定量竞争性RT-PCR检测耐受山梨酸钾的大肠杆菌菌株中acrA-mRNA表达水平

采用含有亚抑菌浓度(1/2×MIC)山梨酸钾的LB琼脂平板连续传代的方法,对大肠杆菌(Escherichia coli)进行诱导,获得具有一定耐受性的大肠杆菌菌株;通过定量竞争性RT-PCR检测诱导后的各个菌株与未经诱导的各个菌株的acrA-mRNA的表达水平。结果表明,各个菌株经过含有亚抑菌浓度山梨酸钾的LB琼脂连续培养10代后获得的诱导菌株,与普通LB琼脂平板连续培养10代后获得的菌株相比可以耐受更高浓度的山梨酸钾,并且acrA-mRNA表达水平在诱导后的各个菌株中比未经诱导的各个菌株均有一定程度的提高。说明大肠杆菌主动外排系统AcrAB-TolC中acrA基因的表达水平提高可能与大肠杆菌对山梨酸钾的耐受程度增加有一定相关性。

定量分析铜绿假单胞菌第一类整合酶基因的表达

目的整合子是具有整合和表达外来耐药性基因盒能力的基因元件,在细菌耐药性基因的积累和传递中起重要作用。本研究通过定量分析第一类整合子整合酶基因(intI1)在细菌不同生存状态的表达水平,探讨整合子的作用机制。方法培养和提取两株第一类整合子阳性铜绿假单胞菌的液相培养菌、生物被膜菌、被膜脱落菌等三种生长状态的总RNA,采用竞争RTP-CR方法定量检测菌体在以上三种状态下intI1m RNA的表达水平。结果铜绿假单胞菌的液相培养菌、生物被膜菌和被膜脱落菌都有intI1m RNA表达;两株菌在三种状态下intI1m RNA的表达量不同,其中生物被膜菌表达最高,被膜脱落菌次之,液相培养菌最低;生物被膜菌intI1m RNA的量较液相培养物高约15倍,较被膜脱落菌高约4倍。结论铜绿假单胞菌intI1在生物被膜中m RNA表达上调,随着菌体从被膜脱落以及菌体持续的液相培养intI1表达下调。提示整合子在生物被膜菌中可进行活跃的基因盒的捕获、移动和积累,有利于细菌耐药性的提高及扩散。

人类外周血hPer1基因节律性表达的研究

目的生物节律广泛存在于人类生活和工作中,为研究正常人节律基因表达特点,定量检测正常年轻人外周血中节律基因Per1(humanPeriod1,hPer1)的表达。方法实验对象为7名大学生(H1-H7),年龄24￣30岁,男性3名,女性4名。其中H7于实验前1天晚上值夜班。分别在09:00,15:00,21:00,03:00,09:00点抽取肘静脉血6mL,抽提全血总RNA。应用竞争性RT-PCR方法定量检测实验对象外周血中每人每个时间点hPer1基因的表达。结果人类外周血中hPer1基因的表达有显著节律性。表达高峰在09:00而低峰在21:00,两者之间的差异达2.29±0.9倍(P<0.01),第2天09:00hPer1基因表达水平又回到最高峰。结论hPer1基因的表达在外周血中存在节律性。

中药复方制剂连黄对沙门氏菌耐药基因aph(3′)-Ⅱa mRNA表达水平的影响

通过研究中药复方制剂连黄对沙门氏菌耐药基因aph(3)′-Ⅱa的mRNA表达水平的影响,从而深入探讨连黄降低沙门氏菌对氨基糖苷类药物的耐药性作用机理。采用竞争性RT-PCR法定量分析了连黄作用前后的沙门氏菌耐药基因aph(3)′-Ⅱa的mRNA表达水平。结果表明,连黄作用后的沙门氏菌耐药基因aph(3)′-Ⅱa的mRNA表达量降低,进而降低了沙门氏菌对氨基糖苷类药物的耐药性。