鸭源鸡杆菌gtxA/flfA基因双缺失株的构建及其生物学特性分析

为了解RTX样毒素Gtx A及F-17菌毛的flfA基因在鸭源鸡杆菌中的功能,本研究利用自然转化法对鸭源鸡杆菌RZΔgtxA进一步缺失flfA基因构建RZΔgtxAΔflfA菌株,通过分析其生长特性、生物被膜形成能力、黏附能力及对细胞毒性的变化,探究其与鸭源鸡杆菌致病性可能的关系。结果显示,RZΔgtxAΔflfA能稳定遗传flfA基因的缺失;单双基因突变株溶血活性均消失,但二者菌落形态及生长速率并未出现显著改变;二者生物被膜形成能力均明显下降(p<0.001),但RZΔgtxAΔflfA相比RZΔgtxA生物被膜形成能力稍有增强但差异不显著;二者对鸡原代输卵管上皮细胞的黏附能力及毒性均减弱(p<0.05),且RZΔgtxAΔflfA对细胞的黏附能力减弱更明显(p<0.01)。以上结果表明,GtxA毒素和F-17菌毛在鸭源鸡杆菌黏附及对鸡原代输卵管上皮细胞的毒力中起重要作用,且呈现明显的协同关系。本研究为鸭源鸡杆菌致病机理的探究奠定基础。

鸭源鸡杆菌ompW、gtxA双基因缺失株的构建及其相关特性分析

鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis,G.anatis)是家禽中常见的条件性致病菌,主要引起蛋鸡生殖道疾病,造成产蛋量下降。【目的】为探究RTX样毒素GtxA及外膜蛋白(OmpW)对鸭源鸡杆菌生物学特性和致病力的影响。【方法】本研究采用自然转化法对突变株RZ△ompW进一步缺失gtxA构建突变株RZ△ompW△gtxA,通过分析其生长特性、黏附能力、引起细胞凋亡程度及对小鼠致病性等,探究其与生物学特性及致病性可能的关系。【结果】结果显示,RZ△ompW△gtxA能稳定遗传gtxA的缺失;单双基因突变株溶血活性均消失、与RZ株相比菌落形态及生长速率并未出现显著改变;相比RZ、RZ△ompW和RZ△gtxA,双基因缺失株RZ△ompW△gtxA在不同时段对鸡原代输卵管上皮细胞的黏附能力显著降低(P<0.05),诱导鸡输卵管上皮原代细胞发生凋亡的能力明显减弱,对小鼠的致病力显著降低。【结论】GtxA毒素和外膜蛋白OmpW在鸭源鸡杆菌毒力、黏附宿主细胞及诱导其细胞凋亡中起重要作用,且可能存在明显的协同关系。本研究为鸭源鸡杆菌感染机制的阐明奠定基础。