CircRTN4调节miR-224-5p/MYT1L轴对胶质母细胞瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)RTN4调节微小RNA(miR)-224-5p/髓磷脂转录因子1样(MYT1L)轴对胶质母细胞瘤(GM)细胞恶性生物学行为的影响。方法:以对数生长期的U251细胞进行设置分组:空白组、阴性对照(sh NC)组、沉默circRTN4 shRNA(sh circRTN4)组、sh circRTN4+抑制剂对照(inhibitor NC)组、sh circRTN4+miR-224-5p抑制剂(miR-224-5p inhibitor)组。Transwell实验、流式细胞术、CCK-8、qRT-PCR、Western blot以及双荧光素酶分别检测细胞迁移与侵袭、凋亡、增殖、CircRTN4、miR-224-5p、MYT1L mRNA表达、增殖蛋白(ki-67)、凋亡蛋白(cleaved Caspase-3)、MYT1L蛋白表达以及miR-224-5p分别与CircRTN4、MYT1L靶向关系验证;qRT-PCR检测GM细胞系U118、U87、U251和LN229细胞及正常人星形胶质细胞系NHA细胞中CircRTN4、miR-224-5p、MYT1L mRNA表达水平。结果:U118、U87、U251和LN229细胞中CircRTN4、MYT1L mRNA表达较NHA细胞显著增加,miR-224-5p表达显著下降(P<0.05);miR-224-5p分别与CircRTN4、MYT1L的有靶向关系。与空白组、sh NC组相比,sh circRTN4组迁移、侵袭数、24h、48h A450值、ki-67、CircRTN4、MYT1L mRNA及蛋白表达显著降低,凋亡率、cleaved Caspase-3表达显著增加(P<0.05);与sh circRTN4+inhibitor NC组相比,sh circRTN4+miR-224-5p inhibitor组迁移、侵袭数、24h、48h A450值、ki-67、MYT1L mRNA及蛋白表达显著增加,凋亡率、cleaved Caspase-3表达显著下降(P<0.05),CircRTN4表达无统计学差异(P>0.05),体内实验证明干扰CircRTN4可显著抑制移植瘤裸鼠肿瘤质量(P<0.05)。结论:沉默CircRTN4调节miR-224-5p/MYT1L轴抑制GM细胞恶性生物学行为。

miR-448/RTN4轴调控结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药性的机制研究

目的探讨结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抵抗及潜在机制。方法使用5-Fu筛选出HCT116和HT295-Fu抗性细胞系(HCT116/FR和HT29/FR细胞)。通过高通量测序和siRNA功能筛选鉴定5-Fu处理后HCT116/FR细胞中影响细胞凋亡水平的关键基因。过表达该基因(RTN4)后检测HCT116/FR和HT29/FR细胞的凋亡水平和细胞活力水平。过表达或敲低此miRNA(miR-448)后检测HCT116、HT29、HCT116/FR和HT29/FR细胞的细胞活力、细胞凋亡水平和RTN4的表达水平。26例结肠癌患者,按照化疗效果分为对化疗敏感型结肠癌患者(Sensitive)与化疗抵抗型结肠癌患者(Resistant),并采用免疫组织化学染色方法检测RTN4在患者中的表达水平。结果当敲低RTN4时,HCT116/FR细胞的凋亡水平下降(P<0.05)。5-Fu处理HCT116/FR细胞和HT29/FR细胞后,RTN4的mRNA水平均下调(P<0.05)。敲低RTN4后并用5-Fu处理,HCT116和HT29显示出对5-Fu抑制增殖的抵抗(P<0.05)。过表达RTN4后,HCT116/FR和HT29/FR细胞的凋亡水平上升(P<0.05)。5-Fu处理后,HT29/FR和HCT116/FR细胞中miR-448的表达水平上升(P<0.05)。5-Fu处理后并过表达miR-448后,HCT116和HT29细胞的凋亡水平下降(P<0.05)。在HCT116/FR细胞中,过表达miR-448后,RTN4的表达水平下降;敲低miR-448后,RTN4的表达水平上升(P<0.05)。在HT29/FR细胞中,过表达miR-448后,RTN4的表达水平下降;敲低miR-448后,RTN4的表达水平上升(P<0.05)。免疫组织化学分析发现对化疗敏感的结肠癌患者癌组织中RTN4表达水平较高(P<0.05)。结论当结肠癌细胞HCT116和HT29遇到5-Fu后,细胞中miR-448的表达水平上升,miR-448靶向RTN4 mRNA的3端非编码区并降解了RTN4 mRNA,减少了RTN4的蛋白表达,最终提升了结肠癌细胞HCT116和HT29对5-Fu的抗性。

RTN4-C基因在肝癌组织中的表达及其对SMMC7721细胞生长和凋亡的影响(英文)

RTN4-C属于编码内质网蛋白的基因家族(RTNs)。为研究RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达情况及其对SMMC7721肝癌细胞株的影响,利用RT-PCR检测RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达。构建RTN4-C-pcDNA3.1真核表达重组质粒,用脂质体介导转染SMMC7721肝癌细胞,通过G418稳定筛选,建立转染RTN4-C/SMMC7721稳定细胞株。MTT法测定转染前后细胞生长改变、吖啶橙染色检测细胞凋亡改变、免疫细胞化学检测肿瘤相关蛋白p53、Hsp70和c-Fos表达改变。结果表明,RTN4-C/SMMC7721细胞生长减慢,与对照组相比,第2、3、4d细胞生长抑制率分别为33·8%±0·026、56·2%±0·094、34·8%±0·077;凋亡明显增多。突变型p53蛋白从核内转移到细胞质且表达减弱,c-Fos、Hsp70蛋白表达量明显减弱。提示RTN4-C基因在肝癌组织中存在表达差异,促进突变型p53的核转移并减少其表达量、抑制癌基因c-Fos和Hsp70的表达,从而抑制SMMC7721细胞的生长,促进其凋亡。

RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床病理意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2008~2012年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本40例和癌旁组织标本20例。采用免疫组织化学方法检测RTN4和TG2的表达,分析二者在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与临床病理资料之间的关系。用SPSS 13.0软件对各组免疫组织化学反应的平均吸光度和平均阳性面积率作单因素方差分析和SNK（q）检验（α=0.05）,对甲状腺乳头状癌和癌旁组织RTN4和TG2表达的阳性面积率作双变量相关分析（α=0.05）。结果 1RTN4、TG2在甲状腺乳头状癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达,统计分析显示,甲状腺乳头状癌组织中RTN4、TG2的表达显著高于癌旁组织（P〈0.05）。2RTN4和TG2在有淋巴结转移组中的表达均显著高于无淋巴结转移组,在临床分期Ⅰ和Ⅱ期组阳性率显著高于Ⅲ和Ⅳ期组,在低分化组阳性率显著高于高、中分化组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;二者在不同肿瘤大小、患者年龄、性别组间的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。3RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关（r=0.587,P〈0.05）。结论 1RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌组织中表达上调,可能与瘤细胞的过度增殖,抗凋亡增强等有关;2RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌的增殖、转移中发挥重要作用;3RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌的进展过程中可能发挥着协同作用。

RTN4和TG2在增生期血管瘤组织中高表达及其临床意义

目的探讨RTN4和TG2在人皮肤血管瘤组织中的表达及其临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2008年-2011年皮肤毛细血管瘤存档蜡块40例,其中男性15例,女性25例。采用免疫组织化学S-P法检测40例皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织RTN4和TG2表达水平,采用图像分析系统对RTN4和TG2的表达进行定量分析,并用SPSS13.0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果增生期组RTN4的表达明显高于退化期组和正常皮肤组,而后两组比较差异无统计学意义;增生期组TG2的表达明显高于退化期组和正常皮肤组,而后两组比较差异无统计学意义。结论 RTN4和TG2在增生期血管瘤组织中的表达明显高于正常皮肤组及退化组,提示RTN4和TG2在增生期血管瘤组织中表达上调,可能与瘤细胞的过度增殖,抗凋亡增强等有关。

RTN4C裸基因抑制人肝癌细胞生长及转移的体内实验研究

目的 :研究RTN4C裸基因直接注射抗肝癌生长及转移复发作用。方法 :将RTN4C装入逆转录病毒载体 ,扩增提取RTN4C裸基因 ,以LacZ为对照组。将不同裸基因和生理盐水与LCI D2 0裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI D2 0肝癌成瘤后注射 ,观察对肿瘤成瘤和生长影响。LCI D2 0肿瘤裸鼠皮下接种后 10天 ,分别瘤内注射不同裸基因 ,观察其对肿瘤生长转移影响。LCI D2 0肿瘤肝内接种 ,接种后 2 2天行肝癌切除术 ,术中经切缘或脾内注射不同裸基因 ,观察其对术后转移复发的影响。结果 :不同裸基因与LCI D2 0肝癌同时皮下接种对照组、LacZ组、RTN 4C组 ,肿瘤直径分别为 (1 81± 0 12 )cm ,(1 6 1± 0 2 7)cm、 (0 4 3± 0 0 4 )cm。裸基因肿瘤内注射对照组、LacZ组、RTN4C组 ,瘤径 (cm)分别为 0 91± 0 0 9,0 90± 0 0 6 ,0 2 5± 0 0 4 ;肝癌切除术应用裸基因转移灶累及部位数、切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目 ,转移灶累及肝叶数在对照组、LacZ组与RTN4C组间存在显著差异。脾内注射效果优于肝切缘组注射。结论 :RTN4C裸基因注射具有抑制LCI D2

Rtn4-A/B基因敲除小鼠模型的制备

目的通过制备Rtn4-A/B基因敲除小鼠,探索Rtn4-B基因的生物学功能。方法用细菌人工染色体(BAC)载体构建Rtn4-A/B基因打靶载体并使其线性化,通过电转化法将其转入129SvEv品系雄性小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)。将正确同源重组的ES细胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合体小鼠后,进一步繁殖以获得杂合子小鼠。抽提小鼠尾尖组织DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型。结果基因打靶后,得到14个发生双臂正确同源重组ES细胞克隆。利用阳性ES细胞克隆进行囊胚内显微注射,得到5只嵌合率大于50%的雄鼠,最终繁育得到4只Rtn4-A+/-B+/-杂合子小鼠。结论利用ES细胞基因打靶、同源重组等方法,成功获得Rtn4-A/B基因敲除杂合子小鼠。

精神分裂症患者外周血中RTN4基因的mRNA表达研究

目的检测精神分裂症患者外周血中髓鞘相关抑制因子（RTN4）基因的信使核糖核酸（mRNA）表达量,研究其与临床症状间的关系。方法对44例精神分裂症患者（患者组）和37例社区正常人群（对照组）的外周肘静脉采血2～3 ml,提取总RNA,制备c DNA,比较两组RTN4基因的mRNA表达水平。对患者组采用阳性和阴性综合征量表（PANSS）进行评分,两两比较阳性症状为主组、阴性症状为主组和混合症状为主组三组RTNA基因的mRNA表达水平。结果患者组与对照组外周血中的RTN4基因表达水平存在统计学差异（P〈0.05）,患者组中阳性症状为主组、阴性症状为主组、混合症状为主组,两两之间RTN4表达水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 RTN4基因的mRNA表达量与精神分裂症之间存在着相关性,可为今后进一步了解精神分裂症的发病机制及诊断治疗等方面提供依据。

肝癌发生中RTN4C基因突变研究(英文)

为研究肝癌发生过程中RTN4C基因突变 ,利用直接序列分析、PCR -SSCP等研究了肝癌(HCC)中RTN4C突变与杂合性缺失 (LOH)。HCC中 ,RTN4CP突变为 6 2 9%,LOH为 6 8 4 %。 90 %LOH的肝癌中RTN4C发生突变。RTN4C突变相关的肝癌发生中LOH起重要作用。

广西壮族人群RTN4基因多态性及其单倍型与鼻咽癌易感性的关系

目的研究广西壮族人群RTN4基因多态性及其单倍型与鼻咽癌易感性之间的关系。方法运用DNA测序法和单碱基延伸PCR技术,检测广西壮族人群200例确诊为鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和200例健康查体者(对照组)的RTN4基因rs2588510和rs1348528位点基因型,并分析RTN4基因的等位基因和单倍型频率。结果 RTN4基因多态性rs2588510和rs1348528位点在对照组和鼻咽癌组中的基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义。而两个位点在对照组和鼻咽癌组中单倍型CG频率分别为27.5%和34.8%,单倍型TA频率分别为0.7%和3.0%,鼻咽癌组单倍型CG和TA频率的分布差异显著高于对照组(P=0.007,OR=2.05,95%CI:1.21~3.46;P=0.001,OR=6.48,95%CI:1.69~24.9)。结论 RTN4基因多态性rs2588510和rs1348528位点的单倍型CG和TA可增加广西壮族人群个体鼻咽癌易感性。

RTN4-C相互作用蛋白的筛选与鉴定

我们的前期工作发现过表达RTN4-C基因能够抑制肝癌细胞株SMMC7721的生长并且促进其发生凋亡.为了进一步了解RTN4-C促进凋亡的机制,本文采用酵母双杂交的方法从小鼠7 d胚胎文库中筛选其相互作用的蛋白.最终筛选到其同源家族成员RTN3.进一步采用间接免疫荧光和及构建的荧光载体表明,RTN4-C和RTN3蛋白在HEK293和Hela细胞中发生共分布.本研究为进一步阐明RTN4-C抑制细胞生长和促进细胞凋亡的机制提供了新的依据.

中国广西人群中RTN4基因遗传多态性的研究

目的:研究RTN4基因rs2920891A/C和rs17046647A/G位点多态性在广西人群中的分布特征,比较不同人群的分布差异。方法:本实验采用多重单碱基延伸PCR(SNa Pshot)和DNA测序方法,对323例广西健康体检者RTN4基因的rs2920891A/C和rs17046647A/G位点基因型进行检测,并与国际人类基因组单体型图计划(Hap Map)公布的不同人群(北京、日本、欧洲及非洲人群)RTN4基因多态性数据进行比较。结果:在广西人群中,RTN4基因rs2920891A/C位点存在AA、AC、CC基因型及A、C等位基因,其等位基因频率在男女间的分布差异有统计学意义(P<0.05),基因型及等位基因频率与日本、欧洲及非洲人群比较差异均有统计学意义(P<0.05);rs17046647A/G位点存在AA、AG、GG基因型和A、G等位基因,基因型及等位基因频率在男女间比较差异无统计学意义(P>0.05),而与日本、欧洲及非洲人群比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:中国广西人群中RTN4基因的rs2920891A/C和rs17046647A/G位点多态性与其他种族间存在差异性。

RTN4基因外显子区拷贝数变异与鼻咽癌的相关性研究

目的探讨RTN4基因(54972187-55137831)外显子区9个目的片段拷贝数变异(copy number variant,CNV)与鼻咽癌的相关性研究。方法采用多重基因拷贝数检测技术(Accu Copy TM)对179例鼻咽癌样本和200例健康体检者样本进行RTN4基因外显子区9个目的片段拷贝数检测,观察两组样本基因拷贝数变异情况,运用数理统计比较两组拷贝数分布的差异性。结果鼻咽癌患者和健康体检者的RTN4基因外显子区的拷贝数主要以2个拷贝为主,经分析发现这两组的拷贝数比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 RTN4基因(54972187-55137831)外显子区拷贝数变异可能与鼻咽癌发生发展无相关性。

RTN4对于结肠癌细胞增殖的调控作用

2018年全球癌症统计调查显示,结直肠癌约占患癌新病例的12.1%。因此,寻找新的结肠癌发生有关的基因,发现新的治疗靶点显得尤为迫切。通过数据库分析发现,RTN 4基因的表达水平与结肠癌患者生存率的相关性具有统计学意义。针对RTN 4基因构建其干扰质粒,将慢病毒作为载体转染结肠癌HCT116细胞中构建敲低RTN 4的结肠癌细胞系,最后检测了低表达后RTN 4基因的细胞增殖。结果发现,敲低RTN 4基因后显著促进了结肠癌细胞HCT116的增殖,研究通过Western blot观察敲低RTN 4后HCT116细胞自噬通路相关蛋白p62和LC3的表达情况,发现与对照组相比较,敲低RTN 4组LC3转化量(LC3-II/LC3-I)增多,而p62蛋白减少。研究分析了RTN 4的潜在抑癌作用,发现敲低RTN 4基因会显著增强结肠癌细胞的增殖能力,并且诱导自噬,说明RTN 4可能与激活LC3/p62自噬途径有关。

人 reticulon 4c(RTN4c)的cDNA克隆与组织表达谱分析

ＲＴＮｓ（ｒｅｔｉｃｕｌｏｎｓ）是一个与神经内分泌细胞生长、分化有关联的基因家族，迄今已发现了ＲＴＮ１，ＲＴＮ２和ＲＴＮ３等３个成员，其中ＲＴＮ１和ＲＴＮ２已被证明分别具有３种不同长度的转录本以一个与小细胞肺癌发病机制有关的 ＲＴＮ１ｃ ｃＤＮＡ为信息探针，通过电子杂交辅助的新基因克隆技术，从人脑ｃＤＮＡ文库中分离到一个长 １６７７ｂｐ的 ｃＤＮＡ，它含有一个编码１９９个氨基酸残基的完整开放阅读框．它的推导蛋白质序列与 ＲＴＮ１Ｃ， ＲＴＮ２Ｃ和 ＲＴＮ３高度同源，同源度分别为６４．４％， ４５．８％和 ５０．０％，故将其命名为 ＲＴＮ４ｃ（ＧｅｎＢａｎｋ注册号为 ＡＦ０８７９０１）． Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示， ＲＴＮ４ｃ基因的转录本长约 １．８ ｋｂ，它在心、胎盘、肺、脾、胸腺、睾丸、卵巢、小肠和白细胞等组织中几乎不表达，在胰腺、前列腺和结肠中仅有极少量表达，但在骨骼肌、脑、肝、肾中大量表达．此外，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ结果还显示，在除肝脏和骨骼肌之外的１４种组织中均存在另一种约２．３ ｋｂ的转录本；在脑、骨骼肌和睾丸组织中则还存在一种约 ５．０ ｋｂ的转录本．通过电子杂交步移，发现了两个与上述５．０和 ２．３ ｋｂ转录本长?

RTN4基因rs2864052和rs6545468与广西壮族人群鼻咽癌易感性相关研究

目的:研究RTN4多态性rs2864052和rs6545468位点及其单倍型与广西壮族人群鼻咽癌易感性相关关系。方法:运用单碱基延伸PCR技术和DNA测序法对广西壮族282例鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和199例健康体检者(对照组)的RTN4基因rs2864052和rs6545468位点进行基因分型,并分析RTN4基因的单倍型频率。结果:RTN4基因rs2864052存在AA、GA、GG三种基因型和A、G等位基因,其在鼻咽癌组与对照组中的基因型、等位基因频率的分布差异无统计学意义;rs6545468位点存在CC、GC、GG三种基因型和C、G等位基因,其在鼻咽癌组与对照组中的基因型、等位基因频率的分布差异亦无统计学意义。但单倍型分析发现鼻咽癌组单倍型AG频率显著低于对照组(P=0.004,OR=0.14,95%CI为0.31-0.68)。结论:RTN4基因多态性rs2864052和rs6545468位点的单倍型AG可降低广西壮族人群个体鼻咽癌易感性。

RTN4在胃癌发病机制中的作用

目的了解RTN4蛋白在胃癌发病过程中的作用,为揭示胃癌发病的分子机制提供实验资料。方法将pIRESneo3-RTN4真核表达载体转染胃粘膜上皮GES1细胞,建立RTN4高表达的GES1-RTN4细胞系;通过细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪,观察RTN4高表达对GES1细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响;利用Western-blot检测GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白的表达。结果 GES1-RTN4细胞的生长速度较GES1和GES1-pIRESneo3细胞加快,统计学意义显著(P<0.01);GES1-RTN4细胞较GES1和GES1-pIRESneo3细胞克隆体积大、数目多,统计学意义显著(P<0.01);GES1-RTN4细胞中S期细胞比例较GES1和GES1-pIRESneo3细胞增加,细胞增殖指数增加,细胞凋亡率降低,统计学意义显著(P<0.01);GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白表达较GES1和GES1-pIRESneo3细胞减少,统计学意义显著(P<0.01)。结论RTN4通过活化NF-κB信号通路,提高细胞增殖指数,抑制细胞凋亡,促进GES1细胞的增殖。

RTNs家族研究进展

编码内质网蛋白家族的基因(RTNs)是一类广泛存在于真核生物的基因家族,它有着特殊的拓扑结构。RTNs蛋白的羧基端存在一个大约200个氨基酸的保守区(RHD),此保守区包含2个疏水区段。RTNs蛋白定位内质网膜上,高等脊椎动物中枢神经受损时,RTN4-A/Nogo-A起抑制神经生长的作用,RTNs蛋白家族其余成员的功能还不是很清楚,可能与胞内运输,细胞分裂和细胞凋亡等有关。现就RTNs成员的基本结构、表达分布、亚细胞定位、拓扑结构和RTNs蛋白的功能等进行综述。

RNT4在胃癌组织中的表达及意义

目的观察RNT4蛋白在胃癌组织中的表达及意义,为获取胃癌诊断相关的蛋白分子提供实验依据。方法采用RT-PCR和Western blot检测RTN4在胃癌组织中的表达;应用免疫组化染色检测胃癌组织中RTN4蛋白的表达率,并分析其表达的临床意义。结果 1RT-PCR和Western blot结果均显示,与正常胃黏膜组织比较,RTN4在胃癌组织中的表达明显增加(P<0.05)。2胃癌与正常胃黏膜组织中RTN4蛋白的阳性表达率分别为60.9%(28/46)与25%(6/24),RTN4蛋白在胃癌组织中阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织(P<0.05)。结论 RNT4蛋白在胃黏膜组织中高表达与胃癌的发生密切相关。

Cloning and expression analysis of human reticulon 4c cDNA

RTNs (reticulons) is a gene family related to the growth and differentiation of neuroendocrine cell. This family is composed of several members such as RTN1, RTN2ar\d RTN3. RTN1 and RTN2 have been proved to have 3 transcripts with different length. Because the RTN1c cDNA was involved in the sologenesis of small cell lung carcinoma (SCLC), it was selected as a bioinformatic probe to clone novel members of RTN family with the electric hybridization assistant new-gene cloning method (EHAC). A 1677-bp cDNA was identified from human brain cDNA library. The cDNA contains an intact open reading frame (ORF) which encodes a protein of 199 amino acids. This deduced protein is highly homologous to RTN1c, RTN2c and RTN3 with identities of 64.4%, 45.8% and 50.0% respectively. This new gene was named RTN4c (GenBank accession number: AF087901). Northern hybridization showed that the full length of RTN4c transcript is about 1.8 kb. It is hardly expressed in heart, placenta, lung, spleen, thymus, testis, ovary, small