RTNs家族研究进展

编码内质网蛋白家族的基因(RTNs)是一类广泛存在于真核生物的基因家族,它有着特殊的拓扑结构。RTNs蛋白的羧基端存在一个大约200个氨基酸的保守区(RHD),此保守区包含2个疏水区段。RTNs蛋白定位内质网膜上,高等脊椎动物中枢神经受损时,RTN4-A/Nogo-A起抑制神经生长的作用,RTNs蛋白家族其余成员的功能还不是很清楚,可能与胞内运输,细胞分裂和细胞凋亡等有关。现就RTNs成员的基本结构、表达分布、亚细胞定位、拓扑结构和RTNs蛋白的功能等进行综述。

CircRTN4调节miR-224-5p/MYT1L轴对胶质母细胞瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨环状RNA(CircRNA)RTN4调节微小RNA(miR)-224-5p/髓磷脂转录因子1样(MYT1L)轴对胶质母细胞瘤(GM)细胞恶性生物学行为的影响。方法:以对数生长期的U251细胞进行设置分组:空白组、阴性对照(sh NC)组、沉默circRTN4 shRNA(sh circRTN4)组、sh circRTN4+抑制剂对照(inhibitor NC)组、sh circRTN4+miR-224-5p抑制剂(miR-224-5p inhibitor)组。Transwell实验、流式细胞术、CCK-8、qRT-PCR、Western blot以及双荧光素酶分别检测细胞迁移与侵袭、凋亡、增殖、CircRTN4、miR-224-5p、MYT1L mRNA表达、增殖蛋白(ki-67)、凋亡蛋白(cleaved Caspase-3)、MYT1L蛋白表达以及miR-224-5p分别与CircRTN4、MYT1L靶向关系验证;qRT-PCR检测GM细胞系U118、U87、U251和LN229细胞及正常人星形胶质细胞系NHA细胞中CircRTN4、miR-224-5p、MYT1L mRNA表达水平。结果:U118、U87、U251和LN229细胞中CircRTN4、MYT1L mRNA表达较NHA细胞显著增加,miR-224-5p表达显著下降(P<0.05);miR-224-5p分别与CircRTN4、MYT1L的有靶向关系。与空白组、sh NC组相比,sh circRTN4组迁移、侵袭数、24h、48h A450值、ki-67、CircRTN4、MYT1L mRNA及蛋白表达显著降低,凋亡率、cleaved Caspase-3表达显著增加(P<0.05);与sh circRTN4+inhibitor NC组相比,sh circRTN4+miR-224-5p inhibitor组迁移、侵袭数、24h、48h A450值、ki-67、MYT1L mRNA及蛋白表达显著增加,凋亡率、cleaved Caspase-3表达显著下降(P<0.05),CircRTN4表达无统计学差异(P>0.05),体内实验证明干扰CircRTN4可显著抑制移植瘤裸鼠肿瘤质量(P<0.05)。结论:沉默CircRTN4调节miR-224-5p/MYT1L轴抑制GM细胞恶性生物学行为。

miR-448/RTN4轴调控结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药性的机制研究

目的探讨结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抵抗及潜在机制。方法使用5-Fu筛选出HCT116和HT295-Fu抗性细胞系(HCT116/FR和HT29/FR细胞)。通过高通量测序和siRNA功能筛选鉴定5-Fu处理后HCT116/FR细胞中影响细胞凋亡水平的关键基因。过表达该基因(RTN4)后检测HCT116/FR和HT29/FR细胞的凋亡水平和细胞活力水平。过表达或敲低此miRNA(miR-448)后检测HCT116、HT29、HCT116/FR和HT29/FR细胞的细胞活力、细胞凋亡水平和RTN4的表达水平。26例结肠癌患者,按照化疗效果分为对化疗敏感型结肠癌患者(Sensitive)与化疗抵抗型结肠癌患者(Resistant),并采用免疫组织化学染色方法检测RTN4在患者中的表达水平。结果当敲低RTN4时,HCT116/FR细胞的凋亡水平下降(P<0.05)。5-Fu处理HCT116/FR细胞和HT29/FR细胞后,RTN4的mRNA水平均下调(P<0.05)。敲低RTN4后并用5-Fu处理,HCT116和HT29显示出对5-Fu抑制增殖的抵抗(P<0.05)。过表达RTN4后,HCT116/FR和HT29/FR细胞的凋亡水平上升(P<0.05)。5-Fu处理后,HT29/FR和HCT116/FR细胞中miR-448的表达水平上升(P<0.05)。5-Fu处理后并过表达miR-448后,HCT116和HT29细胞的凋亡水平下降(P<0.05)。在HCT116/FR细胞中,过表达miR-448后,RTN4的表达水平下降;敲低miR-448后,RTN4的表达水平上升(P<0.05)。在HT29/FR细胞中,过表达miR-448后,RTN4的表达水平下降;敲低miR-448后,RTN4的表达水平上升(P<0.05)。免疫组织化学分析发现对化疗敏感的结肠癌患者癌组织中RTN4表达水平较高(P<0.05)。结论当结肠癌细胞HCT116和HT29遇到5-Fu后,细胞中miR-448的表达水平上升,miR-448靶向RTN4 mRNA的3端非编码区并降解了RTN4 mRNA,减少了RTN4的蛋白表达,最终提升了结肠癌细胞HCT116和HT29对5-Fu的抗性。

siRNA沉默artemin蛋白对食管癌TE11细胞侵袭能力的影响

目的:通过siRNA干扰技术沉默ARTN基因在人食管癌细胞TE11中的表达,研究其对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:设计并合成3条特异性针对ARTN基因的siRNA,构建了真核表达载体pSilencer2.1-ARTN-siRNA,转染到TE11细胞中,经Real-time PCR和Western blot检测ARTN在mRNA和蛋白水平的表达;通过MTT比色法、细胞划痕实验和Boyden小室侵袭实验观察转染pSilencer2.1-ARTN-siRNA后细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果:转染重组质粒pSilencer2.1-ARTN-siRNA后人食管癌细胞TE11中ARTN的mRNA表达受到抑制,蛋白表达降低;通过体外实验表明,细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力均减弱。结论:siRNA沉默ARTN基因的表达可降低人食管癌细胞TE11的增殖、迁移和侵袭能力,ARTN可能是食管癌的一个生物治疗靶点,有望成为治疗食管癌的新途径。

RTN4-C基因在肝癌组织中的表达及其对SMMC7721细胞生长和凋亡的影响(英文)

RTN4-C属于编码内质网蛋白的基因家族(RTNs)。为研究RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达情况及其对SMMC7721肝癌细胞株的影响,利用RT-PCR检测RTN4-C在肝癌及其癌旁组织中的表达。构建RTN4-C-pcDNA3.1真核表达重组质粒,用脂质体介导转染SMMC7721肝癌细胞,通过G418稳定筛选,建立转染RTN4-C/SMMC7721稳定细胞株。MTT法测定转染前后细胞生长改变、吖啶橙染色检测细胞凋亡改变、免疫细胞化学检测肿瘤相关蛋白p53、Hsp70和c-Fos表达改变。结果表明,RTN4-C/SMMC7721细胞生长减慢,与对照组相比,第2、3、4d细胞生长抑制率分别为33·8%±0·026、56·2%±0·094、34·8%±0·077;凋亡明显增多。突变型p53蛋白从核内转移到细胞质且表达减弱,c-Fos、Hsp70蛋白表达量明显减弱。提示RTN4-C基因在肝癌组织中存在表达差异,促进突变型p53的核转移并减少其表达量、抑制癌基因c-Fos和Hsp70的表达,从而抑制SMMC7721细胞的生长,促进其凋亡。

RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌组织中的表达及其临床病理意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2008~2012年手术切除及活检的甲状腺乳头状癌标本40例和癌旁组织标本20例。采用免疫组织化学方法检测RTN4和TG2的表达,分析二者在甲状腺乳头状癌组织中的表达及与临床病理资料之间的关系。用SPSS 13.0软件对各组免疫组织化学反应的平均吸光度和平均阳性面积率作单因素方差分析和SNK（q）检验（α=0.05）,对甲状腺乳头状癌和癌旁组织RTN4和TG2表达的阳性面积率作双变量相关分析（α=0.05）。结果 1RTN4、TG2在甲状腺乳头状癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达,统计分析显示,甲状腺乳头状癌组织中RTN4、TG2的表达显著高于癌旁组织（P〈0.05）。2RTN4和TG2在有淋巴结转移组中的表达均显著高于无淋巴结转移组,在临床分期Ⅰ和Ⅱ期组阳性率显著高于Ⅲ和Ⅳ期组,在低分化组阳性率显著高于高、中分化组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）;二者在不同肿瘤大小、患者年龄、性别组间的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。3RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈正相关（r=0.587,P〈0.05）。结论 1RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌组织中表达上调,可能与瘤细胞的过度增殖,抗凋亡增强等有关;2RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌的增殖、转移中发挥重要作用;3RTN4和TG2在甲状腺乳头状癌的进展过程中可能发挥着协同作用。

RTN3与细胞凋亡

RTN3是RTN家族的成员之一,因其主要定位于内质网,所以用reticulon来命名.RTN3与RTN4B是RTN家族中目前已知的、唯一一对具有凋亡诱发功能的基因.过表达的RTN3介导了真核细胞的三大凋亡信号转导通路:死亡受体途径、线粒体途径、内质网途径,并使之交联形成凋亡调控网络;RTN3可与RTN4B相互作用,形成同源或异源二聚来调控细胞凋亡.另外,过表达RTN3还参与了细菌的类凋亡作用.RTN3广泛表达于多种组织,其过表达诱发凋亡的机制的总结将让人们更好的了解RTN3及其家族,完善细胞凋亡的信号转导研究.

月球探测器定轨误差分量协方差分析

基于测量量的数学模型,推导环月探测器状态矢量的信息阵,建立定轨误差RTN分量的误差方程和协方差矩阵,给出了测距、测速、时延和时延率的测量误差对定轨误差RTN分量影响的数值关系。根据中国探月工程实际轨道测量数据精度和测站/基线分布情况,计算分析了2种环月轨道位置速度误差RTN分量的影响因素和误差水平。利用嫦娥-1、2月球探测器实际定轨结果,验证了分析方法的有效性。该方法对中国探月工程二期任务动力下降初始定轨误差RTN分量计算具有参考意义。

RTN4和TG2在增生期血管瘤组织中高表达及其临床意义

目的探讨RTN4和TG2在人皮肤血管瘤组织中的表达及其临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2008年-2011年皮肤毛细血管瘤存档蜡块40例,其中男性15例,女性25例。采用免疫组织化学S-P法检测40例皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织RTN4和TG2表达水平,采用图像分析系统对RTN4和TG2的表达进行定量分析,并用SPSS13.0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q)检验。结果增生期组RTN4的表达明显高于退化期组和正常皮肤组,而后两组比较差异无统计学意义;增生期组TG2的表达明显高于退化期组和正常皮肤组,而后两组比较差异无统计学意义。结论 RTN4和TG2在增生期血管瘤组织中的表达明显高于正常皮肤组及退化组,提示RTN4和TG2在增生期血管瘤组织中表达上调,可能与瘤细胞的过度增殖,抗凋亡增强等有关。

市区公路交通网络特性及鲁棒性

为研究市区范围内交通网络是否合理,解决鲁棒性强弱等问题,采用随机攻击策略和蓄意攻击策略分析网络特性和鲁棒性方法,揭示出市区内公路交通网络的拓扑特性和鲁棒性特点,并选取沈阳市为试验区,研究其网络特性和鲁棒性.实验结果表明:沈阳市公路交通网络具有较小的连接任意路段节点之间的平均路径长度,表现出小世界特性和无标度网络特性,路段节点之间连接的紧密程度较大,对随机攻击策略有较强的鲁棒性和对蓄意攻击策略较强的脆弱性(较弱的鲁棒性),符合无标度网络特性.

公路交通网络的区块划分

针对中国综合交通网络的复杂程度存在公路交通网络分布结构不合理的问题,采用一种兼顾结构相似性和属性相似性的聚类区块划分方法,识别空间角度公路交通网络的区块分布情况.利用原始节点映射的方法建立公路交通网络结构的数学模型,通过改进的PageRank算法计算公路交通网络关键性节点的排序,基于排序结果进行区块划分.最后实验分析了沈阳市公路交通网络区块划分的情况,并明确识别出沈阳市公路交通网络区块聚集情况.研究结论有效的识别出公路交通网络共享特性区域,为交通规划和交通决策管理提供参考.

RTN4C裸基因抑制人肝癌细胞生长及转移的体内实验研究

目的 :研究RTN4C裸基因直接注射抗肝癌生长及转移复发作用。方法 :将RTN4C装入逆转录病毒载体 ,扩增提取RTN4C裸基因 ,以LacZ为对照组。将不同裸基因和生理盐水与LCI D2 0裸鼠人肝癌同时皮下接种或待LCI D2 0肝癌成瘤后注射 ,观察对肿瘤成瘤和生长影响。LCI D2 0肿瘤裸鼠皮下接种后 10天 ,分别瘤内注射不同裸基因 ,观察其对肿瘤生长转移影响。LCI D2 0肿瘤肝内接种 ,接种后 2 2天行肝癌切除术 ,术中经切缘或脾内注射不同裸基因 ,观察其对术后转移复发的影响。结果 :不同裸基因与LCI D2 0肝癌同时皮下接种对照组、LacZ组、RTN 4C组 ,肿瘤直径分别为 (1 81± 0 12 )cm ,(1 6 1± 0 2 7)cm、 (0 4 3± 0 0 4 )cm。裸基因肿瘤内注射对照组、LacZ组、RTN4C组 ,瘤径 (cm)分别为 0 91± 0 0 9,0 90± 0 0 6 ,0 2 5± 0 0 4 ;肝癌切除术应用裸基因转移灶累及部位数、切缘复发瘤直径、肝内转移灶数目 ,转移灶累及肝叶数在对照组、LacZ组与RTN4C组间存在显著差异。脾内注射效果优于肝切缘组注射。结论 :RTN4C裸基因注射具有抑制LCI D2

Rtn4-A/B基因敲除小鼠模型的制备

目的通过制备Rtn4-A/B基因敲除小鼠,探索Rtn4-B基因的生物学功能。方法用细菌人工染色体(BAC)载体构建Rtn4-A/B基因打靶载体并使其线性化,通过电转化法将其转入129SvEv品系雄性小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)。将正确同源重组的ES细胞注射入C57BL/6J小鼠囊胚腔,繁育出嵌合体小鼠后,进一步繁殖以获得杂合子小鼠。抽提小鼠尾尖组织DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型。结果基因打靶后,得到14个发生双臂正确同源重组ES细胞克隆。利用阳性ES细胞克隆进行囊胚内显微注射,得到5只嵌合率大于50%的雄鼠,最终繁育得到4只Rtn4-A+/-B+/-杂合子小鼠。结论利用ES细胞基因打靶、同源重组等方法,成功获得Rtn4-A/B基因敲除杂合子小鼠。

肝癌发生中RTN4C基因突变研究(英文)

为研究肝癌发生过程中RTN4C基因突变 ,利用直接序列分析、PCR -SSCP等研究了肝癌(HCC)中RTN4C突变与杂合性缺失 (LOH)。HCC中 ,RTN4CP突变为 6 2 9%,LOH为 6 8 4 %。 90 %LOH的肝癌中RTN4C发生突变。RTN4C突变相关的肝癌发生中LOH起重要作用。

精神分裂症患者外周血中RTN4基因的mRNA表达研究

目的检测精神分裂症患者外周血中髓鞘相关抑制因子（RTN4）基因的信使核糖核酸（mRNA）表达量,研究其与临床症状间的关系。方法对44例精神分裂症患者（患者组）和37例社区正常人群（对照组）的外周肘静脉采血2～3 ml,提取总RNA,制备c DNA,比较两组RTN4基因的mRNA表达水平。对患者组采用阳性和阴性综合征量表（PANSS）进行评分,两两比较阳性症状为主组、阴性症状为主组和混合症状为主组三组RTNA基因的mRNA表达水平。结果患者组与对照组外周血中的RTN4基因表达水平存在统计学差异（P〈0.05）,患者组中阳性症状为主组、阴性症状为主组、混合症状为主组,两两之间RTN4表达水平比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 RTN4基因的mRNA表达量与精神分裂症之间存在着相关性,可为今后进一步了解精神分裂症的发病机制及诊断治疗等方面提供依据。

广西壮族人群RTN4基因多态性及其单倍型与鼻咽癌易感性的关系

目的研究广西壮族人群RTN4基因多态性及其单倍型与鼻咽癌易感性之间的关系。方法运用DNA测序法和单碱基延伸PCR技术,检测广西壮族人群200例确诊为鼻咽癌患者(鼻咽癌组)和200例健康查体者(对照组)的RTN4基因rs2588510和rs1348528位点基因型,并分析RTN4基因的等位基因和单倍型频率。结果 RTN4基因多态性rs2588510和rs1348528位点在对照组和鼻咽癌组中的基因型和等位基因频率分布差异均无统计学意义。而两个位点在对照组和鼻咽癌组中单倍型CG频率分别为27.5%和34.8%,单倍型TA频率分别为0.7%和3.0%,鼻咽癌组单倍型CG和TA频率的分布差异显著高于对照组(P=0.007,OR=2.05,95%CI:1.21~3.46;P=0.001,OR=6.48,95%CI:1.69~24.9)。结论 RTN4基因多态性rs2588510和rs1348528位点的单倍型CG和TA可增加广西壮族人群个体鼻咽癌易感性。

RTN1在肺腺癌中表达及对免疫微环境的影响

背景与目的网状体家族基因1(Reticulon family gene 1,RTN1)是一种与内质网相关的网状体编码基因。RTN1在神经内分泌细胞的膜运输或神经内分泌分泌中起关键作用,同时RTN1可作为有神经内分泌成分的恶性肿瘤的潜在诊断/治疗标志物。然而在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)患者中RTN1的表达情况及其对免疫微环境影响均未有报道。本研究旨在使用公共数据库和生物信息学网络工具研究RTN1在肺腺癌中的表达及其与肺腺癌中免疫浸润和存活的相关性。方法使用Tumor Immune Estimation Resource 2.0(TIMER 2.0)和Gene Expression Profiling Interactive Analysis 2(GEPIA 2)分析肿瘤和正常组织中RTN1 mRNA的表达水平。使用人类蛋白质图谱检查RTN1蛋白质表达。利用GEPIA2在线工具分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中RTN1的临床预后意义。为了进一步确认RTN1的潜在功能,使用基因集富集分析对数据进行了分析。此外,我们对来自肿瘤免疫单细胞中心(Tumor Immune Single-cell Hub,TISCH)数据库的两个数据集在单细胞测序水平上进行降维聚类分析,观察RTN1在不同种类免疫细胞的细胞聚类。使用TIMER在线工具分析预测TCGA队列肺腺癌患者免疫微环境中不同种类免疫细胞浸润丰度;使用TIMER和CIBERSORT研究与RTN1共表达基因和其相关肿瘤浸润免疫细胞之间的关系;最后,使用TIMER分析RTN1与免疫检查点之间的相关性。结果我们发现LUAD患者的RTN1表达降低,且与患者的预后密切相关。RTN1参与吞噬体的形成、造血细胞形成和细胞黏附的过程,对T细胞活化起着重要作用,使用cBioPortal与TCGA数据来分析,发现RTN1与BTK、CD4、ECSF1R、MNDA、NCKAP1L和SNX20显著相关。以上基因高表达可能会引起CD4+T细胞、肥大细胞、单核细胞、髓样树突状细胞和M1型巨噬细胞显著上调。并且,RTN1表达与常见免疫检查点CD274、CTLA4、HAVCR2、LAG3、PDCD1、PDCD1LG2、TIGIT、SIGLEC15密切相关。结论RTN1作为一种肿瘤抑制基因并可能与更好的预后相关。此外,RTN1与可能参与免疫治疗反应的免疫浸润有关。但与其相关的机制需要进一步的研究。

RTN4-C相互作用蛋白的筛选与鉴定

我们的前期工作发现过表达RTN4-C基因能够抑制肝癌细胞株SMMC7721的生长并且促进其发生凋亡.为了进一步了解RTN4-C促进凋亡的机制,本文采用酵母双杂交的方法从小鼠7 d胚胎文库中筛选其相互作用的蛋白.最终筛选到其同源家族成员RTN3.进一步采用间接免疫荧光和及构建的荧光载体表明,RTN4-C和RTN3蛋白在HEK293和Hela细胞中发生共分布.本研究为进一步阐明RTN4-C抑制细胞生长和促进细胞凋亡的机制提供了新的依据.

中国广西人群中RTN4基因遗传多态性的研究

目的:研究RTN4基因rs2920891A/C和rs17046647A/G位点多态性在广西人群中的分布特征,比较不同人群的分布差异。方法:本实验采用多重单碱基延伸PCR(SNa Pshot)和DNA测序方法,对323例广西健康体检者RTN4基因的rs2920891A/C和rs17046647A/G位点基因型进行检测,并与国际人类基因组单体型图计划(Hap Map)公布的不同人群(北京、日本、欧洲及非洲人群)RTN4基因多态性数据进行比较。结果:在广西人群中,RTN4基因rs2920891A/C位点存在AA、AC、CC基因型及A、C等位基因,其等位基因频率在男女间的分布差异有统计学意义(P<0.05),基因型及等位基因频率与日本、欧洲及非洲人群比较差异均有统计学意义(P<0.05);rs17046647A/G位点存在AA、AG、GG基因型和A、G等位基因,基因型及等位基因频率在男女间比较差异无统计学意义(P>0.05),而与日本、欧洲及非洲人群比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:中国广西人群中RTN4基因的rs2920891A/C和rs17046647A/G位点多态性与其他种族间存在差异性。

基于RTN的藏文句法分析器研究与实现

句法分析是藏文信息处理的一个基础环节,也是智能化藏文信息处理的关键所在。递归转移网络是在有限状态转移网络的基础上发展而来的,也称之为RTN算法,与有限状态转移网络不同。文章利用递归转移网络算法来分析藏文语法规则是否合法,为藏文句法分析后期提供了较好的研究思路及探索价值。