Rab1A siRNA对SGC7901胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Rab1A在胃癌组织的表达及其对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法收集35例胃癌患者的胃癌组织及正常胃组织,用real-time PCR和Western blot法检测胃癌组织和正常胃组织中Rab1A表达水平。SGC7901胃癌细胞分为对照组,阴性对照组,Rab1A siRNA 30 nmol/L组,60 nmol/L组和90 nmol/L组,分别给予无效处理、阴性对照siRNA和三种不同浓度的Rab1A siRNA,MTT法检测各组细胞增殖活力。60 nmol/L的Rab1A siRNA沉默SGC7901细胞中Rab1A的表达,流式细胞仪分析Rab1A siRNA对细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot法检测Rab1A siRNA对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果胃癌组织中Rab1A的表达无论在mRNA水平(5.625±0.525 vs 1.000±0.000,P<0.05)还是蛋白水平(1.013±0.125 vs 0.219±0.060,P<0.05),均显著高于正常胃组织。RNA干扰48 h后,与对照组相比,30 nmol/LRab1A siRNA组的细胞增殖活力无明显变化(P>0.05),60 nmol/LRab1A siRNA组和90 nmol/LRab1A siRNA组的细胞增殖活力明显下降(P<0.05),但60 nmol/L组和90 nmol/L组间细胞增殖活力无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,60 nmol/L siRNA组无论是G1/G0期、S期,还是G2/M期的细胞数量均无明显差异(P>0.05);与对照组相比,60 nmol/L siRNA组无论是早期凋亡细胞比例,还是晚期凋亡细胞的比例均明显上升(P<0.05);而且,与对照组相比,60 nmol/L siRNA组的Bax蛋白的表达水平显著上调(0.483±0.015 vs 0.767±0.153,P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平显著下调(0.703±0.021 vs 0.347±0.015,P<0.05)。结论 Rab1A在胃癌组织中的表达水平高于正常胃组织,可促进胃癌细胞SGC7901增殖,并且通过上调Bcl-2和下调Bax的表达抑制细胞凋亡。

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。

阴道毛滴虫Rab1a基因的cDNA克隆及重组表达

目的克隆和分析阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a基因,构建Rab1a基因表达重组载体并表达其融合蛋白,以进一步探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫基因组DNA为模板,扩增TvRab1a基因,用pQE80L载体与TvRab1acDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物并由SDS-PAGE鉴定。结果在阴道毛滴虫cDNA文库克隆中发现了Rab1a基因,序列分析显示Rab1a基因的基因组DNA序列含有一个25bp大小的内含子。成功构建了pQE/Rab1a原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白质。结论分析表明TvRab1a基因是阴道毛滴虫Rab1鸟苷三磷酸酶同源基因,它含有一个25bp的内含子。获得了该基因的重组蛋白,将对TvRab1a基因的功能进行进一步研究。

Rab1对海水干预肺微血管内皮细胞β肾上腺素受体表达的调节作用

目的研究Rab1对大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVECs)β肾上腺素受体(β-ARs)表达的调节作用。方法取原代培养的RPMVECs作为研究对象,设计3个实验:(1)检测海水干预对β-ARs表达的影响,设对照组和海水处理(SW)组。(2)构建大鼠野生型Rab1慢病毒表达载体(Rab1WT)和Rab1阴性突变体慢病毒表达载体(Rab1N124I),检测两种质粒转染对β-ARs及其亚型(β1-AR、β2-AR)表达的影响,设对照组、转染Rab1WT组(WT组)和转染Rab1N124I组(N124I组)。(3)检测Rab1WT转染对海水处理β-ARs表达的影响,设对照组、SW组和转染Rab1WT后海水处理组(WT/SW组)。上述3个实验中,对照组RPMVECs常规培养至实验结束;SW组细胞常规培养后用海水处理2h;WT组和N124I组细胞分别转染Rab1WT和Rab1N124I(滴度109TU/ml);WT/SW组细胞转染Rab1WT后培养48h,用海水处理2h。β-ARs及其亚型的表达均采用配体饱和测定法进行检测。结果 (1)对照组和SW组RPMVECs表面β-ARs的表达量分别为2107.00±202.36和1324.00±130.01cpm/105细胞,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)对照组、WT组和N124I组β-ARs的表达量分别为2048.00±207.64、2833.00±203.07和1040.00±91.59cpm/105细胞(P<0.05),β1-AR分别为517.78±29.65、591.22±18.29、364.11±20.68cpm/105细胞(P<0.05),β2-AR分别为1627.90±112.27、2262.10±169.33和694.33±29.79cpm/105细胞(P<0.05)。与对照组比较,WT组β1-AR的表达增加了14.2%(P<0.05),β2-AR增加了49.0%(P<0.01)。(3)SW组β-ARs的表达量为1276.00±121.42cpm/105细胞,与对照组(2059.00±174.62cpm/105细胞)比较下降了38.0%(P<0.01),WT/SW组β-ARs的表达量为2017.20±101.14cpm/105细胞,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),与SW组比较增加了58%(P<0.01)。结论海水干预可降低β-ARs在RPMVECs细胞膜上的表达,Rab1可对抗该作用,使β-ARs的表达上调。

阴道毛滴虫Rab1a重组蛋白的表达和细胞内定位

目的制备阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a重组蛋白及其多克隆抗体,并对TvRab1a蛋白进行阴道毛滴虫的细胞内定位。方法将我们已构建的pQE80L/TvRab1a重组表达质粒转入大肠埃希菌E.coliM15,在IPTG诱导下表达重组蛋白,经Ni-NTA亲和柱层析后获得纯度较高的TvRab1a的重组蛋白;用经复性处理的重组蛋白免疫动物,获得TvRab1a重组蛋白抗血清,免疫印迹WesternBlot鉴定抗血清。采用荧光免疫细胞化学对TvRab1a蛋白进行细胞内定位。结果WesternBlot分析显示,TvRab1a重组蛋白可与豚鼠的抗TvRab1a血清反应,同时该抗血清在滴虫提取蛋白中检测到与预测TvRab1a分子量一致的条带;免疫荧光化学检测发现TvRab1a分布于细胞核周围的高尔基复合体与内质网。结论获得的抗TvRab1a蛋白的多抗血清可用于TvRab1a基因功能的研究;TvRab1a功能场所位于高尔基复合体与内质网。

RAB1A对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的探讨RAB1A对人舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移影响的分子机制。方法应用Western blot检测RAB1A蛋白在人正常舌上皮细胞Hacat、舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、转染敲除RAB1A质粒后SiRAB1A/Tca8113的表达改变;检测SiRAB1A/Tca8113细胞中上皮-间质转化(EMT)相关标志物的变化;分别采用CCK-8、Transwell、伤口愈合实验检测SiRAB1A/Tca8113细胞的增殖、侵袭、转移能力。结果 Western blot显示Tca8113中RAB1A的表达量显著高于Hacat组,SiRAB1A/Tca8113细胞中RAB1A显著降低;CCK-8增殖实验结果显示,SiRAB1A/Tca8113细胞增殖能力明显降低;Transwell实验结果亦显示其侵袭能力明显降低;伤口愈合实验结果显示其转移能力明显降低;Western blot结果显示SiRAB1A/Tca8113中钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著增加,波形蛋白(Vimentin)的表达显著受到了抑制。结论 RAB1A能够促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移。

SIRT1通过调节FOXO1/RAB7信号通路促进低氧诱导的胰腺癌细胞自噬

目的:探讨SIRT1对低氧诱导的胰腺癌细胞自噬的影响及FOXO1/RAB7信号通路在其中的作用。方法:利用Western blot和免疫荧光法检测SIRT1在低氧诱导的自噬胰腺癌细胞核内的表达情况。将下调 SIRT1 基因的小干扰RNA和过表达 SIRT1 的质粒转染到胰腺癌Panc-1细胞中,敲减和过表达 SIRT1 基因;激光共聚焦显微镜追踪双色LC3荧光蛋白表达,Western blot实验检测自噬相关蛋白LC3、p62及FOXO1/RAB7信号通路的蛋白表达情况。通过生物信息学GEPIA网站关联性分析预测SIRT1与FOXO1的相互作用,并进一步利用免疫共沉淀技术检测 SIRT1与FOXO1蛋白的相互作用。结果: SIRT1在低氧诱导的胰腺癌细胞核内表达增加。敲减SIRT1 的表达可以引起胰腺癌细胞自噬受抑制。过表达 SIRT1 能够增强Panc-1细胞中FOXO1和RAB7的蛋白表达水平( P <0.05),而当 SIRT1 表达下调时,FOXO1和RAB7表达受到抑制( P <0.05)。SIRT1与FOXO1蛋白存在相互作用。结论: SIRT1可能参与胰腺癌细胞自噬的调控,其机制可能与 FOXO1/RAB7信号通路有关。

Rab1蛋白介导的AT1R囊泡运输在糖尿病脑梗死血管重构方面的研究进展

Rab1可调节血管内皮细胞等组织细胞,血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)从内质网经高尔基体到细胞表面的顺向运输。血管紧张素Ⅱ不但能增加内皮祖细胞(EPCs)的数量,而且能改善EPC的增生、迁移、黏附和体外血管生成能力,AngⅡ通过AT1R介导上调内皮祖细胞的血管内皮生长因子等多种促血管新生的细胞因子的表达,促进血管再生。Rab1蛋白介导AT1R囊泡运输在复元醒脑汤治疗糖尿病脑梗死的作用机制中可能是其关键点。

RABGEF1蛋白在卵巢肿瘤中的表达

目的探讨RAB鸟苷酸交换因子1（RABGEFl）蛋白在卵巢恶性肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达水平。方法应用免疫组织化学技术检测46例卵巢恶性肿瘤、21例卵巢良性肿瘤及15例正常卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达水平。结果RABGEFl蛋白在卵巢恶性肿瘤中的阳性表达率为7l_7％，在卵巢良性肿瘤中的阳性表达率为38．1％，在正常卵巢组织中未检测到RABGEFl蛋白的表达；RABGEFl蛋白在卵巢恶性肿瘤中的表达率显著高于良性肿瘤（矿一6．87，P一0．0087）。结论RABGEFl蛋白可能参与卵巢肿瘤的发生及发展，卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达检测或许有助于卵巢肿瘤的辅助诊断。

lncRNA RAB11B-AS1上调miR-628-3p抑制人胃癌细胞系增殖和迁移

目的探讨lncRNA RAB11B-AS1对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和顺铂敏感性的影响及分子机制。方法建立顺铂耐药胃癌细胞系(HGC-27/DDP),将其分为对照组、si-NC组和si-RAB11B-AS1组;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞存活率;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的表达;流式细胞仪检测细胞周期;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测RAB11B-AS1和miR-628-3p的靶向关系。结果0.2、0.4 mg/L顺铂处理后HGC-27细胞存活率显著降低(P<0.05),而0~0.4 mg/L的顺铂处理后HGC-27/DDP细胞存活率无统计学意义。HGC-27和HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著升高(P<0.05),且HGC-27/DDP细胞中RAB11B-AS1表达水平显著高于HGC-27细胞(P<0.05)。lncRNA RAB11B-AS1干扰表达,G0-G1期细胞所占比例显著升高,S期细胞所占比例显著降低(P<0.05);细胞存活率显著降低,迁移、侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。RAB11B-AS1靶向调控miR-628-3p。结论LncRNA RAB11B-AS1可通过上调miR-628-3p表达抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭,并提高癌细胞对顺铂的敏感性。

RAB7L1基因多态性与济宁地区汉族人群PD发病风险的关系

目的:探讨RAB7L1基因多态性与济宁地区汉族人群帕金森病(PD)发病的关系。方法:选取2015年10月至2016年4月在我院就诊的PD患者200例(观察组),同时选取健康体检者200例作为对照组。对2组受试者进行RAB7L1基因rs1775143和rs823144位点的多态分析。结果:rs1775143位点显示3种基因型(TT型、CT型和CC型),rs823144位点显示3种基因型(AA型、AC型和CC型);观察组和对照组rs1775143基因型和等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组和对照组rs823144基因型和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:RAB7L1基因rs1775143位点的多态性可能与济宁地区汉族人群PD的发生有一定关系,而rs823144位点可能与PD的发生无关。

敲减Rab1A表达通过抑制AKT的磷酸化抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究Rab1A基因表达的改变对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响。方法:Western blot检测Rab1A在乳腺癌组织及癌旁正常组织的表达和Rab1A在乳腺正常上皮及不同乳腺癌细胞系中的基础表达。设计并构建靶向Rab1A的小干扰RNA(siRNA),Western blot法验证敲减效果;分别采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot观察Rab1A基因表达改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响和相关蛋白表达的改变。结果:Rab1A在乳腺正常组织和细胞中低表达,在癌组织及癌细胞中高表达(P<0.05);与对照组相比,干扰Rab1A的表达可以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力(P<0.05),诱导凋亡增加(P<0.05),G_2/M期细胞比例增加(P<0.05),迁移与侵袭能力减弱(P<0.05),p53、Bax、cleaved caspase-3和PTEN的蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1、cyclin B1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、p-AKT和mTOR的蛋白水平降低(P<0.05)。结论:Rab1A具有调控乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的能力,并调控增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达。干扰Rab1A可通过抑制AKT通路的磷酸化从而抑制乳腺癌的演进与发展;Rab1A可能是基因治疗乳腺癌的一个潜在靶点。

lncRNA RAB30-AS1对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡影响的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)RAB30-AS1对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养宫颈癌Hela细胞,分别转染pcDNA-NC(NC组)和pcDNA-RAB30-AS1(RAB30-AS1组),采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染效率。通过Edu试验和流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡能力的改变。qRT-PCR和蛋白质印迹法(Westernblot)检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(GPC5)基因的表达。结果NC组和RAB30-AS1组Hela细胞中RAB30-AS1的表达分别为(1.34±0.27)和(8.90±1.60),NC组RAB30-AS1表达明显低于RAB30-AS1组(P<0.01)。NC组和RAB30-AS1组Hela细胞增殖率分别为(41.82±2.86)%和(20.85±3.82)%,RAB30-AS1组细胞增殖率明显低于NC组(P<0.01)。NC组和RAB30-AS1组Hela细胞凋亡率分别为(12.61±1.96)%和(32.19±4.29)%,RAB30-AS1组细胞凋亡率明显高于NC组(P<0.01)。与NC组相比,RAB30-AS1组Hela细胞中GPC5基因表达显著增加(P<0.01)。结论RAB30-AS1过表达能够抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与促进GPC5基因表达有关。

MiR-150-5p通过靶向调控Rab1A抑制乳腺癌细胞MDA-231的上皮-间质转化

先前的研究表明,miR-150-5p发挥抑癌基因的作用,调控肿瘤细胞的侵袭与转移。然而,关于其在乳腺癌细胞侵袭与转移中的机制尚不明确。本实验旨在研究miR-150-5p负向调控Rab1A在乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用。双荧光素酶的结果显示,miR-150-5p可负向调控Rab1A。荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,miR-150-5p在乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231(MDA-231)中的表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A;在MDA-231中过表达miR-150-5p后,qRT-PCR结果显示,Rab1A mRNA的表达水平明显降低。Western印迹结果显示,过表达miR-150-5p后,miR-150-5p组细胞中的Rab1A、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的表达水平相对于对照组(NC)细胞明显降低,而E-钙黏着蛋白(Ecadherin)的表达水平明显增加。Transwell侵袭和划痕实验显示,与miR-150-5p+Con组细胞相比,miR-150-5p+Rab1A组细胞的侵袭和迁移能力明显增加。qRT-PCR结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞的Rab1A mRNA表达水平明显增加。Western印迹结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞中的波形蛋白、N-钙黏着蛋白表达水平明显增加,而E-钙黏着蛋白表达明显降低,过表达Rab1A后显著逆转了miR-150-5p对EMT的影响。综上所述,miR-150-5p可以通过负向调控Rab1A抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。

RAB1A在肿瘤发生发展中的作用研究进展

RAB1A是一种小三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)酶,是内质网和高尔基体之间囊泡转运的重要调节成分,可以在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间转化。RAB1A除了在囊泡转运中的作用外,还参与营养感应、信号转导、细胞迁移和自噬调节。RAB1A更多是作为癌基因发挥作用,主要通过激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)信号通路,调节肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和转移。研究表明,RAB1A的异常激活与结直肠癌、HCC、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。本文主要就RAB1A的结构与功能、在肿瘤发生发展中的作用及相关信号通路进行综述。

Rab1A与肿瘤发生发展的研究进展

Rab1A是RAB家族的一员,是一种小三磷酸鸟苷(GTP)酶,是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)的激活因子,已经被证实参与调节内质网至高尔基体的囊泡运输。随着Rab1A研究的不断深入,很多学者发现Rab1A蛋白还参与信号传导、细胞迁移以及自体吞噬的调节。同时Rab1A异常表达也与一些临床疾病的发生发展有关,如帕金森氏病、原发性心肌病及阿司匹林加重性呼吸道疾病等。而近年来人们逐渐开始关注Rab1A在肿瘤发生发展中的作用,在包括舌癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、胃癌及子宫颈癌等多种恶性肿瘤中Rab1A均有不同程度的高表达,且在肿瘤的发生发展中扮演着重要角色。文章就Rab1A在肿瘤发生发展及信号通路等方面的研究进展进行综述。

家蚕Rab1基因的克隆及在裸蛹(Nd)突变品系幼虫丝腺中的表达分析

Rab1基因是大鼠肉瘤鸟苷三磷酸酶(Ras)基因家族的一员,调控囊泡从内质网到高尔基体的运输等重要细胞生理过程。通过生物信息学分析发现,家蚕Rab1(BmRab1)基因CDS长609 bp,含有5个外显子,编码202个氨基酸,位于第25染色体nscaf2823:1286217..1289996(+strand),与丝素重链基因(fib-H)相距200 kb左右。对正常结茧家蚕品系大造和无丝素分泌的裸蛹(Nd)突变品系的BmRab1的序列结构分析显示:大造和Nd品系的BmRab1 cDNA序列第543个碱基处存在单碱基突变,但翻译的氨基酸序列完全相同;在Nd品系中BmRab1的3'端非翻译区缺失8 bp。组织表达分析表明,BmRab1基因在Nd品系4眠和整个5龄期幼虫的后部丝腺异常高量表达,荧光定量PCR显示BmRab1在Nd品系5龄第3天幼虫后部丝腺的表达量是大造的3倍左右。进一步对Nd品系与大造的BmRab1上游启动子序列(-2 200 bp)及其内含子序列进行比较分析发现,Nd品系BmRab1启动子区域出现了2处缺失,并在第3内含子有81 bp插入,第4内含子453 bp替换了大造的263 bp。初步推测BmRab1可能参与了Nd品系幼虫后部丝腺退化萎缩的生理变化,但该基因是否是导致Nd品系后部丝腺退化萎缩的突变基因,还有待进一步证实。

Rab1A对NSCLC细胞迁移和JAK1磷酸化的影响

目的:观察Rab1A(Ras-related protein Rab-1A)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系迁移的影响及其分子机制。方法:应用siRNA干扰Rab1A基因表达;应用RTCA(real-time cell analysis)法分析干扰Rab1A基因表达对NSCLC细胞迁移速率的影响;应用免疫印迹观察干扰Rab1A基因表达对JAK1(Janus Kinase 1)磷酸化水平的影响。结果:与阴性对照组相比,Rab1A siRNA转染组NSCLC细胞系的Rab1A蛋白表达水平显著下调(P<0.01);干扰Rab1A基因表达抑制NSCLC细胞迁移(P<0.01);干扰Rab1A基因表达可下调NSCLC细胞迁移相关蛋白JAK1磷酸化水平(P<0.01)。结论:Rab1A通过调节JAK1磷酸化水平影响NSCLC细胞迁移。

草鱼Rab1A基因的克隆表达、抗体制备及对微囊藻毒素-LR的响应

为了解草鱼(Ctenopharygodon idella)小分子三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白家族成员Rab1A的分子结构特点及其在微囊藻毒素-LR(MC-LR)胁迫中的作用,本研究根据草鱼肝脏(MC-LR诱导)转录组测序获得的unigenes序列,采用RACE技术克隆了草鱼Rab1A基因cDNA,其全长序列为806 bp,开放阅读框为609 bp,编码202个氨基酸。同源性分析结果表明,Rab1A与鲤鱼(Cyprinus carpio)Rab1A3相似性最高。系统进化分析表明草鱼Rab1A与鲤鱼、斑马鱼(Danio rerio)等鱼类聚为一大支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现Rab1A在草鱼各组织中广泛分布,在血液和鳃等组织中的表达较丰富。构建了pGEX-4T-1-Rab1A重组表达载体,并制备了Rab1A多克隆抗体,通过酶联免疫(ELISA)检测抗体效价为1∶512000以上,Western blot检测显示抗体具有特异性。草鱼肝脏经微囊藻毒素-LR(MC-LR)染毒,发现25和75μg·g^(-1)感染96 h后对Rab1A基因和蛋白表达的影响不明显(P>0.05),但100μg·kg^(-1)可导致草鱼肝脏Rab1A基因和蛋白表达显著下降(P<0.05),表明Rab1A在参与草鱼抵御MC-LR胁迫过程中起着重要的作用。本研究为进一步了解Rab1A基因的功能及其在MC-LR胁迫过程中所发挥的作用奠定了基础。

Rab1A蛋白在胃腺癌组织中的表达情况及预后意义

目的探讨Rab1A蛋白在胃腺癌(Gastric adenocarcinoma,GAC)组织中表达情况以及其表达水平与患者预后的影响。方法组织芯片技术、免疫组化En Vision法检测Rab1A在平均随访5年的300例胃腺癌组织中表达水平。通过SPSS 17.0软件分析胃腺癌组织中Rab1A蛋白的表达情况与胃腺癌患者临床病理之间的关系,以及Rab1A蛋白表达水平对患者预后的影响。结果胃腺癌组织中Rab1A蛋白高表达率明显高于癌旁非癌胃组织(82.26%vs 31.43%,χ2=12.825,P=0.0016);在高-中分化(23.2%)、T1-3分期(31.5%)及临床分期Ⅰ~Ⅱ期(48.3%)胃腺癌组织中Rab1A蛋白高表达较低(P<0.05);生存(Kaplan-Meier法)分析显示,Rab1A蛋白表达低组比Rab1A蛋白表达高组的生存期明显延长,无进展生存期(Progression-free surial,PFS)及总生存期(Overall survival,OS)均延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Rab1A蛋白高表达对胃腺癌的发生发展具有促进作用,可作为胃腺癌患者预后评估的重要指标及靶向治疗的潜在靶标。