胃肠安颗粒剂与汤剂抑制人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用比较及对RUFY3,SNAI1,VEGF和EMT蛋白的影响

目的:观察胃肠安颗粒与汤剂对MKN45人胃癌裸鼠皮下移植瘤皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用及对RUN和FYVE结构域蛋白3(RUFY3),锌指转录因子1(SNAI1),血管内皮生长因子(VEGF)和上皮细胞间质转化(EMT)蛋白的影响。方法:建立人胃癌MKN45细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白(生理盐水0. 5 m L/只)组,胃肠安颗粒(胃肠安颗粒3. 54 g·kg-1)组,胃肠安煎剂(生药35. 49 g·kg-1)组。观察各组裸鼠皮下移植瘤瘤重、腋窝淋巴结的体积,苏木素-伊红(HE)染色检测各组淋巴结的形态,免疫组化检测包括RUFY3,SNAI1,VEGF,E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin)相关蛋白表达。结果:与空白组比较,胃肠安颗粒组和胃肠安煎剂组皮下移植瘤瘤重显著降低(P <0. 01),腋窝淋巴结体积显著减小(P <0. 01); HE染色显示淋巴结中均可见转移的肿瘤细胞;裸鼠胃癌组织RUFY3,SNAI1,VEGF,N-cadherin,Vimentin蛋白表达显著降低(P <0. 01),E-cadherin蛋白表达显著增加(P <0. 01)。结论:胃肠安颗粒与胃肠安煎剂在抑制人胃癌皮下移植瘤生长和淋巴结转移方面具有相同疗效,可在一定程度上代替汤剂使用;胃肠安颗粒和胃肠安煎剂均能降低裸鼠皮下移植瘤中RUFY3,SNAI1,VEGF,N-cadherin,Vimentin蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,提示胃肠安可能通过调节RUFY3,SNAI1,VEGF,EMT相关蛋白的表达而起到抑制肿瘤转移的作用。

胃肠安对人胃癌细胞侵袭转移及RUFY3、MAPKs通路的影响

目的探讨胃肠安抑制胃癌侵袭转移的作用及可能作用机制。方法采取细胞增殖实验筛选胃肠安进行实验的药物浓度。实验分为空白组,胃肠安高、低剂量组,5-氟尿嘧啶(5-FU)组。细胞培养24 h后胃肠安高、低剂量组用拟筛选浓度的胃肠安100μl进行干预,5-FU组加入32 mg/L 5-FU注射液100μl,空白组给予无血清培养基100μl。采用CCK8法检测细胞增殖的变化,划痕实验和Transwell侵袭实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力;采用免疫印迹法检测RUN和FYVE结构域蛋白3 (RUFY3)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、促分裂原活化蛋白激酶(MEK)、磷酸化促分裂原活化蛋白激酶(p-MEK)、Twist1、E-钙粘蛋白、波形蛋白、N-钙粘蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2 (MMP2)、基质金属蛋白酶9 (MMP9)蛋白表达水平。结果筛选出500 mg/L和1000 mg/L浓度的胃肠安为胃肠安低、高剂量组给药量。给药48 h时胃肠安高、低剂量组和5-FU组细胞迁移率均明显低于空白组(P <0. 01)。胃肠安高剂量组、5-FU组穿膜细胞数显著低于空白组和胃肠安低剂量组(P <0. 01)。胃肠安高、低剂量组侵袭抑制率分别为54. 11%、7. 65%,5-FU组侵袭抑制率为47. 88%。与空白组比较,胃肠安低剂量组p-ERK、Twist1蛋白表达降低,E-钙粘蛋白表达增加(P <0. 05);胃肠安高剂量组RUFY3、p-ERK、p-MEK、Twist1、N-钙粘蛋白及波形蛋白表达降低,E-钙粘蛋白表达增加(P <0. 05)。与胃肠安低剂量组比较,胃肠安高剂量组RUFY3、p-MEK、N-钙粘蛋白表达降低更明显(P <0. 05)。结论胃肠安可抑制胃癌的侵袭转移,并且以1000 mg/L浓度效果最好,其机制可能是通过调控RUFY3、MAPKs通路来调节侵袭转移相关蛋白和抑制胃癌细胞上皮-间充质转化。

胃肠安颗粒通过RUFY3抑制人胃癌MKN45细胞侵袭转移

目的:研究健脾复方胃肠安颗粒抑制人胃癌MKN45细胞侵袭转移的分子机制。方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测不同质量浓度的胃肠安颗粒(600,900,1 200,1 500 mg·L^(-1))与人胃癌MKN45细胞共孵育24,48,72 h,对细胞增殖活力的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RUN和FYVE结构域蛋3(RUFY3)在人正常胃黏膜细胞和不同胃癌细胞系中的表达;Western blot检测不同质量浓度的胃肠安颗粒干预(600,900,1 200 mg·L^(-1))对人胃癌MKN45细胞中RUFY3蛋白表达的影响;利用慢病毒转染技术,构建稳定沉默RUFY3的人胃癌细胞MKN45细胞;采用Transwell迁移和侵袭实验,检测胃肠安颗粒和沉默RUFY3干预后人胃癌MKN45细胞迁移和侵袭能力的变化;采用Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin),N-钙黏蛋白(N-cadherin),波形蛋白(Vimentin),锌指转录因子(SNAIL1,SNAIL2)的表达。结果:与正常胃黏膜组比较,RUFY3在人胃癌细胞中表达明显升高(P<0.05)。与慢病毒阴性组比较,沉默RUFY3组MKN45细胞中RUFY3的蛋白表达显著降低(P<0.01);胃肠安颗粒可抑制人胃癌MKN45细胞中RUFY3的表达(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖。与空白组比较,胃肠安组和沉默RUFY3均能抑制人胃癌MKN45细胞的侵袭和转移能力(P<0.01)。与空白组比较,胃肠安颗粒干预和沉默RUFY3后,人胃癌MKN45细胞中上皮标志基因E-cadherin蛋白表达显著增加(P<0.01),间质标志基因N-cadherin,Vimentin蛋白表达降低,但差异无统计学意义;锌指转录因子SNAIL1,SNAIL2的蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:健脾复方胃肠安颗粒可能通过RUFY3调控EMT抑制人胃癌MKN45细胞的侵袭和转移。