结直肠癌中miR-330-3p-RUVBL1信号轴对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨结直肠癌(colorectal cancer,CRC)中miR-330-3p-RUVBL1信号轴对肿瘤增殖、凋亡的影响。方法分析Oncomine数据库中结直肠癌RUVBL1 mRNA的表达情况;利用Kaplan-Meier生存曲线分析RUVBL1 mRNA表达水平与CRC患者生存预后之间的相关性;免疫组化法检测临床CRC标本癌组织和正常结直肠组织RUVBL1蛋白的表达情况。荧光素酶报告基因实验分析RUVBL1与miR-330-3p的靶向关系;荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CRC临床标本癌组织和正常结直肠组织miR-330-3p的表达情况;利用脂质体转染结直肠癌HT-29细胞,过表达或沉默miR-330-3p的表达;运用CCK-8法检测过表达miR-330-3p对HT-29细胞活力的影响和对顺铂敏感性变化,利用流式细胞仪检测过表达miR-330-3p对HT-29凋亡的影响;利用Western blot检测转染miR-330-3p后HT-29细胞中RUVBL1蛋白的表达情况和细胞凋亡相关蛋白的表达情况。结果数据库分析结果显示RUVBL1 mRNA在CRC中高表达;RUVBL1基因的表达水平与结直肠癌患者生存预后之间存在相关性,RUVBL1高表达患者的总体生存率明显低于低表达RUVBL1的患者(P=0.0077);免疫组化结果显示RUVBL1在CRC组织中的表达水平较正常结直肠组织明显增高;qRT-PCR结果显示CRC临床标本癌组织中miR-330-3p的表达水平明显低于正常结直肠组织(P<0.01);过表达miR-330-3p的HT-29细胞中RUVBL1的表达明显下调,细胞内促凋亡蛋白Bax、cleaved-Caspase-3的蛋白表达水平均上调,而Bcl-2表达水平下降;过表达miR-330-3p的HT-29细胞凋亡增加,且对顺铂的敏感性增强。结论RUVBL1在CRC中高表达,其表达水平与CRC患者生存预后相关;RUVBL1是miR-330-3p的潜在靶点,miR-330-3p可能通过抑制RUVBL1表达促进结直肠癌细胞凋亡。

人Ruvbl1蛋白生物信息分析

采用生物信息学预测对人AAA+(ATPases associated with diverse cellular Activities)ATP酶家族成员Ruvbl1蛋白质的理化性质、蛋白质同源性、跨膜区域、核定位序列及信号肽、亲/疏水性,蛋白质高级结构、蛋白质间相互作用、GO注释进行预测分析。人Ruvbl1蛋白有456个氨基酸,等电点为6.02,有核定位序列,无信号肽,蛋白质具亲水性且高度保守;二级结构存在21个α螺旋和10个β折叠,相互作用蛋白及GO注释提示其主要在细胞核中发挥功能。人Ruvbl1蛋白是DNA解螺旋的关键酶,通过解螺旋DNA为基因的同源重组以及DNA损伤修复提供结构基础。

基于TCGA数据库对RUVBL1基因在结肠腺癌中的诊断和预后价值研究

目的通过对癌症基因组图谱(TCGA)数据库中结肠腺癌(colon adenocarcinoma,COAD)患者癌组织和癌旁正常结肠组织的RUVBL1基因RNA测序数据进行分析,研究其在结肠腺癌中的诊断和预后的价值。方法从TCGA数据库下载COAD的RNA测序数据集及临床资料,绘制散点图比较RUVBL1基因在COAD癌组织和癌旁正常组织中的表达差异;绘制ROC曲线研究RUVBL1基因表达对COAD的诊断价值;Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析RUVBL1基因表达与COAD总体生存时间的关系;采用单因素与多因素Cox回归模型分析临床参数与COAD临床预后的关系,其中风险比(Hazard Ratio,HR)与95%置信区间(95% Confidence Interval,95%CI)用于量化评估临床参数与预后的相关性。结果RUVBL1 基因在癌组织中的表达量为(2486.000 ± 39.590),高于其在癌旁正常结肠组织中的表达量(966.300 ± 35.450),差异有统计学意义(P < 0.001);ROC曲线显示RUVBL1基因对COAD有较高的诊断价值(AUC = 0.972,95%CI :0.958~0.986);Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示RU?VBL1基因表达与总生存时间相关,低表达患者总体生存时间优于高表达患者(P = 0.027);单因素分析结果显示患者性别、年龄与患者的预后无关(Log-rankP = 0.545,0.114),而肿瘤TNM分期(P < 0.001)、RUVBL1基因表达与COAD预后相关(CrudeP = 0.028;CrudeHR = 1.587,95%CI :1.051~2.397)。进一步进行校正肿瘤TNM分期的Cox多因素分析,结果显示RUVBL1基因高表达是影响COAD预后的独立危险因素(AdjustedP = 0.038;AdjustedHR = 1.565;95%CI : 1.026~2.386)。结论RUVBL1基因可能是COAD诊断和预测预后潜在的生物学标记物,未来需要更进一步研究来验证其价值。