结直肠癌和管状腺瘤中Runx3基因启动子甲基化状态的分析

目的探讨结直肠癌及管状腺瘤中Runx3基因甲基化状态和Runx3蛋白表达,确定Runx3基因在"腺瘤→腺癌"癌变通路中的作用、临床意义及Runx3基因在不同年龄层段的甲基化程度。方法应用TaqMan探针qPCR(MethyLight)法分别检测40例管状腺瘤组织、50例结直肠癌组织和20例正常组织中Runx3基因CpG岛甲基化状态,并通过测序法验证扩增序列,同时应用免疫组化法分别检测上述标本中Runx3蛋白表达。结果结直肠癌组、管状腺瘤组、正常组中Runx3基因启动子甲基化率分别为84%、45%、10%,差异有统计学意义(P<0.05);结直肠癌组、管状腺瘤组、正常组中Runx3蛋白阳性率分别为18%、45%、80%,差异有统计学意义(P<0.05);Runx3基因甲基化与蛋白表达在正常组、管状腺瘤组及结直肠癌组中均呈负相关(相关系数r值分别为-0.667、-0.616、-0.790,P均<0.05);管状腺瘤组和结直肠癌组中Runx3基因启动子甲基化频率与患者年龄呈正相关(相关系数r值分别为0.376、0.304,P均<0.05)。结论 Runx3基因甲基化可能诱导其蛋白表达下调,在结直肠"腺瘤→腺癌"的癌变通路中起重要作用,同时Runx3基因甲基化可能与患者年龄相关,随年龄增长,甲基化程度增高。

肝细胞癌中Runx3基因启动子区甲基化研究

目的通过检测肝细胞癌中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况,探讨Runx3基因启动子区域异常甲基化状态在肝细胞癌发生和发展过程中的意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术分别对5种肝癌细胞系和52例肝细胞癌患者肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3种肝癌细胞系Runx3 mRNA在使用药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)前后的表达情况。结果在肝细胞癌组织中,Runx3基因启动子区域甲基化率占42.3%(22/52),而在相对应的癌旁正常组织中,Runx3基因启动子区域未发现高甲基化现象;Runx3基因启动子区域甲基化状态与患者临床病理参数均无相关关系;在5种肝癌细胞系中,有3种细胞Runx3基因启动子区域存在甲基化异常;用药物5-Aza-CdR处理后的3种肝癌细胞中Runx3 mRNA表达明显增强。结论Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与肝细胞癌发生早期密切相关,可作为肝细胞癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。

血浆Runx3基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌的临床价值

目的探讨血浆Runt相关转录因子3(Runx3)基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌(HCC)的临床价值。方法采用DNA甲基化特异性PCR方法,检测81例HCC患者的癌组织、癌旁正常组织及血浆Runx3基因启动子异常甲基化情况。结果癌旁正常组织未发现Runx3异常甲基化现象;癌组织Runx3异常甲基化率43.2%(35/81),血浆39.5%(32/81);血浆Runx3甲基化改变与癌组织甲基化改变显著相关(P<0.05)。Runx3基因异常甲基化与HCC患者的临床病理参数无显著相关性(P>0.05)。结论血浆Runx3基因启动子甲基化检测对早期诊断HCC有一定参考价值。

RUNX3基因启动子甲基化与早期非小细胞肺癌的预后

目的:探讨RUNX3基因启动子甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)预后的关系。方法:酚/氯仿法提取80例术后接受顺铂辅助化疗NSCLC患者的肺癌组织标本DNA,巢氏甲基化特异性PCR(nMSP)检测RUNX3启动子甲基化状态,并回顾性分析甲基化状态与临床病理特征、术后无病生存、总生存的关系。结果:80例NSCLC肿瘤样本中20例检测到RUNX3基因启动子甲基化(25.0%)。RUNX3启动子基因甲基化与病理类型相关(P=0.020),且腺癌(36%)高于鳞癌(11%)。N分期(OR:4.898,P<0.001)、RUNX3基因启动子甲基化(OR:20.293,P=0.011)是影响术后无病生存的独立危险因素。单因素K-M生存分析、Cox多因素分析表明RUNX3基因甲基化(RR:2.345,95%CI:1.130～4.865,P=0.022)是影响总生存的独立危险因素。结论:RUNX3基因甲基化是影响术后NSCLC无病生存和总生存的独立影响因素。

宫颈鳞癌RUNX3基因启动子区甲基化及其临床意义

目的研究宫颈鳞状细胞癌(鳞癌)组织中RUNX3基因启动子甲基化状态及临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)测定50例宫颈鳞癌(CSCC组)、50例宫颈上皮内瘤变(CIN组)手术标本及10例正常宫颈组织(对照组)中RUNX3基因的甲基化状态,分析RUNX3基因甲基化与宫颈鳞癌临床病理学特征的关系。结果 CSCC组和CIN组中分别有27例(54%)和17例(34%)存在RUNX3基因启动子甲基化,而对照组未检出;三组间RUNX3基因启动子甲基化的发生率比较差异有统计学意义(χ2=11.500,P<0.005),CIN不同级别组(CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级)的RUNX3基因启动子甲基化发生率比较差异有统计学意义(χ2=9.655,P<0.05)。RUNX3基因启动子甲基化与宫颈鳞癌的分化程度及是否发生淋巴结转移有关(r=-0.367,P=0.017;r=0.288,P=0.042)。结论 RUNX3作为抑癌基因参与宫颈鳞癌的发生和发展,可作为对宫颈鳞癌患者进行预后评估的生物学指标。

RUNX3基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征及预后因素的关系

目的探讨乳腺癌中抑癌基因RUNX3启动子甲基化状态与散发性乳腺浸润性导管癌临床病理特征及预后因素的关系。方法运用甲基化特异性PCR(MSP)检测40例乳腺浸润性导管癌和15例乳腺增生病标本中RUNX3基因启动子甲基化状态,同时采用免疫组化SP法检测40例乳腺浸润性导管癌标本中ER、PR、C-erbB-2的表达水平。结果乳腺浸润性导管癌组织中RUNX3基因启动子甲基化频率为47.5%,乳腺增生病组织中均未发生甲基化;RUNX3基因启动子甲基化与患者的年龄、淋巴结转移、PR、C-erbB-2阳性表达无相关性,与患者的病理组织学分级、临床分期、ER的阳性表达有相关性,差异有统计学意义。结论RUNX3基因甲基化在散发性乳腺浸润性导管癌恶性进展中有一定作用,有可能成为乳腺癌预后不良的分子检测指标。

5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及RUNX3基因启动子区甲基化状态的影响

目的:探讨5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖及其抑癌基因RUNX3启动子区甲基化状态的影响。方法:应用MTT法观察5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞增殖的抑制能力;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测5-氮-2'脱氧胞苷干预前后RUNX3基因启动子区的甲基化状况;应用RT-PCR检测干预前后RUNX3基因的mRNA表达水平的变化。结果:经5-氮-2'脱氧胞苷处理后,RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生部分去甲基化,5-氮-2'脱氧胞苷处理前启动子高甲基化的RUNX3 mRNA未见表达,而在其处理后该基因可见重新表达,经5-氮-2'脱氧胞苷处理后,Reh细胞生长缓慢。结论:5-氮-2'脱氧胞苷能使Reh细胞RUNX3基因启动子区发生部分去甲基化,从而调控RUNX3基因表达并能抑制其细胞生长。启动子区异常甲基化是白血病Reh细胞RUNX3基因失活的主要原因之一。

人乳腺癌细胞系RUNX3基因启动子甲基化状态研究

目的:探讨人乳腺癌细胞系中抑癌基因RUNX3启动子甲基化状态,并分析其与RUNX3基因表达的相关性。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测5种乳腺癌细胞系和一种人类正常乳腺细胞系中RUNX3启动子甲基化状态,运用RT-PCR和Western印迹检测这些细胞系中RUNX3基因mRNA和蛋白的表达。结果:在6种细胞系中,有两种(T47D、MCF7)呈高甲基化状态,并且这两种细胞系的RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。SKBR3中没有检测出RUNX3启动子区的甲基化,但RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。结论:乳腺癌细胞系中RUNX3基因由于启动子区甲基化而失活,但尚有其它失活机制存在,需进一步研究探讨。

Runx3基因启动子区甲基化与胃癌的关系

目的通过检测胃癌Runx3基因启动子区域甲基化状态,来探讨Runx3基因启动子区域甲基化在胃癌发生和发展过程中的临床意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR(MSP)技术对37例胃癌患者手术切除肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测。结果Runx3基因在37例胃癌及其癌旁组织中甲基化率分别为40.5%(15/37)和8%(3/37)。结论Runx3基因启动子区甲基化可能是肿瘤特异性的(P<0.05),可作为胃癌早期诊断的分子标记物。

Runx3基因启动子甲基化检测对乳腺癌患者早期诊断的临床意义

目的探讨血浆Runx3基因启动子甲基化检测对诊断早期乳腺癌的临床意义。方法2009年10月-2010年10月收集经病理确诊的乳腺癌患者60例，采用DNA甲基化特异性PCR方法检测60例乳腺癌患者的癌组织、癌旁正常组织及血浆中Runx3基因启动子异常甲基化情况。GraphPad Prism4统计软件对乳腺癌组织和血浆中Runx3基因甲基化行χ^2检验分析。结果癌旁正常组织中Runx3异常甲基化为6．67％，癌组织中Runx3异常甲基化率为58．33％，血浆中为78．33％，血浆中甲基化改变与癌组织甲基化改变具有显著相关性。Runx3基因甲基化与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小无相关性（χ^2分别为0．951，0．287，P〉0．05），而与患者临床分期和淋巴结转移密切相关（χ^2=5．188，P=0．023），其中癌组织中Ⅰ期＋Ⅱ期患者甲基化率与Ⅲ期＋Ⅳ期患者甲基化率比较差异显著（χ^2=8．625，P=0．003）。结论血浆Runx3基因启动子甲基化检测对早期诊断乳腺癌有一定诊断参考价值。

胰腺癌细胞株Runx3基因启动子区CpG岛甲基化的检测

目的探讨胰腺癌细胞株中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化水平。方法应用甲基化特异性PCR方法检测Panc-1、BxPC-3、AsPC-1三种胰腺癌细胞株及正常胰腺组织RunX3基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果在Panc-1、BxPC-3、AsPC-1细胞株中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化引物均发生扩增,非甲基化引物未发生扩增;在正常胰腺组织中Runx3基因启动子区CpG岛的甲基化引物未发生扩增,非甲基化引物发生扩增。结论 Panc-1、BxPC-3、AsPC-1中存在Runx3基因启动子区CpG岛的完全甲基化。

RUNX3基因启动子甲基化在结肠癌诊断和预后评估中的应用

目的检测正常结肠组织和结肠癌组织RUNX3基因启动子甲基化状态和mRNA表达,探索其在结肠癌诊断和预后评估中的应用。方法甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR分别检测61例结肠癌组织和正常组织中RUNX3基因启动子甲基化和mRNA表达状态。结果结肠癌组织中RUNX3基因启动子甲基化率高于正常组织(P<0.05),所检测出甲基化的样本RUNX3基因mRNA表达明显受到抑制,分化程度越差、临床分期越晚则甲基化率越高,甲基化率与年龄和性别无关。结论结肠癌是一个多基因作用的结果,RUNX3基因启动子甲基化状态检测在结肠癌分子诊断、临床分期和预后评估中具有重要作用。

乳腺癌中RUNX3基因启动子区甲基化及基因表达研究

目的通过检测乳腺癌中RUNX3基因启动子甲基化状态及其对mRNA表达的影响,探讨RUNX3在乳腺癌发生、发展中的意义。方法运用甲基化特异性PCR(MSP)检测40例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺良性病变标本中RUNX3基因启动子甲基化状态,同时采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测该基因的表达情况。结果乳腺癌组织中RUNX3基因的甲基化率为47.5%,明显高于乳腺良性病变组织的甲基化率,其差异具有显著性(P<0.05);同时乳腺癌组织中RUNX3基因表达缺失率为40%,明显高于乳腺良性病变,其差异也具有显著性(P<0.05)。乳腺癌中RUNX3基因启动子甲基化水平与患者的病理组织学分级有相关性,差异有统计学意义(P<0.05),与患者的年龄、淋巴结转移无相关性。RUNX3基因表达与患者的临床病理特征均无相关性。结论 RUNX3基因启动子的高甲基化可能是乳腺癌中一类重要的分子改变,也是导致RUNX3基因表达下降的原因之一,并参与了肿瘤的演进。

Runx3基因启动子甲基化及其蛋白表达与喉癌的关系

目的探讨Runx3基因启动子甲基化状态及其蛋白表达与喉癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例喉癌组织及癌旁正常黏膜组织中Runx3DNA的表达,并用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测Runx3基因启动子甲基化情况。结果55例喉癌组织标本中Runx3基因蛋白的表达较癌旁正常组织中表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);癌旁正常黏膜组织中无Runx3基因启动子的甲基化,喉癌组织中有32例(58.2%)检测到Runx3基因启动子的甲基化,2者比较差异有统计学意义(P<0.05);喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化及Runx3蛋白的表达与性别、临床分型及分级、有无淋巴结转移均无关(均P>0.05);喉癌组织中Runx3基因启动子甲基化与Runx3蛋白表达呈负相关(r=-0.7092,P<0.01)。结论Runx3基因启动子甲基化是其基因失活的可能机制之一,在喉癌的发生中起重要作用。

胰腺癌组织RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化研究

目的:检测胰腺癌组织抑癌基因RUNT相关转录因子3(human runt-related transcription factor 3,RUNX3)基因启动子区CpG岛甲基化的状态并探讨其临床意义。方法:采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测52例胰腺癌组织及癌旁组织、15例正常胰腺组织中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态,并分析其与胰腺癌临床病理特征之间的关系。结果:胰腺癌、癌旁胰腺组织及正常胰腺组织中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化率分别为48.1%(25/52)、9.6%(5/52)和0.0%,3组间比较差异有统计学意义(P<0.05);RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态与胰腺癌的TNM分期、分化程度及淋巴结转移关系密切(P<0.05)。结论:RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化是胰腺癌组织区别于正常胰腺组织的分子事件之一,可能在胰腺癌的发生、发展中起重要作用;检测RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化可能会成为一种新的诊断胰腺癌的肿瘤标志物。

结直肠癌中Runx3基因启动子区甲基化状态及其表达研究

目的：观察结直肠癌中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况，探讨Runx3基因启动子区域异常甲基化状态在结直肠癌发生和发展过程中的意义。方法：采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术分别对7种结直肠癌细胞系和65例结直肠癌患者肿瘤组织及其癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测，同时采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测结直肠癌细胞系及肿瘤组织、癌旁组织中Runx3基因表达情况。结果：在结直肠癌组织中，Runx3基因启动子区域甲基化率占43．1％（28／65），而在相对应的癌旁正常组织中，Runx3基因启动子区域未发现高甲基化现象；在7种结直肠癌细胞系中，有6种细胞Runx3基因启动子区域存在过度甲基化异常；RT—PCR结果显示，7种结直肠癌细胞系中仅Caco一2细胞中出现Runx3基因表达，而65例结直肠癌标本中，Runx3mRNA表达率为49．2％（32／65），其表达情况与肿瘤分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等临床病理参数之间存在显著相关性。结论：Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一，与结直肠癌发生密切相关，可作为结直肠癌早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。

骨肉瘤外周血Runx3基因启动子甲基化检测及临床意义

目的研究骨肉瘤患者外周血Runt相关转录因子3(Runx3)基因启动子甲基化及临床意义。方法选择骨肉瘤患者及健康人作为研究对象,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测两组研究对象外周血Runx3基因启动子甲基化并比较其差异,分析骨肉瘤患者Runx3基因启动子甲基化与临床病理因素的关系。结果骨肉瘤患者外周血Runx3基因启动子甲基化率(57.1%)显著高于健康人(2.0%),差异有统计学意义(P<0.05)。在不同性别、年龄、肿瘤部位和病理类型的骨肉瘤患者之间,外周血Runx3基因启动子甲基化率的差异无统计学意义(P>0.05),在不同KPS评分、肿瘤最大径、病理性骨折、组织学分级和Enneking分期的骨肉瘤患者之间,差异均有统计学意义(P<0.05)。KPS评分低于70分、肿瘤最大径大于或等于10cm、有病理性骨折、组织学分级G3+G4及Enneking分期晚的骨肉瘤患者,其Runx3基因启动子甲基化率显著高于KPS评分大于或等于70分、肿瘤最大径小于10cm、无病理性骨折、组织学分级G1+G2及Enneking分期早的骨肉瘤患者。结论骨肉瘤患者外周血Runx3基因启动子呈高甲基化状态,与KPS评分、肿瘤最大径、病理性骨折、组织学分级和Enneking分期密切相关,可用于评估骨肉瘤患者病情及预后。

NSCLC外周血Runx3基因启动子甲基化临床意义

目的研究非小细胞肺癌(None-small cell lung cancer,NSCLC)患者外周血Runx3基因启动子甲基化的临床意义。方法选择NSCLC患者(NSCLC组)和正常健康人(CON组)为研究对象,检测并比较两组研究对象外周血Runx3基因启动子甲基化,比较外周血Runx3基因启动子甲基化与未甲基化患者R0切除率、3年生存率及总生存时间的差异。结果 NSCLC组患者外周血Runx3基因启动子甲基化率显著高于CON组(P<0.05)。NSCLC组患者外周血Runx3基因启动子甲基化在胸腔积液、分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移和TNM分期存在明显差异(均P<0.05)。NSCLC组患者Runx3基因启动子甲基化者R0切除率、3年生存率及总生存时间均显著低于未甲基化者(均P<0.05)。结论 NSCLC患者外周血Runx3基因启动子甲基化异常,在病情及预后评估中具有一定临床价值。

柱花草SgPAL3基因启动子的克隆及上游转录因子的筛选

柱花草(Stylosanthes spp.)是热带地区广泛种植的重要草种,炭疽病是危害柱花草的严重病害,柱花草SgPAL3基因具有抗炭疽菌的功能。本研究对启动子区域-2 000~0 bp,-1 500~0 bp序列分别构建诱饵载体并检测自激活,结果表明500 ng·mL^(-1)金担子素(Aureobasidin A,AbA)可以抑制两种诱饵载体的自激活。利用Gateway技术构建了柱花草响应炭疽菌的酵母cDNA文库,其容量为1.20×107,插入片段主要分布在750~2 000 bp,重组率为100%;利用酵母单杂交技术,筛选与SgPAL3基因启动子互作的转录因子,并验证了3个转录因子(SgASIL2,SgHAT5和SgZHD8)与SgPAL3启动子的互作关系;qRT-PCR分析表明,SgASIL2,SgHAT5和SgZHD8均响应炭疽菌的侵染,说明它们可能调控柱花草对炭疽病的抗性。本研究为进一步解析SgPAL3响应炭疽菌侵染的转录调控机制奠定了基础。

RUNX3基因启动子甲基化在非小细胞肺癌诊断的价值

目的探讨检测RUNX3基因启动子甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)诊断的价值。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应,分析58例NSCLC组织和癌旁正常肺组织RUNX3基因启动子甲基化情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果 58例中,NSCLC组织RUNX3基因启动子甲基化26例(44.8%),明显多于癌旁正常肺组织的10例(17.2%)(P<0.01)。RUNX3基因启动子甲基化与临床分期、淋巴结转移和分化程度密切相关(P<0.05)。结论 RUNX3基因启动子甲基化在NSCLC组织中有较高的检出率,并与其临床分期、淋巴结转移和分化程度相关,在NSCLC诊断和预后判断中具有重要的临床意义。