应用RT-nested PCR检测猪传染性胃肠炎病毒

根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的诊断方法。结果表明,RT-nestedPCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此方法简单省时、灵敏性高,可以作为检测RNA病毒的一种分子生物学方法。

应用RT-nested-PCR检测犬唾液中狂犬病毒的初步研究

目的建立RT-nested-PCR方法,用于检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒,为狂犬病的快速诊断提供一种新思路。方法根据N基因的保守区序列设计2对引物,通过反应条件的优化,建立RT-nested-PCR的方法,以扩增狂犬病毒的N基因,并用该方法检测可疑狂犬唾液中的狂犬病毒。结果该方法的最小RNA检出量可达11.2fg,并具有较好的特异性和重复性。结论建立的RT-nested-PCR检测法,特异性强,敏感度高,结果可靠,操作便捷,值得推广应用。

RT-Nested PCR检测贝类中甲肝病毒的研究

[目的]建立灵敏的贝类中甲肝病毒检测方法[方法]由于贝类中HAV污染水平低并存在PCR抑制剂,普通RT-PCR方法检测贝类中甲肝病毒的灵敏度低。本文建立了使用RT-NestedPCR进行贝类中甲肝病毒检测的方法。[结果]此法的检测灵敏度达0.5个TCID50/1.5g样品,与普通RT-PCR相比,灵敏度提高了100倍。

应用RT-nested PCR检测猪流行性腹泻病毒的研究

将猪流行性腹泻病毒分离株HLJ0 2 ,经过胰酶处理后 ,在Vero细胞上增殖。利用Gen Bank中的基因序列设计合成了 2对M基因引物 ,应用RT PCR和RT nestedPCR分别扩增出HLJ0 2的 85 4bp的M全基因片段和 41 2bp的M基因部分片段 ,而在猪传染性胃肠炎病毒中和Vero培养液中未扩增出上述产物。结果表明 ,RT nestedPCR可用于检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)。

江门成人散发急性腹泻者星状病毒的检测及毒株型别分析

目的研究江门地区成人腹泻者星状病毒感染情况及型别特点。方法收集江门地区病毒性腹泻流行期散发成人腹泻患者粪便标本,经胶体金法、RT-PCR法分别检测轮状病毒和诺如病毒后,运用实时荧光PCR进行星状病毒检测,并对阳性标本进行RT-nestedPCR测序,鉴定型别。结果56份成人病毒性腹泻粪便标本中,荧光PCR法测出3份星状病毒株(5.4%),经RT-PCR测序1份,序列分析鉴定为HAtsV-4型。结论江门成人散发病毒性腹泻者存在星状病毒感染,型别为HAstV-4,未发现多致泻病毒混合感染。

江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒分型及发病情况

目的 了解江苏淮阴地区单采浆献血员丙型肝炎病毒 (HCV)感染后发病情况和病毒基因分型。方法应用ELISA法及RT -nestedPCR法检测 6 7例单采浆献血员感染HCV后抗 -HCV和HCVRNA ,并用限制性片段长度多态性分析法 (RFLP)进行病毒基因分型。结果 6 7例单采浆献血员 ,在感染HCV后 ,急性丙型肝炎发病率为 17.9% (12 / 6 7) ,最终发展成慢性丙型肝炎者 49.3% (33/ 6 7) ,HCV慢性持续感染 6 8.8% (4 6 / 6 7)。HCV基因分型 :1b/Ⅱ型占 95 .5 % (6 4/ 6 7) ,2a/Ⅲ型 1.5 % (1/ 6 7) ,1b/ 2a混合型 3.0 % (2 / 6 7)。结论 淮阴地区单采浆献血员HCV感染以 1b/Ⅱ型为优势株 。

河北省肾综合征出血热主要流行区鼠携带汉坦病毒基因序列分析

目的了解河北省肾综合征出血热（haemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS）主要流行区汉坦病毒主要流行株的基因型及其变异情况。方法收集2012年河北省东北部地区捕获的啮齿动物,均为褐家鼠,取鼠肺组织,用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay,IFA）检测,抗原阳性的标本进行汉坦病毒（Hantavirus,HV）M部分片段扩增并测序,与该地区以往序列及其他部分标准株进行系统发生树及同源性分析。结果收集164份鼠肺标本,经IFA检测26份阳性,挑选9份有代表意义的标本进行逆转录巢式PCR扩增,9份鼠肺标本经RT-PCR检测均为汉城（SEO）型HV,病毒间变异不大,同源性达95.2%~100.0%。以往测序株与新测序株比较同源性为99.0%~100.0%。系统发生树分析结果表明9份标本均为SEO型HV,且为S3亚型。结论河北省HFRS主要流行区HV以SEO型为主,亚型为S3亚型。同型HV基因相对保守,具有区域稳定性特征。