口蹄疫病毒解旋酶恒温扩增检测方法的建立

针对FMDV编码3D蛋白(RNA聚合酶)的保守序列设计特异性引物,利用逆转录解旋酶恒温扩增技术(Reverse Transcription helicase-dependent isothermal amplification,RT-HDA)建立了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)快速检测方法。该方法可在65℃下,120 min内实现对口蹄疫病毒保守序列的大量扩增。该方法可检测到0.2 ng的FMDV核酸量,比普通RT-PCR高10倍;具有极高的特异性,除了能对FMDV核酸进行扩增外,对其他临床症状与口蹄疫类似的病毒,如水泡病病毒(SVDV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)和水泡性口炎病毒(VSV)的核酸,则不能扩增出目的片段。FMDV的RT-HDA检测方法灵敏度和特异性高,而且不需要昂贵的仪器设备,具有广阔的应用前景。