早期胃癌中Runx-3及β-catenin蛋白的表达及临床意义

目的探讨Runx-3及β-catenin蛋白在早期胃癌组织中的表达及两者表达与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化En Vision两步法分别检测Runx-3和β-catenin蛋白在30例正常胃黏膜和49例早期胃癌组织中的表达。结果 Runx-3蛋白在正常胃黏膜中的阳性率(86.67%)明显高于早期胃癌组织(34.69%)(P<0.05);β-catenin蛋白在正常胃黏膜细胞膜中的阳性率(100%)显著高于早期胃癌组织(57.14%)(P<0.05),但其异位表达率(0)显著低于早期胃癌组织(75.51%)(P<0.05)。早期胃癌组织中Runx-3及β-catenin蛋白表达与患者性别、年龄、肿块大小等均无关(P>0.05),但有脉管侵犯的早期胃癌组织中Runx-3蛋白细胞核阳性率显著高于无脉管侵犯者(P<0.05);有脉管侵犯的早期胃癌组织中β-catenin蛋白细胞膜表达缺失率显著高于无脉管侵犯者(P<0.05)。结论 Runx-3蛋白在早期胃癌组织中的表达明显减少,提示其可能作为胃癌早期诊断的参考指标;β-catenin蛋白在早期胃癌组织中膜表达缺失而存在核/质异位表达,在脉管侵犯的早期胃癌组织中β-catenin蛋白膜表达缺失,而Runx-3蛋白细胞核阳性表达增加,提示两者与早期胃癌的脉管侵犯相关;联合检测Runx-3蛋白及β-catenin蛋白有助于早期胃癌的诊断。

胃癌组织中RUNX3蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性分析

目的探讨胃癌组织中RUNX家族转录因子3(RUNX family transcription factor 3,RUNX3)蛋白表达及其与幽门螺杆菌(HP)感染的相关性。方法收集2020年1月至2023年1月在浙江省乐清市人民医院接受治疗的90例胃癌患者(胃癌组)、80例胃癌癌前病变患者(癌前病变组)、100例慢性浅表性胃炎患者(慢性浅表性胃炎组)的病灶组织,采用免疫组化检测RUNX3蛋白表达情况,免疫印迹法检测RUNX3蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RUNX3 mRNA相对表达量,快速尿素酶试验和改良Ciemsa法检测HP感染情况。结果与慢性浅表性胃炎组比较,癌前病变组的RUNX3蛋白表达阳性率(41.25%比64.00%)、RUNX3蛋白相对表达量[(0.54±0.06)比(1.12±0.12)]、RUNX3 mRNA相对表达量[(1.64±0.14)比(2.35±0.24)]明显降低(P<0.01)。与癌前病变组比较,胃癌组的RUNX3蛋白表达阳性率(16.67%比41.25%)、RUNX3蛋白相对表达量[(0.21±0.04)比(0.54±0.06)]、RUNX3 mRNA相对表达量[(1.00±0.02)比(1.64±0.14)]明显降低(P<0.01)。与HP阴性的病灶组织比较,胃癌组(12.68%比31.58%)、癌前病变组(26.47%比52.17%)及慢性浅表性胃炎组(40.91%比70.51%)HP阳性的病灶组织RUNX3蛋白阳性表达率均明显降低(P<0.01)。胃癌组织(r=-0.683)、癌前病变组织(r=-0.582)及慢性浅表性胃炎组织(r=-0.701)的RUNX3蛋白相对表达量均与HP阳性率呈负相关(P<0.01)。结论HP可能通过下调RUNX3蛋白表达参与胃癌的发生发展。

肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞及RUNX-3基因的影响

目的:观察肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞增殖作用的影响,探讨肼苯哒嗪对大肠癌Lovo细胞中抑癌基因RUNX-3的转录调节作用及其对细胞生长和凋亡的影响。方法:应用不同浓度(0,10,20,40,80,160μmol/L)的肼苯哒嗪,于不同作用时间(24,48,72,96h)处理人大肠癌Lovo细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肼苯哒嗪作用下Lovo细胞的生存率,倒置显微镜观察细胞的形态学变化;采用RT-PCR法检测肼苯哒嗪对RUNX-3 mRNA表达的影响。结果:①不同药物浓度组在同一作用时间下,细胞生存率差异有统计学意义(P<0.05);同一药物浓度不同作用时间组之间(24-96h)的细胞生存率无统计学意义(P>0.05);②RUNX-3 mRNA在大肠癌Lovo细胞中的表达随浓度的增加而增强。结论:肼苯哒嗪有抑制人大肠癌Lovo细胞生长的作用,抑制作用呈浓度依赖性;可以促进RUNX-3 mRNA的表达,从而促进大肠癌Lovo细胞的凋亡。

RUNX3基因在脑胶质瘤中的表达和启动子区甲基化的研究

目的研究脑胶质瘤中RUNX3基因的表达以及启动子区CpG岛甲基化情况以及两者的关系。方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测35例脑胶质瘤组织和4例正常脑组织中RUNX3基因的mRNA相对表达水平;用甲基化特异性PCR(MSP)方法研究相应标本中的RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果RUNX3在脑胶质瘤中的表达与肿瘤的级别相关,但与肿瘤的病理类型、患者年龄、性别等因素无关。MSP显示35例脑胶质瘤标本中有15例(42.8%)发生甲基化,发生甲基化的脑胶质瘤中mRNA表达水平较未甲基化的脑胶质瘤明显下降。结论RUNX3在脑胶质瘤中表达与肿瘤的恶性程度相关,并且RUNX3启动子区CpG岛高甲基化与RUNX3表达下调相关。推测RUNX3启动子区CpG岛高甲基化是导致RUNX3基因在脑胶质瘤中表达下调的重要因素。

Zebularine联合丁酸钠对结肠癌LOVO细胞及Runx3、P21的影响

目的探讨Zebularine[1-(β-D-呋喃核糖苷)-1,2-二氢嘧啶-2-酮]和丁酸钠(sodium butyrate)对人结肠癌LOVO细胞Runx3及P21的影响。方法人结肠癌细胞系LOVO按常规培养于含100g/L胎牛血清的PRMI 1640培养液中,分为4组:对照组、Zebularine组、丁酸钠组以及联合用药组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞处理24、48、72h后的细胞抑制率,Annexin V-FITC∕PI双染法检测细胞凋亡,RT-PCR检测Runx3 mRNA、P21mRNA的表达。结果单独应用Zebularine及丁酸钠72h后,细胞生长抑制率及凋亡率与对照组相比增高,联合用药较单独用药抑制率及凋亡率明显增高(P<0.05),生长抑制率呈时间及浓度依赖性,单独用药组Runx3、P21mRNA的表达相对增加,联合用药组其表达明显增加,与单用药组相比,差异有统计学意义(P<0.05);结论与单用Zebularine及丁酸钠相比,联合用药更显著增加Runx3 mRNA、P21 mRNA的表达,抑制细胞增殖及促进凋亡。

大肠癌组织Runx3基因启动子甲基化的研究

目的:检测大肠癌患者肿瘤组织及其相应的癌旁组织中Runx3基因表达和启动子区域甲基化状态,探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对结肠癌细胞系中Runx3表达的作用。方法:将手术切除的37例大肠癌组织和对应癌旁组织提取RNA和基因组DNA,采用RT-PCR检测Runx3基因的表达,甲基化特异PCR方法(MSP)检测Runx3基因启动子区域甲基化状态,用5-aza-dC处理结肠癌细胞系后,RT-PCR方法检测Runx3基因的表达。结果:37例大肠癌和对应癌旁组织中Runx3基因表达阳性率分别为100%(37/37),2.7%(1/37)。癌组织中Runx3基因表达明显降低(P<0.01)。MSP检测发现11例(30%)大肠癌标本及1例(3%)癌旁正常组织中Runx3基因呈甲基化状态。癌组织中Runx3基因甲基化明显高于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌细胞系HT29 5-aza-dC处理后Runx3基因表达水平增加。结论:Runx3基因启动子甲基化和Runx3基因表达在大肠癌的癌旁组织和原发癌灶间存在显著性差异,可能与结肠癌的发生发展有关。

子宫内膜癌组织Runx3、Twist1表达与临床病理特点及预后的关系

目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中RUNX家族转录因子3(Runx3)、Twist家族碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)表达与临床病理参数和预后的关系。方法选择80例EC患者,通过荧光定量PCR法检测子宫内膜癌组织及癌旁组织中Runx3、Twist1表达,比较两种组织Runx3、Twist1表达量,并对Runx3、Twist1表达与子宫内膜癌患者临床病理学特征之间的关系进行分析,采用Kaplan-Meier法分析不同Runx3、Twist1表达与患者预后生存的关系。结果与癌旁组织相比,EC组织中Runx3表达降低,Twist1表达增高(P均<0.05)。EC组织中Runx3和Twist1表达呈负相关(r=-0.611,P<0.05)。EC组织中Runx3、Twist1表达与肿瘤临床分期、肿瘤分化程度有关(P均<0.05),而与年龄、病理类型、肿瘤大小、肌层浸润深度及淋巴结转移无关(P均>0.05)。低Runx3表达组3年生存率低于高Runx3表达组,高Twist1表达组3年生存率低于低Twist1表达组(P均<0.05)。结论EC中Runx3表达下调,Twist1表达上调,两者表达与肿瘤分期、肿瘤分化程度及预后有关。

膀胱癌组织RUNX3基因的甲基化改变

目的:通过检测膀胱癌组织中runt相关转录因子3(human runt-related transcription factor 3,RUNX 3)基因的甲基化状态,探讨RUNX3在膀胱癌发生、发展过程中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测33例手术切除的膀胱癌组织和其中8例相应癌旁组织标本、3例非肿瘤患者正常膀胱组织中RUNX3基因的甲基化情况。结果:33例膀胱癌组织中发现异常甲基化21例(63.7%),8例相应癌旁组织中发现甲基化1例(12.5%),2者差异有统计学意义(P<0.05)。3例非肿瘤患者正常膀胱组织未发现该基因异常甲基化。结论:膀胱癌组织中RUNX 3基因启动子高度甲基化,表明该基因异常甲基化与膀胱肿瘤发生相关。

青蒿琥酯对胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外培养HGC27细胞,采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Western blot法检RUNX-3蛋白表达情况.结果 青蒿琥酯（浓度10～100 mg/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态.青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,而对照组凋亡率仅为2.2％;处理后Casepase-3相对活性分别为（0.19±0.02）、（0.25±0.04）和（0.31±0.03）,对照组为（0.11±0.02）,Casepase-9相对活性分别为（0.18±0.02）、（0.23±0.03）和（0.30±0.04）,对照组为（0.10±0.02）,与对照组比较,青蒿琥酯处理组Casepase-3、Caspase-9相对活性显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;RUNX-3蛋白表达上调,呈剂量依赖性.结论 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3、Caspase-9活性、上调RUNX-3蛋白的表达有关.青蒿琥酯是一种前景广阔的抗肿瘤药物.

丹皮酚对结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察丹皮酚对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制。方法用不同浓度丹皮酚处理体外培养的LoVo细胞24、48、72、96 h,CCK-8比色法测定其对结肠癌LoVo细胞的活力的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;根据CCK-8结果分为丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)和对照组,处理48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化;RT-PCR和Western blot法检测RUNX3基因表达情况。结果丹皮酚能显著降低LoVo细胞存活率,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;丹皮酚组(浓度31.25、62.50、125 mg/L)处理细胞48 h后,凋亡率分别为(12.3±1.3)%、(22.4±1.5)%、(36.2±2.1)%,与对照组[凋亡率(2.3±0.9)%]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚组处理48 h后,细胞钙离子荧光强度分别为(41.36±4.62),(57.51±3.83)和(69.43±3.76),与对照组[荧光强度(24.45±3.74)]比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚能上调RUNX3基因的表达,呈剂量依赖性。结论丹皮酚能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞内Ca2+含量和上调RUNX3基因的表达有关。

阿司匹林对大肠癌LoVo细胞生长和增殖的影响及其机制

目的观察阿司匹林对人结肠癌细胞系Lo Vo细胞增殖的影响,探讨可能的作用机制。方法用不同浓度阿司匹林处理体外培养的Lo Vo细胞24、48和72 h,MTT法测定其对结肠癌Lo Vo细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;阿司匹林（浓度分别为1、4和8 mmol/L）分别处理Lo Vo细胞48 h,行流式细胞仪检测细胞凋亡;分光光度计检测Casepase-3相对活性;RT-PCR、Western blot检测人类相关转录因子3（RUNX3）基因表达情况。结果阿司匹林（浓度1~8 mmol/L）能显著抑制Lo Vo细胞增殖,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;阿司匹林处理Lo Vo细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.4%、32.4%和35.4%,对照组凋亡率为3.3%;阿司匹林处理细胞48 h后,Casepase-3相对活性显著增加;阿司匹林能上调RUNX3的表达,呈剂量依赖性。结论阿司匹林均能抑制Lo Vo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性及上调RUNX3基因的表达有关。

Th-POK及其相关因子在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中Th-POK、CD4、CD8、Th-POK相关因子RUNX3和颗粒酶B(GZMB)的表达及临床意义。方法收集2011年3月至2014年10月100例胃癌手术组织及配对癌旁组织标本。采用免疫组化PV-6000二步法检测胃癌及癌旁组织中Th-POK、CD4、CD8、RUNX-3和GZMB蛋白的表达情况。分析Th-POK及其相关因子与胃癌临床病理特征的关系。结果 Th-POK和CD4在胃癌组织中的阳性表达率均高于癌旁组织(80%vs.67%,P<0.05;77%vs.60%,P<0.05),CD8和RUNX-3在癌旁组织中阳性表达率显著高于胃癌组织(80%vs.60%,P<0.01;86%vs.59%,P<0.01)。GZMB在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织,但差异无统计学意义(70%vs.61%,P>0.05)。Th-POK和RUNX3表达均与TNM分期有关(P<0.05),与年龄、性别、部位、分化程度及淋巴结转移无关(P>0.05)。Th-POK表达与CD4表达呈正相关(r=0.200,P<0.05),与RUNX3表达呈负相关(r=-0.373,P<0.001),与CD8及GZMB表达均无关(P>0.05)。结论胃癌组织Th-POK表达增强,其可能通过抑制RUNX3表达、减少CD8表达、促进CD4表达,从而促进胃癌的免疫逃逸。

丹皮酚和阿司匹林对人结肠癌LoVo细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨丹皮酚和阿司匹林和阿司匹林对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖的影响及可能作用机制。方法:用不同浓度丹皮酚(15.63-250mg/L)和阿司匹林(98.08-1 801.6mg/L)处理体外培养的LoVo细胞24,48,72,96h,CKK-8比色法测定其对结肠癌LoVo细胞的活力的影响;根据CKK-8结果分为丹皮酚组(浓度31.25,62.50,125mg/L)和阿司匹林组(浓度分别为180.16,900.80,1 801.6mg/L),进一步处理48h后行流式细胞仪检测细胞凋亡、激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+浓度的变化及RT-PCR法检测RUNX3基因表达情况。结果:丹皮酚(浓度15.63-250mg/L)和阿司匹林(浓度90.08-1 801.6mg/L)均能能显著降低LoVo细胞存活率,呈剂量、时间依赖性;丹皮酚组处理细胞48h后可诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率分别为13.5%,21.4%,34.6%,明显高于对照组;阿司匹林组细胞凋亡率分别为14.8%,25.8%,37.7%,明显高于对照组;丹皮酚组荧光强度分别为41.36±4.62,57.51±3.83和69.43±3.76;阿司匹林组荧光强度分别为38.24±4.62,53.31±4.92和65.64±5.25,丹皮酚组、阿司匹林组与对照组(荧光强度24.45±3.74)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);丹皮酚和阿司匹林均能上调RUNX3mRNA的表达,呈剂量依赖性。结论:丹皮酚、阿司匹林均能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞内Ca2+含量和上调RUNX3基因的表达有关。丹皮酚与阿司匹林可能具有相似抗大肠癌细胞作用机制。