H1亚型禽流感病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立及应用

以H1亚型AIV的HA基因为研究对象,采用重组聚合酶核酸等温扩增技术(RPA),通过RT-PCR方法优选出1套引物,进而优化体系的反应温度、最佳探针及引物浓度,使用优化后的最佳反应体系进行敏感性及特异性试验,并探索该方法能达到的最短反应时间,利用侧向流动免疫(LFD)试纸条观测反应后的结果,最终建立检测H1亚型AIV的RT-RPA-LFD快速检测方法。结果表明:建立的RT-RPA-LFD快速检测方法在探针工作浓度为0.14 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(2)copies/反应的H1亚型AIV RNA,其他常见家禽病原体未见阳性反应。该方法与RT-PCR及鸡胚分离鉴定测序结果完全一致,可满足H1亚型AIV临床快速鉴别诊断的需求,为基层兽医现场快速检测提供技术支撑。

猪瘟病毒核酸RT-RPA-LFD快速检测方法的建立

以猪瘟病毒(CSFV)5’端非编码区(5’UTR)为保守靶核酸序列,利用OLIGO7.0软件设计特异性扩增引物和标记探针,建立了可快速检测CSFV的反转录-重组酶扩增结合免疫侧流层析试纸检测方法(RT-RPA-LFD)。该方法在38℃下恒温30min内即可完成可视化反应,特异性强敏感度高,与其他猪的重要病原无交叉反应。该方法的CSFV RNA检出限(LOD)为2.2×102 copies/μL。上述结果表明,本研究建立的CSFV RTRPA-LFD检测方法操作简单、快速且直观,对没有PCR仪的地区的猪瘟诊断防控具有重要现实意义。

登革病毒逆转录重组酶聚合酶扩增-测流层析试纸条检测方法的建立与评价

目的建立快速简便的登革病毒检验方法对控制登革热疫情至关重要。方法本研究首次建立了一种登革病毒的RT-RPA-LFD检测技术,结果本研究建立的RT-RPA-LFD检测技术能同时检测四种血清型的登革病毒,具有较好的重复性,特异性高,对乙型脑炎病毒、基孔肯雅热病毒、黄热病毒和塞卡病毒没有交叉检测,并且具有较高的检测灵敏度,对四种血清型的登革病毒检测限都低至10拷贝/反应。结论综合考虑其快速性和操作简便性,RT-RPA-LFD是一种非常有前景的登革病毒一线检测技术。