阴道毛滴虫Rab1a重组蛋白的表达和细胞内定位

目的制备阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a重组蛋白及其多克隆抗体,并对TvRab1a蛋白进行阴道毛滴虫的细胞内定位。方法将我们已构建的pQE80L/TvRab1a重组表达质粒转入大肠埃希菌E.coliM15,在IPTG诱导下表达重组蛋白,经Ni-NTA亲和柱层析后获得纯度较高的TvRab1a的重组蛋白;用经复性处理的重组蛋白免疫动物,获得TvRab1a重组蛋白抗血清,免疫印迹WesternBlot鉴定抗血清。采用荧光免疫细胞化学对TvRab1a蛋白进行细胞内定位。结果WesternBlot分析显示,TvRab1a重组蛋白可与豚鼠的抗TvRab1a血清反应,同时该抗血清在滴虫提取蛋白中检测到与预测TvRab1a分子量一致的条带;免疫荧光化学检测发现TvRab1a分布于细胞核周围的高尔基复合体与内质网。结论获得的抗TvRab1a蛋白的多抗血清可用于TvRab1a基因功能的研究;TvRab1a功能场所位于高尔基复合体与内质网。

Rab1A siRNA对SGC7901胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Rab1A在胃癌组织的表达及其对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响。方法收集35例胃癌患者的胃癌组织及正常胃组织,用real-time PCR和Western blot法检测胃癌组织和正常胃组织中Rab1A表达水平。SGC7901胃癌细胞分为对照组,阴性对照组,Rab1A siRNA 30 nmol/L组,60 nmol/L组和90 nmol/L组,分别给予无效处理、阴性对照siRNA和三种不同浓度的Rab1A siRNA,MTT法检测各组细胞增殖活力。60 nmol/L的Rab1A siRNA沉默SGC7901细胞中Rab1A的表达,流式细胞仪分析Rab1A siRNA对细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot法检测Rab1A siRNA对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果胃癌组织中Rab1A的表达无论在mRNA水平(5.625±0.525 vs 1.000±0.000,P<0.05)还是蛋白水平(1.013±0.125 vs 0.219±0.060,P<0.05),均显著高于正常胃组织。RNA干扰48 h后,与对照组相比,30 nmol/LRab1A siRNA组的细胞增殖活力无明显变化(P>0.05),60 nmol/LRab1A siRNA组和90 nmol/LRab1A siRNA组的细胞增殖活力明显下降(P<0.05),但60 nmol/L组和90 nmol/L组间细胞增殖活力无明显差异(P>0.05)。与对照组相比,60 nmol/L siRNA组无论是G1/G0期、S期,还是G2/M期的细胞数量均无明显差异(P>0.05);与对照组相比,60 nmol/L siRNA组无论是早期凋亡细胞比例,还是晚期凋亡细胞的比例均明显上升(P<0.05);而且,与对照组相比,60 nmol/L siRNA组的Bax蛋白的表达水平显著上调(0.483±0.015 vs 0.767±0.153,P<0.05),Bcl-2蛋白的表达水平显著下调(0.703±0.021 vs 0.347±0.015,P<0.05)。结论 Rab1A在胃癌组织中的表达水平高于正常胃组织,可促进胃癌细胞SGC7901增殖,并且通过上调Bcl-2和下调Bax的表达抑制细胞凋亡。

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。

阴道毛滴虫Rab1a基因的cDNA克隆及重组表达

目的克隆和分析阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis,Tv)Rab1a基因,构建Rab1a基因表达重组载体并表达其融合蛋白,以进一步探讨其功能。方法提取阴道毛滴虫基因组DNA为模板,扩增TvRab1a基因,用pQE80L载体与TvRab1acDNA克隆构建原核表达重组体并表达融合蛋白,纯化表达产物并由SDS-PAGE鉴定。结果在阴道毛滴虫cDNA文库克隆中发现了Rab1a基因,序列分析显示Rab1a基因的基因组DNA序列含有一个25bp大小的内含子。成功构建了pQE/Rab1a原核表达重组体,并表达出预期大小的重组蛋白质。结论分析表明TvRab1a基因是阴道毛滴虫Rab1鸟苷三磷酸酶同源基因,它含有一个25bp的内含子。获得了该基因的重组蛋白,将对TvRab1a基因的功能进行进一步研究。

RAB1A对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移的影响

目的探讨RAB1A对人舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移影响的分子机制。方法应用Western blot检测RAB1A蛋白在人正常舌上皮细胞Hacat、舌鳞状细胞癌Tca8113细胞、转染敲除RAB1A质粒后SiRAB1A/Tca8113的表达改变;检测SiRAB1A/Tca8113细胞中上皮-间质转化(EMT)相关标志物的变化;分别采用CCK-8、Transwell、伤口愈合实验检测SiRAB1A/Tca8113细胞的增殖、侵袭、转移能力。结果 Western blot显示Tca8113中RAB1A的表达量显著高于Hacat组,SiRAB1A/Tca8113细胞中RAB1A显著降低;CCK-8增殖实验结果显示,SiRAB1A/Tca8113细胞增殖能力明显降低;Transwell实验结果亦显示其侵袭能力明显降低;伤口愈合实验结果显示其转移能力明显降低;Western blot结果显示SiRAB1A/Tca8113中钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著增加,波形蛋白(Vimentin)的表达显著受到了抑制。结论 RAB1A能够促进舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和转移。

敲减Rab1A表达通过抑制AKT的磷酸化抑制乳腺癌细胞的恶性生物学行为

目的:探究Rab1A基因表达的改变对乳腺癌细胞MDA-MB-231恶性生物学行为的影响。方法:Western blot检测Rab1A在乳腺癌组织及癌旁正常组织的表达和Rab1A在乳腺正常上皮及不同乳腺癌细胞系中的基础表达。设计并构建靶向Rab1A的小干扰RNA(siRNA),Western blot法验证敲减效果;分别采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验、流式细胞术和Western blot观察Rab1A基因表达改变对乳腺癌MDA-MB-231细胞恶性生物学行为的影响和相关蛋白表达的改变。结果:Rab1A在乳腺正常组织和细胞中低表达,在癌组织及癌细胞中高表达(P<0.05);与对照组相比,干扰Rab1A的表达可以显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的活力(P<0.05),诱导凋亡增加(P<0.05),G_2/M期细胞比例增加(P<0.05),迁移与侵袭能力减弱(P<0.05),p53、Bax、cleaved caspase-3和PTEN的蛋白水平升高(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1、cyclin B1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、p-AKT和mTOR的蛋白水平降低(P<0.05)。结论:Rab1A具有调控乳腺癌细胞生长、迁移、侵袭、细胞周期和凋亡的能力,并调控增殖、周期和凋亡相关蛋白的表达。干扰Rab1A可通过抑制AKT通路的磷酸化从而抑制乳腺癌的演进与发展;Rab1A可能是基因治疗乳腺癌的一个潜在靶点。

MiR-150-5p通过靶向调控Rab1A抑制乳腺癌细胞MDA-231的上皮-间质转化

先前的研究表明,miR-150-5p发挥抑癌基因的作用,调控肿瘤细胞的侵袭与转移。然而,关于其在乳腺癌细胞侵袭与转移中的机制尚不明确。本实验旨在研究miR-150-5p负向调控Rab1A在乳腺癌细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用。双荧光素酶的结果显示,miR-150-5p可负向调控Rab1A。荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,miR-150-5p在乳腺癌细胞MCF-7及MDA-MB-231(MDA-231)中的表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞MCF-10A;在MDA-231中过表达miR-150-5p后,qRT-PCR结果显示,Rab1A mRNA的表达水平明显降低。Western印迹结果显示,过表达miR-150-5p后,miR-150-5p组细胞中的Rab1A、波形蛋白(vimentin)及N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的表达水平相对于对照组(NC)细胞明显降低,而E-钙黏着蛋白(Ecadherin)的表达水平明显增加。Transwell侵袭和划痕实验显示,与miR-150-5p+Con组细胞相比,miR-150-5p+Rab1A组细胞的侵袭和迁移能力明显增加。qRT-PCR结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞的Rab1A mRNA表达水平明显增加。Western印迹结果显示,miR-150-5p+Rab1A组细胞中的波形蛋白、N-钙黏着蛋白表达水平明显增加,而E-钙黏着蛋白表达明显降低,过表达Rab1A后显著逆转了miR-150-5p对EMT的影响。综上所述,miR-150-5p可以通过负向调控Rab1A抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移。

RAB1A在肿瘤发生发展中的作用研究进展

RAB1A是一种小三磷酸鸟苷(guanosine triphosphate, GTP)酶,是内质网和高尔基体之间囊泡转运的重要调节成分,可以在非活性GDP结合形式和活性GTP结合形式之间转化。RAB1A除了在囊泡转运中的作用外,还参与营养感应、信号转导、细胞迁移和自噬调节。RAB1A更多是作为癌基因发挥作用,主要通过激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mammalian target of rapamycin complex 1,mTORC1)信号通路,调节肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和转移。研究表明,RAB1A的异常激活与结直肠癌、HCC、乳腺癌、胃癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。本文主要就RAB1A的结构与功能、在肿瘤发生发展中的作用及相关信号通路进行综述。

Rab1A与肿瘤发生发展的研究进展

Rab1A是RAB家族的一员,是一种小三磷酸鸟苷(GTP)酶,是哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)的激活因子,已经被证实参与调节内质网至高尔基体的囊泡运输。随着Rab1A研究的不断深入,很多学者发现Rab1A蛋白还参与信号传导、细胞迁移以及自体吞噬的调节。同时Rab1A异常表达也与一些临床疾病的发生发展有关,如帕金森氏病、原发性心肌病及阿司匹林加重性呼吸道疾病等。而近年来人们逐渐开始关注Rab1A在肿瘤发生发展中的作用,在包括舌癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌、胃癌及子宫颈癌等多种恶性肿瘤中Rab1A均有不同程度的高表达,且在肿瘤的发生发展中扮演着重要角色。文章就Rab1A在肿瘤发生发展及信号通路等方面的研究进展进行综述。

Rab1A对NSCLC细胞迁移和JAK1磷酸化的影响

目的:观察Rab1A(Ras-related protein Rab-1A)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系迁移的影响及其分子机制。方法:应用siRNA干扰Rab1A基因表达;应用RTCA(real-time cell analysis)法分析干扰Rab1A基因表达对NSCLC细胞迁移速率的影响;应用免疫印迹观察干扰Rab1A基因表达对JAK1(Janus Kinase 1)磷酸化水平的影响。结果:与阴性对照组相比,Rab1A siRNA转染组NSCLC细胞系的Rab1A蛋白表达水平显著下调(P<0.01);干扰Rab1A基因表达抑制NSCLC细胞迁移(P<0.01);干扰Rab1A基因表达可下调NSCLC细胞迁移相关蛋白JAK1磷酸化水平(P<0.01)。结论:Rab1A通过调节JAK1磷酸化水平影响NSCLC细胞迁移。

草鱼Rab1A基因的克隆表达、抗体制备及对微囊藻毒素-LR的响应

为了解草鱼(Ctenopharygodon idella)小分子三磷酸鸟苷(GTP)结合蛋白家族成员Rab1A的分子结构特点及其在微囊藻毒素-LR(MC-LR)胁迫中的作用,本研究根据草鱼肝脏(MC-LR诱导)转录组测序获得的unigenes序列,采用RACE技术克隆了草鱼Rab1A基因cDNA,其全长序列为806 bp,开放阅读框为609 bp,编码202个氨基酸。同源性分析结果表明,Rab1A与鲤鱼(Cyprinus carpio)Rab1A3相似性最高。系统进化分析表明草鱼Rab1A与鲤鱼、斑马鱼(Danio rerio)等鱼类聚为一大支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现Rab1A在草鱼各组织中广泛分布,在血液和鳃等组织中的表达较丰富。构建了pGEX-4T-1-Rab1A重组表达载体,并制备了Rab1A多克隆抗体,通过酶联免疫(ELISA)检测抗体效价为1∶512000以上,Western blot检测显示抗体具有特异性。草鱼肝脏经微囊藻毒素-LR(MC-LR)染毒,发现25和75μg·g^(-1)感染96 h后对Rab1A基因和蛋白表达的影响不明显(P>0.05),但100μg·kg^(-1)可导致草鱼肝脏Rab1A基因和蛋白表达显著下降(P<0.05),表明Rab1A在参与草鱼抵御MC-LR胁迫过程中起着重要的作用。本研究为进一步了解Rab1A基因的功能及其在MC-LR胁迫过程中所发挥的作用奠定了基础。

Rab1A蛋白在胃腺癌组织中的表达情况及预后意义

目的探讨Rab1A蛋白在胃腺癌(Gastric adenocarcinoma,GAC)组织中表达情况以及其表达水平与患者预后的影响。方法组织芯片技术、免疫组化En Vision法检测Rab1A在平均随访5年的300例胃腺癌组织中表达水平。通过SPSS 17.0软件分析胃腺癌组织中Rab1A蛋白的表达情况与胃腺癌患者临床病理之间的关系,以及Rab1A蛋白表达水平对患者预后的影响。结果胃腺癌组织中Rab1A蛋白高表达率明显高于癌旁非癌胃组织(82.26%vs 31.43%,χ2=12.825,P=0.0016);在高-中分化(23.2%)、T1-3分期(31.5%)及临床分期Ⅰ~Ⅱ期(48.3%)胃腺癌组织中Rab1A蛋白高表达较低(P<0.05);生存(Kaplan-Meier法)分析显示,Rab1A蛋白表达低组比Rab1A蛋白表达高组的生存期明显延长,无进展生存期(Progression-free surial,PFS)及总生存期(Overall survival,OS)均延长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Rab1A蛋白高表达对胃腺癌的发生发展具有促进作用,可作为胃腺癌患者预后评估的重要指标及靶向治疗的潜在靶标。

Rab1A对多发性骨髓瘤细胞系8226增殖和凋亡的影响

目的探讨Rab1A对多发性骨髓瘤(MM)细胞系8226增殖和凋亡的影响。方法采用siRNA干扰Rab1A表达,将多发性骨髓瘤细胞8226分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组。其中空白对照组的多发性骨髓瘤细胞8226不做任何处理,阴性对照组的多发性骨髓瘤细胞8226转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。应用集落形成、CCK-8细胞增殖实验分析Rab1A对多发性骨髓瘤细胞8226增殖的影响。采用流式细胞技术检测多发性骨髓瘤细胞8226的凋亡情况。采用Western blotting和Real-time PCR技术检测Rab1A siRNA对c-Myc、cyclin D1、Bcl-2及Bax表达的影响。结果Rab1A siRNA组多发性骨髓瘤细胞8226的Rab1A mRNA和Rab1A蛋白的表达显著较阴性对照组下调;集落形成、CCK-8细胞增殖实验结果显示,Rab1A siRNA可抑制多发性骨髓瘤细胞8226增殖;Rab1A siRNA组多发性骨髓瘤细胞8226的凋亡比例显著较阴性对照组增加(P<0.01);Rab1A siRNA组c-Myc、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达量显著较阴性对照组下调(P<0.01),Bax蛋白水平的表达量显著较阴性对照组上调(P<0.01)。结论Rab1A可能通过调控c-Myc、cyclin D1、Bcl-2和Bax的表达促进多发性骨髓瘤细胞8226增殖,而Rabl A siRNA可有效抑制RPMI-8226细胞Rabl A的表达,从而抑制其增值,并促进凋亡。

肺肉瘤样癌高表达PD-L1、RAB1A及其临床意义

目的分析肺肉瘤样癌组织中程序性死亡配体1(PD-L1)、RAB1A的表达及其与临床特征及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测40例的肺肉瘤样癌组织、41例疾病对照(肺鳞癌、腺癌)组织中PD-L1、RAB1A的表达,分析其表达与肺肉瘤样癌患者预后的关系。结果肺肉瘤样癌、疾病对照两组之间PD-L1阳性率、RAB1A高表达率差异有统计学意义(67.5%vs.29.27%、70%vs.46.34%,P<0.05);多因素分析显示年龄、RAB1A(P<0.05)为肺肉瘤样癌患者预后PFS的独立影响因素,年龄和PD-L1(P<0.05)为肺肉瘤样癌患者OS的独立影响因素。结论肺肉瘤样癌组织中高表达PD-L1、RAB1A是肿瘤预后不良的独立危险因素,或许提示肺肉瘤样癌患者是免疫治疗的潜在受益人群。

RAB1A在晚期卵巢癌中的表达及与预后的关系

目的探讨晚期卵巢上皮癌患者RAB1A表达水平与患者预后之间的关系。方法收集2010年6月至2018年6月181例病理确诊的Ⅲ期或Ⅳ期卵巢癌患者病理标本。采用荧光定量PCR检测方法对癌组织中RAB1A的表达量进行检测,依据检测结果将患者分为两组(高表达组和低表达组),进一步分析RAB1A表达量与晚期卵巢癌患者临床特征及生存期之间的关系;通过检测RAB1A的表达为卵巢癌患者制定个体化治疗方案。结果RAB1A高表达与晚期上皮性卵巢癌患者年龄(P=0.009)、吸烟(P=0.010)、肿瘤临床分期(P=0.011)、是否淋巴结转移(P<0.001)、是否远端转移(P=0.014)有关;RAB1A高表达晚期卵巢癌患者生存期明显缩短(P<0.001)。结论RAB1A在卵巢癌中高表达,且高表达将缩短卵巢癌患者生存期。

miR-216a-5p靶向RAB1A基因调控食管癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

目的研究miR-216a-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法以正常食管上皮细胞Het-1A为对照,qRT-PCR和Western印迹检测食管癌细胞Eca109、EC9706和KYSE450中RAB1A和miR-216a-5p的表达,CCK8法和Transwell实验检测Eca109细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、人表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)、mTOR、p-EGFR、p-AKT和p-mTOR表达水平,双荧光素酶报告系统验证miR-216a-5p与RAB1A的调控关系。结果与正常食管上皮细胞Het-1A相比,在食管癌细胞Eca109、EC9706和KYSE450组中RAB1A mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),miR-216a-5p表达量显著降低(P<0.05);过表达miR-216a-5p可抑制Eca109细胞增殖、迁移和侵袭,抑制EGFR/AKT/mTOR通路;miR-216a-5p靶向调控RAB1A的表达(P<0.05);过表达RAB1A可减弱miR-216a-5p过表达对Eca109细胞生物学行为的作用(P<0.05)。结论miR-216a-5p靶向RAB1A基因可能通过EGFR/AKT/mTOR通路抑制Eca109细胞的增殖、迁移和侵袭,miR-216a-5p是食管癌的潜在分子靶点。

Rab1A对胶质瘤细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨Rab1A基因对胶质瘤U251和U87细胞增殖能力的影响及其相关机制。方法通过si-LentFect分别将Negative control siRNA、RablA siRNA转染入胶质瘤细胞；采用Westernblot法检测转染前、后胶质瘤细胞RablA蛋白的表达；应用CCK-8细胞增殖实验和EdU实验检测RablA siRNA对胶质瘤U251和U87细胞增殖的影响；采用Westernblot法分析RablA影响胶质瘤增殖的分子机制。结果下调Rab1A基因的表达对胶质瘤U251和U87细胞增殖能力具有明显抑制作用；Rab1A能够正调控核糖体s6蛋白激酶（S6Kinase，P70S6K）。结论Rab1AsiRNA能够有效抑制胶质瘤U251和U87细胞中Rab1A蛋白的表达。Rab1A基因可能通过正调控P70S6K促进胶质瘤U251和U87细胞增殖能力。

RAB1A在垂体腺瘤组织中的表达及临床意义

目的探讨RAB1A在垂体腺瘤(PA)组织中的表达及临床意义。方法收集2018年1月至2021年8月手术切除并经术后病理确诊的104例PA,根据Knosp分类法判断肿瘤侵袭性。用免疫组织化学染色法和免疫印迹法检测PA组织RAB1A的表达水平。结果104例PA中,侵袭性41例,非侵袭性63例。侵袭性PA组织RAB1A高表达率为[65.85%(27/41)]明显高于非侵袭性PA组织[36.51%(23/63);P<0.05]。侵袭性PA组织RAB1A蛋白相对表达量(2.87±0.54)明显高于非侵袭性PA组织([1.67±0.48);P<0.05]。多因素logistic回归分析显示RAB1A高表达(OR=1.908;95%CI 1.004~3.786;P=0.003)是PA侵袭性生长的独立影响因素。ROC曲线分析显示RAB1A鉴别PA侵袭性生长的曲线下面积为0.851,灵敏度、特异度分别为85.13%和79.12%。结论RAB1A的表达水平与PA的侵袭性有关,检测RAB1A可辅助评估PA的侵袭性。

circTHBS1调节miR-135a-5p/RAB1A轴对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响

该文旨在探究环状RNA血栓反应蛋白-1(circTHBS1)调节微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)/Rab家族蛋白1A(RAB1A)轴对乳腺癌(BC)细胞恶性生物学行为的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测BC细胞系中circTHBS1、miR-135a-5p和RAB1A mRNA的表达情况,筛选最佳细胞系进行后续实验;通过RNase R处理验证circTHBS1的环状结构。将MCF-7细胞分为Control组、sh-NC组、sh-THBS1组、sh-THBS1+inhibitor-NC组和sh-THBS1+miR-135a-5p inhibitor组。采用qRT-PCR检测转染效率;采用双荧光素酶报告基因法确认circTHBS1和miR-135a-5p、miR-135a-5p和RAB1A的相互作用;Western blot法检测RAB1A在MCF-7细胞中的表达情况;采用平板克隆法检测MCF-7细胞增殖情况;使用流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况;划痕实验检测MCF-7细胞迁移情况;Transwell法检测MCF-7细胞侵袭情况;通过裸鼠移植瘤实验检测circTHBS1对瘤组织内BC细胞生长的影响。双荧光素酶报告基因实验结果显示,circTHBS1与miR-135a-5p、RAB1A与miR-135a-5p均具有靶向关系。与正常人乳腺上皮细胞MCF-10A相比,circTHBS1和RAB1A在BC细胞系中表达水平显著增加,miR-135a-5p表达水平显著下降(P<0.05);敲低circTHBS1表达可以抑制MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导MCF-7细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-135a-5p表达可逆转敲低circTHBS1表达对MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用,并抑制MCF-7细胞凋亡(P<0.05);通过裸鼠移植瘤实验发现,敲低circTHBS1表达后,裸鼠BC瘤组织质量和体积下降,同时RAB1A表达量下降,miR-135a-5p表达量升高(P<0.05)。circTHBS1在BC细胞中高表达,敲低circTHBS1可以通过调控miR-135a-5p/RAB1A轴抑制BC细胞的恶性生物学行为。

食管鳞状细胞癌患者组织中RAB1A基因表达的相关研究及其临床意义

[目的]探讨RAB1A在食管鳞状细胞癌患者中的表达及其临床意义。[方法]采用实时荧光定量PCR检测课题组2013~2015年收集的126例确诊食管鳞状细胞癌患者的癌组织及对应癌旁正常组织中RAB1A的表达量,并根据其表达量高低分为高表达组和低表达组;分析RAB1A表达量与食管鳞状细胞癌患者临床特征、生存期之间的关系;通过过表达RAB1A的表达后检测其对食管鳞状细胞癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响。[结果]RAB1A在食管鳞状细胞癌组织中表达量高于对应癌旁正常组织(0.0113±0.0194 vs.0.0071±0.0098,P=0.0123);RAB1A高表达与食管鳞状细胞癌患者家族肿瘤史(P=0.002)、饮酒(P=0.005)、体质指数(P=0.001)、分期(P=0.024)、淋巴结转移(P<0.001)、远端转移(P<0.001)及分化程度(P<0.001)相关;RAB1A高表达与食管鳞状细胞癌患者生存期明显缩短(P<0.001)。RAB1A过表达后促进食管鳞状细胞癌细胞增殖(F=151.9,P<0.001)、transwell迁移(100.4±14.2 vs.51.2±10.6,P=0.009)、划痕实验迁移距离[(655.0±43.9)μmvs.(320.7±115.2)μm,P=0.0003]和transwell侵袭(79.2±13.4 vs.46.2±17.6,P=0.0014)。[结论]RAB1A在食管鳞状细胞癌中高表达,且高表达将缩短食管鳞状细胞癌患者生存期,过表达RAB1A能够促进食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。