基于实时无标记细胞分析技术时间维度特征的体外抗肿瘤活性评价新策略

目的基于实时无标记细胞分析(real time cellular analysis,RTCA)技术,以黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂为例进行抗A549、H1299肺腺癌活性分析,建立一种反映时间维度变化特征的EC_(50)评价新策略。方法应用RTCA Software Pro数据分析及GraphPad Prism、Origin Pro做图,分别采用终点法和时间维度表征黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷、顺铂受试液/药的体外抗A549、H1299肺腺癌活性。结果①受试液/药对A549及H1299细胞在24 h、48 h终点法中的EC_(50)值有的存在较大差异。②采用四参数方程拟合曲线的相关系数>0.9,EC_(50)动态变化相对稳定期(相邻4点EC_(50)线性拟合|斜率|≤1)计算此时间维度内的EC_(50)值。黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂对A549细胞的EC_(50)分别为52.97±1.75μmol·L^(-1)(16~48 h)、62.88±2.91μmol·L^(-1)(32.25~48 h)、78.84±0.33μmol·L^(-1)(21.5~29.75 h)、13.57±1.54μmol·L^(-1)(27.5~48 h);黄芩苷、黄芪甲苷、橙皮苷和顺铂对H1299细胞的EC_(50)分别为43.71±1.26μmol·L^(-1)(19.5~48 h)、47.23±1.19μmol·L^(-1)(14~48 h)、39.45±0.24μmol·L^(-1)(12.75~46.25 h)、25.97±4.76μmol·L^(-1)(10.25~48 h)。显示受试液/药抗肿瘤起效的时间窗口期不同。结论基于RTCA技术,选用拟合度好、稳定并带有时间维度特征的EC_(50)数据用于抗肿瘤活性评价将更加精确和合理。此外,这种区分开不同有效时间的抗肿瘤药物方法可为临床联合用药的给药时机提供参考,本思路也将为其他体外相关研究提供借鉴。

基于实时细胞分析技术的中药挥发性组分抗人腺病毒3型毒/效整合评价的高通量筛选新策略

目的基于实时细胞分析(real time cell analysis,RTCA)技术对中药挥发性组分的细胞毒性及抗人腺病毒3型(human adenovirus 3,HAdV-3)的作用进行毒/效整合分析,构建抗病毒药物高通量筛选的新策略。方法采用RTCA技术动态监测不同接种密度的A549细胞48 h生长曲线及10倍梯度稀释的HAdV-3感染A549细胞生长曲线,获得A549细胞最佳接种密度及HAdV-3最佳稀释浓度用于后续实验。以利巴韦林为阳性对照,基于RTCA技术采用曲线下面积(Area Under the Curve,AUC)方法对5种中药挥发性组分的细胞毒性及抗HAdV-3的作用进行毒/效整合分析,并与传统终点法数据处理进行对比。结果终点法中艾叶、柴胡、薄荷、荆芥、牛蒡子、酸枣仁和利巴韦林对细胞的保护率分别为0.73%、12.50%、20.99%、44.50%、27.99%、51.50%和82.70%;AUC法中艾叶、柴胡、薄荷的选择性指数(Selective Index,SI)为负数,分别为-0.57、-0.21和-0.08。荆芥、牛蒡子、酸枣仁和利巴韦林的SI值分别为0.14、0.40、0.72和5.33。以利巴韦林的抗病毒活性为参照,终点法中酸枣仁、牛蒡子和荆芥的抗病毒活性为利巴韦林抗病毒活性的62.27%、33.85%和53.81%;AUC法中酸枣仁、牛蒡子和荆芥的抗病毒活性为利巴韦林抗病毒活性的13.51%、7.50%和2.63%。结论传统终点法与研究采用的AUC法计算结果有较大的差异。传统的抗病毒活性筛选研究多采用终点法检测受试药物对病毒感染细胞的保护作用,无法反映整个感染周期的变化,缺乏细胞毒的数据也会对结果的判断产生偏差。研究提示基于RTCA技术对中药挥发性组分开展抗HAdV-3的毒/效整合评价,采用AUC方法计算药物的选择性指数作为高通量筛选新策略,能快速、精准地判断受试药物的抗病毒活性,具有准确性高、重复性好的优势。

RTCA实时监控SAHA对乳腺癌MCF-7细胞生长状态的影响

目的:应用实时无标记动态细胞分析(RTCA)技术研究SAHA抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的情况。方法:采用RTCA系统动态监测不同剂量(0、0.5、1、2、5、10、20、50μmol/L)SAHA对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响。结果:5、10μmol/L的SAHA孵育48 h后可显著抑制细胞的生长,为SAHA抑制MCF-7细胞生长的最佳实验剂量和作用时长;而相关剂量的DMSO无抑制作用。结论:RTCA系统可准确地监测SAHA抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的情况。

RTCA与CCK-8法用于检测柴油废气颗粒物致支气管上皮细胞毒性的比较研究

运用实时无标记细胞分析系统(RTCA)和Cell Counting Kit-8(CCK-8)法分别检测柴油废气颗粒物(DEP)致支气管上皮细胞(HBE)细胞毒性,从而对2种方法进行比较研究。分别以浓度为0、3.5、7、14、28和56 mg·L^(-1)2种柴油废气标准参考颗粒物(Standard Reference Material 1650b,SRM 1650b;Standard Reference Material 2975,SRM 2975)对HBE细胞进行暴露处理,分别暴露6、12、24和48 h后,检测不同DEP致HBE细胞毒性,比较各组之间细胞存活率或标准化细胞指数(normalized cell index,NCI)值的差异,考察2种方法的优缺点。并用细胞凋亡实验检测各差异组之间的凋亡率。在相同染毒浓度及暴露时间,与SRM 1650b相比,SRM 2975对HBE细胞的毒性更强。在RTCA检测DEP致HBE细胞毒性时,低浓度DEP组的NCI值已经表现出与对照组有统计学差异(P<0.05),而相同时间条件下,CCK-8法在更高浓度的DEP组才检测出显著的细胞活性下降(P<0.05)。且由细胞凋亡实验证实,与对照组相比,低浓度DEP组的细胞凋亡率已经有统计学差异。相对于CCK-8法,RTCA更适用于检测DEP致贴壁HBE细胞毒性。CCK-8法更适用于检测DEP致悬浮细胞的细胞毒性或与气液暴露装置联用时的贴壁/悬浮细胞毒性。

RTCA/DO—178A《机载系统和设备审定中的软件考虑》介绍

本文介绍了该文件的背景材料、重要意义;重点介绍了该文件有关机载软件开发过程中的“V&V”活动和SCM、SQA活动的要求;简要介绍了该文件对文档的要求。

RTCA/DO-178A 《机载系统和设备软件的合格审定要求》浅析及使用建议

软件标准是我国标准化工作中一个比较新的领域,不少人对它的重要性还认识不足,对其内容还很生疏。本刊在1990年第三期上发表的六一八所张万良同志的《RTCA/DO-178A“机载系统和设备审定中的软件考虑”介绍》一文,着重介绍RTCA/DO-178A的内容,而李培同志撰写的本文,则是部下达的并已通过了评审的《RTCA/DO-178A“机载系统和设备软件的合格审定要求”使用建议》研究报告的主要内容。两文各有侧重,后者对制定我国相应航空工业标准具有较大参考价值,故本刊予以发表。

差分GPS定位中的RTCA信息格式及其分析

分析了ＲＴＣＡ标准化交换模式的内容，介绍了ＲＴＣＡ主要电文的优点并指出了用户使用中的注意事项。

一种NOR FLASH控制器验证平台的研究

在民用飞机型号取证中,机载电子硬件设备的开发必须遵照RTCA/DO-254设计保证规范。在RTCA/DO-254设计保证规范中,复杂电子硬件的确认与验证是硬件研发过程中的核心环节。相对于NAND FLASH,NOR FLASH因其具有单独的地址总线和数据总线,可靠性高,读取速度快等特点,而被广泛地用来作为引导存储器和存储程序。使用System Verilog-Assertion和Verilog HDL设计并搭建了一种NOR FLASH控制器验证平台,验证平台及其运行结果验证了控制器的设计规范和输出结果是一致的。

miR-449a与胃癌的相关性

目的:从临床及细胞学角度探究miR-449a与胃癌发生的相关性。方法:应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌组织与癌旁周围正常组织中miR-449a表达水平;使用Lipofectamine 2000转染法对MGC803细胞系miR-449a表达进行上调及下调,采用实时细胞动态监测(RTCA)系统及DAPI染色法检测MGC803细胞生长与凋亡情况。结果:(1)相比癌旁周围正常组织,胃癌组织中miR-449a为低表达,其相对表达量为(23.934±4.566,P=0.000);(2)相对于对照组,上调MGC803细胞系miR-449a表达后,RTCA实验结果细胞增殖速度降低(3.947±3.677,P=0.000),DAPI染色结果显示细胞凋亡增加(59.900±8.700,P=0.002);下调miR-449a表达后细胞增殖速度增快(9.005±1.372),凋亡减少(12.500±3.600)。结论:miR-449a具有类似抑癌作用,其低表达与胃癌的发生、发展具有相关性。

β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对Aβ_(1-42)诱导PC12细胞炎症因子表达的影响。方法:(1)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)3.3μM、Aβ_(1-42)10μM、Aβ_(1-42)30μM。采用实时无标记动态细胞分析技术(Real Time Cell Analusis,RTCA)和MTT法检测各组PC12细胞存活率;Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。(2)将对数生长期PC12细胞随机分为正常对照组、Aβ_(1-42)模型组、β-细辛醚18.5μg·mL^(-1)、β-细辛醚55.5μg·mL^(-1)、β-细辛醚166.7μg·mL^(-1)。采用Western blotting检测PC12细胞的IL-1β和TNF-α蛋白表达的变化。结果:(1)3.3μM Aβ_(1-42)能显著增加PC12细胞IL-1β和TNF-α的蛋白表达(P<0.05),对PC12细胞的存活率无显著影响(P>0.05)。(2)与正常对照组相比,Aβ_(1-42)模型组细胞的IL-1β和TNF-α的表达明显增加(P<0.01)。与Aβ_(1-42)模型组相比,β-细辛醚(55.5μg·mL^(-1)、166.7μg·m L^-1)能显著降低PC12细胞IL-1β、TNF-α的表达(P<0.01),β-细辛醚(18.5μg·mL^(-1))能降低PC12细胞IL-1β的表达(P<0.05),但对TNF-α的表达无显著影响(P>0.05)。结论:β-细辛醚可以有效地抑制Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞分泌IL-1β、TNF-α的蛋白表达。

姜黄素修饰的纳米金棒抑制胃癌细胞SGC-7901的作用

恶性肿瘤严重威胁着人类的健康。合成了姜黄素修饰的纳米金棒(Cur@Au NRs),并考察其对胃癌细胞(SGC-7901)的作用,采用MTT法测试其对5种肿瘤细胞株的体外增殖活性的影响,同时观察其对SGC-7901形态学的影响;利用实时x CELLigence细胞分析系统(RTCA)检测不同浓度Cur@Au NRs对SGC-7901增殖能力及迁移能力的影响;利用划痕愈合实验及血管形成实验检测Cur@Au NRs对细胞的迁移及血管形成的抑制作用;采用腹腔注射Cur@Au NRs后与正常小鼠内脏组织切片的对比,对其进行毒理学研究。研究结果表明,Cur@Au NRs具有良好的抗肿瘤活性,尤其对SGC-7901,且其IC50值明显低于姜黄素,并且能够抑制SGC-7901的增殖和迁移。毒理学研究表明即使在高剂量下也不具有明显的毒性。

基于实时阻抗细胞分析技术评价H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型及三七皂苷R_1的干预作用

目的基于实时阻抗细胞分析技术,建立规范标准的H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,并用三七皂苷R_1进行评价。方法将H9c2心肌细胞接种到E-Plate板中,设3个复孔,分别测定生长曲线、不同缺氧时间、不同复氧时间及三七皂苷R_1的干预下细胞指数值,以细胞指数值反映H9c2心肌细胞的生长状态。结果本研究发现,缺氧前更换无血清、无糖DMEM培养基,缺氧4 h,复氧16 h,细胞存活率为(48.82±5.32)%,与MTT法测定结果差异无显著性,且三七皂苷R_1能够保护缺氧/复氧处理H9c2心肌细胞损伤,不存在时间依赖性。结论实时阻抗细胞分析技术能够建立标准规范的缺氧/复氧模型方法,对发现新药物靶点及作用机制也有一定的指导意义。

基于无线数传模块的无人机通信系统设计

为提高无人机飞行的距离,设计了利用无线数传模块作为载体的通信系统;该系统分为下位机模块和上位机模块两部分,其中下位机模块主要处理遥控器控制信息和RTCA格式差分GPS信息并提出了一种同时传输这两种信息的数据格式;上位机模块则分别获取这两种信息用于得到高定位精度GPS数据和控制舵机;试飞实验表明,与传统的利用无线电发射机和接收机传输相比,该系统不仅能突破无线电通信距离的限制,还能有效消除外界电磁场对无线电信号的干扰。

民用飞机简单电子硬件符合性验证策略研究

在民用航空领域,简单电子硬件是一类特殊的重要机载电子硬件。如何对其进行符合性验证,从而满足合格审定的要求,当前仍存在着一定困惑和分歧。本文结合某型号飞机的研制经验,提出了一种可行的简单电子硬件符合性验证策略。

乌骨藤提取物对原代新生大鼠心肌细胞的毒性研究

目的探讨乌骨藤提取物(MTE)对原代新生大鼠新生心肌细胞的毒性影响。方法分离和培养SD大鼠心肌细胞,将MTE组分A溶于二甲基亚砜,分别使用20、40、80、160和320μg/ml的MTE和8 000μg/ml的5-氟尿嘧啶作为阳性对照处理原代大鼠心肌细胞24 h,采用MTS法测定不同浓度MTE对体外培养原代大鼠心肌细胞增殖的影响;采用RTCA Cardio系统建立体外心脏毒性筛选模型,对大鼠心肌细胞增殖、搏动进行检测。结果原代心肌细胞加入不同浓度的MTE后,细胞存活受到显著抑制,半数存活浓度(EC50)为207.3μg/ml,随着MTE浓度的升高组分A抑制率增强(均P<0.05)。原代心肌细胞接种到RTCA Cardio E-Plate96孔板上,24h后出现心肌细胞搏动。MTE处理后,细胞指数(CI)值显著下降,240μg/ml MTE组分A处理后心肌细胞搏动迅速受到抑制,搏动频率由126次/min下降至0次/min,且不可恢复;160μg/ml和80μg/ml处理后分别在12h和6h后抑制作用减弱,搏动频率为40次/min和84次/min;40μg/ml基本无影响。结论 MTE组分A对原代新生大鼠心肌细胞具有细胞毒作用,能够显著影响其搏动功能。

2种方法测定氧化铜纳米颗粒对新生大鼠脑微血管内皮细胞毒性的比较研究

目的:比较实时细胞分析技术(RTCA)和刃天青法测定氧化铜纳米颗粒(CuO-NPs)对新生大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的细胞毒性的异同。方法:采用RTCA法确定BMECs细胞毒性实验的最佳细胞接种数量及染毒时间。分别用1.5、0.75、0.38、0.19、0.09 mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs,以无细胞的培养液为对照组(0 mg/mL),分别以RTCA法及刃天青法比较其细胞毒性。通过比较2种方法所获得的IC_(50)值判断2种毒性测试方法的相关性。结果:每孔2.5×10~3个细胞为BMECs最佳接种浓度,接种后40h为最佳染毒时间。RTCA检测结果表明1.5、0.75 mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs后约2 h开始细胞活性降低,并在染毒4 h内全部死亡。通过刃天青法分别在染毒3、12、24、36、48 h进行测定,得到与RTCA相似的结果,即1.5和0.75 mg/mL组的细胞毒性最大,且CuO-NPs对BMECs的细胞毒性呈剂量依赖性趋势。相关性分析结果显示2种方法所获得IC_(50)值相关系数为0.999,P=0.000,具相关性。配对t检验结果显示,差异无统计学意义(t=1.125,P=0.323)。从计算IC_(50)的R^2值来看,RTCA拟合曲线法R^2值高于刃天青法R^2值。结论:CuO-NPs体外作用于BMECs具有剂量依赖性的细胞毒性,RTCA方法与刃天青法测定BMECs细胞毒性结果具有相关性,RTCA方法所得结果可能更为准确,更适合于CuO-NPs的细胞毒性研究。

基于TVS管的机载电子设备闪电防护设计

随着机载电子设备复杂度提升、内部固有屏蔽减少,电源线和信号线的闪电防护将会成为未来航空机载电子产品的强制要求。因此TVS管也得到快速发展,使设备在敏感的闪电环境中获得安全的性能。介绍了RTCA/DO-160G第22节的内容,分析了TVS管的基础特性;以ARINC429接口为例,详细分析了TVS管的选型方法;提出了闪电防护设计上的建议。该方法已经通过DO-160G试验验证,TVS管工作良好,可以用于相同类型其他接口电路的闪电防护设计。

基于HI3210的ARINC429总线标准接口设计与实现

文章给出了一种基于HI3210协议芯片的ARINC429总线标准接口设计电路,该电路能够实现8通道接收、4通道发送,具有高集成度、高综合化、小型化以及环境适应能力强等优点,能够很好地满足当前航空电子系统领域对机载设备提出的新需求。

纳米氧化铜作用于CHO细胞的细胞毒性实时动态研究

目的对纳米氧化铜作用于CHO细胞在连续时间点所产生的细胞毒性效应进行研究,得到准确数据,为进一步毒性机制研究提供参考依据。方法应用RTCA（real-time cell analysis）对不同密度的CHO细胞进行长时间连续测定,绘制不同密度CHO细胞的完整生长曲线。对不同剂量的纳米氧化铜作用于CHO细胞所产生的毒性效应进行实时监测,得到不同作用时间的准确IC50值,绘制连续时间点IC50变化曲线,以判定纳米氧化铜作用于CHO细胞所产生的毒性效应。结果 4种不同密度细胞接种后对数生长期时间有所不同,其中5×10^3个/孔密度最适合进行毒性效应试验。不同剂量纳米氧化铜染毒后,毒性作用起始时间约4~5 h,作用12、24、36和48 h的IC50值分别为0.249、0.207、0.236和0.412 mg/m L。结论纳米氧化铜作用于CHO细胞,毒性作用起始时间约为染毒后3 h开始,作用6 h后,IC50值明显下降,且随着时间延长呈现下降趋势。作用时间达到18 h后,IC50值持续在低于0.2 mg/m L以下,且数值接近。

机载简单电子硬件的适航考虑

针对RTCA DO-254中对于简单电子硬件的符合性表明方式定义不明确的问题,为了解决机载电子设备适航过程中简单电子硬件如何表明对DO-254符合性的问题,通过分析FAA Order 8110.105A中的关于简单电子硬件的符合性验证考虑,重点讨论简单电子硬件的判定方式,符合性验证要求,并结合工作经验探讨具体符合性验证工作。