经节内 5 -HT2 、5 -HT3 、5 -HT4、5 -HT5 、5 -HT6 和 5 -HT7受体亚型 m RNAs的表达。结果显示 :在背根节和三叉神经节中均观察到了 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m ... 应用原位杂交组织化学技术观察了大鼠背根节和三叉神经节内 5 -HT2 、5 -HT3 、5 -HT4、5 -HT5 、5 -HT6 和 5 -HT7受体亚型 m RNAs的表达。结果显示 :在背根节和三叉神经节中均观察到了 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞 ;两种神经节内上述受体亚型 m RNAs阳性细胞的百分比不同。 5 -HT3 受体亚型 m RNA阳性细胞的百分比最高 ,分别为 3 0 .4% (背根节 )和 3 2 .8% (三叉神经节 )。约 17.2 %和 14 .6 %的背根节和三叉神经节细胞分别呈 5 -HT2 A受体 m RNA阳性 ;而 5 -HT4和 5 -HT7受体亚型 m RNAs阳性细胞在此二节中的百分比分别为 14 .9%、2 4.7%和 11.2 %、9.8%。各受体亚型 m RNA阳性细胞均以中、小型节细胞为主。在各神经节内均未观察到 5 -HT2 B、5 -HT2 C、5 -HT5 和 5 -HT6 受体 m RNA的表达。上述结果提示 5 -HT2 A、5 -HT3 、5 -HT4和 5 展开更多
关键词 5-HT受体亚型 反转录PCR 原位杂交组织化学 伤害性感受 感觉神经节 大鼠
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