Rab26诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制其迁移

目的研究调控Rab26蛋白表达对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法常规培养HeLa细胞,分别将含有Rab26 cDNA全长的真核表达载体(过表达组)、含有Rab26 siRNA序列的真核表达载体(siRNA组)瞬时转染HeLa细胞,同时设立正常细胞组及空载体转染组作为对照。转染48 h后,分别用RT-PCR和Western blot检测各组细胞中Rab26的mRNA及蛋白表达水平;采用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;同时采用划痕实验检测各组细胞迁移速度。结果与正常细胞组及空载体转染组相比,过表达组HeLa细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P<0.05),而siRNA组细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05),过表达组HeLa细胞凋亡率增高并抑制细胞迁移速度(P<0.01),siRNA组则促进细胞迁移(P<0.05)。结论 Rab26与HeLa细胞的凋亡及细胞迁移有关,故调控Rab26的表达有望成为治疗宫颈癌的新靶点。

甲醛在体外对HEK293细胞Rab26基因复制的影响

以HEK293细胞为材料,经不同浓度的甲醛(≥250μmol.L-1)染毒后,检测其DPC的含量,同时对染毒后HEK293基因组中的Rab26基因进行PCR扩增。结果表明:随着甲醛浓度的升高,DPC的含量显著升高;Rab26基因的扩增量随甲醛浓度的升高、DPC含量的升高而降低。说明高浓度甲醛能够诱导DPC产生,同时说明Rab26基因形成了DPC,因此,扩增量下调。

Rab26对TLR4介导的ARDS的作用及机制研究

目的探讨Rab26对TLR4所介导的急性呼吸窘迫综合征的作用及机制研究。方法实验选用健康野生级C57小鼠及敲除基因鼠(Rab26-/-),构建对照组(正常野生型C57小鼠+气管内滴注5 mg/kgLPS,n=10)、实验组(敲除基因鼠+气管内滴注5 mg/kg LPS,n=10),观察6 h后各小组小鼠经腹主动脉取动脉血进行血气分析并处死小鼠;酶联免疫吸附法检测血清炎性因子TNF-α、IL-6;留取小鼠肺组织称重计算肺干湿比(W/D比值);肺组织HE染色后做病理切片观察各组小鼠肺组织病理变化,并对肺损伤组织进行评分。结果在构建肺损伤模型后6 h,与对照组相比,实验组小鼠氧合指数、血清炎性因子TNF-α、IL-6水平明显下降(P<0.01);实验组小鼠肺组织的W/D值明显更高(P<0.01);病理切片结果显示,实验组小鼠肺组织破坏更重,肺泡壁充血水肿、肺泡萎陷不张更为显著,肺损伤评分明显高于对照组(P<0.01)。结论Rab26对TLR4所介导的ARDS炎性因子表达,以及激活下游信号通路有抑制作用,为将来急性肺损伤诊治的方向和重点进一步提供了研究依据。

RAB26通过激活β-catenin信号促进鼻咽癌细胞增殖

该文探讨了RAB26对鼻咽癌细胞增殖的影响及其机制。采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学实验检测鼻咽癌组织及正常鼻咽上皮组织RAB26 mRNA和蛋白表达水平,并将免疫组织化学方法检测的RAB26表达水平与患者临床病理特征进行统计分析。在鼻咽癌CNE-2细胞过表达RAB26、在HNE1细胞敲降RAB26,分别建立过表达以及敲降细胞系。利用CCK-8增殖实验、细胞克隆形成实验及EdU增殖实验检测过表达和敲降RAB26对鼻咽癌细胞增殖的影响;Western blot检测过表达和敲降RAB26的鼻咽癌细胞RAB26,Wnt/β-catenin信号中的β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin的蛋白水平及MAPK/ERK信号中的p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK的蛋白水平。细胞克隆形成实验检测CNE-2过表达RAB26细胞经不同照射剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy及8 Gy)X射线照射后的细胞活力。结果显示,RAB26在鼻咽癌中高表达;RAB26在鼻咽癌中的表达水平与肿瘤类型(r=0.294,P<0.05)和转移/复发(r=0.290,P<0.05)呈正相关;过表达RAB26后,CNE-2鼻咽癌细胞增殖加快,β-catenin、cyclin D1、c-Myc、survivin蛋白表达水平增加,p-p38 MAPK、p-ERK蛋白表达水平明显增高;敲低RAB26后则相反;过表达RAB26会降低鼻咽癌细胞的放射敏感性。综上,RAB26在鼻咽癌中高表达,并通过激活Wnt/β-catenin信号通路和MAPK/ERK信号通路促进鼻咽癌细胞增殖。

Rab26负性调控Nrf2增强肺癌耐药细胞对奥希替尼的敏感性

目的分析Rab26在奥希替尼耐药细胞中的表达及调控肺癌耐药细胞对奥希替尼敏感性的作用和机制。方法采用浓度梯度递增法诱导H1975细胞为奥希替尼耐药细胞株(H1975OR)。根据Western blot和qPCR检测H1975、H1975OR中Rab26与核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)mRNA及蛋白表达水平。对Rab26进行过表达慢病毒感染H1975OR细胞(Rab26 OE组)后给予1μM奥希替尼处理48 h,通过CCK-8和TUNEL判断细胞活力和凋亡情况,用流式细胞术检测细胞ROS水平。用Western blot检测H1975和H1975OR中Nrf2蛋白经10 mM MG132处理8 h后的表达水平。对Nrf2进行siRNA转染H1975OR细胞后给予1μM奥希替尼处理48 h,通过CCK-8判断细胞活力,利用流式细胞术检测细胞ROS水平。结果H1975OR中Rab26 mRNA和蛋白表达低于H1975细胞(P<0.05),H1975OR中Nrf2蛋白表达高于H1975细胞(P<0.05),H1975OR组和H1975组之间的mRNA水平差异无统计学意义(P>0.05)。奥希替尼干预后Rab26 OE组的细胞活力低于Vector组,ROS水平和凋亡水平较Vector组升高(P<0.05)。Rab26 OE组中Nrf2蛋白表达水平较Vector组降低,两组间Nrf2 mRNA差异无统计学意义(P>0.05)。经MG132处理,Nrf2蛋白水平在Vector组和Rab26 OE组中升高(P>0.05)。敲低Nrf2,奥希替尼干预增加H1975OR细胞中ROS水平,抑制其细胞活力。结论Rab26可负性调控Nrf2蛋白表达,促进奥希替尼诱导的ROS的过度产生,促进细胞凋亡,增强肺癌耐药细胞对奥希替尼的敏感性。

人Rab26基因的克隆和表达

以完整EST为参考序列设计引物,以人的胎脑cDNA为模板,用PCR方法筛选获得Rab26基因全长序列,并亚克隆到载体pGEM-T,真核表达载体pEGFP-N1和原核表达载体pET-32a(+)中.RT-PCR显示该基因在不同组织的肿瘤细胞株中表达量有明显的差异.把Rab26基因转染入HeLa细胞中,通过与绿色荧光蛋白(GFP)基因融合表达,显示Rab26定位于胞内膜性细胞器上.在大肠杆菌表达系统获得Rab26基因的高表达.这些结果为进一步研究Rab26基因在细胞内吞和运输功能等方面打下了基础.

Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响

目的探讨Rab26对小细胞肺癌H446细胞增殖和迁移的影响。方法设立Rab26质粒过表达组及Rab26 siRNA组,培养H446细胞,分别将含有Rab26过表达质粒和Rab26 siRNA瞬时转染H446细胞,同时设立空白对照组。48 h后,流式细胞仪检测转染效率,同时检测每组细胞中Rab26在mRNA及蛋白水平表达情况; MTT检测每组细胞的增殖情况,划痕试验观察每组细胞迁移的速度。结果Rab26过表达质粒组转染效率为(76.8±4.3)%,Rab26 siRNA组转染效率为(79.5±3.57)%,均为有效转染;转染48 h后,发现Rab26质粒过表达组中Rab26在mRNA和蛋白水平均较空白对照组表达水平显著上调(P<0.05),siRNA组结果显示Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.05); MTT检测结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞活力分别为(56.4±3.23)%、(100±4.31)%; Rab26质粒过表达组细胞活力分别为(42.5±3.59)%、(62. 3±2. 97)%; Rab26 siRNA组细胞活力分别为(75±3. 86)%、(123.4±5.66)%,即Rab26质粒过表达组细胞活力较空白组显著降低(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞活力较空白组显著升高(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的增殖;划痕实验结果显示转染24 h和48 h后,空白对照组细胞迁移率分别为(0.53±0.03)μm/min、(0.32±0.04)μm/min; Rab26质粒过表达组细胞迁移率分别为(0.21±0.04)μm/min、(0.22±0.04)μm/min; Rab26 siRNA组细胞迁移率分别为(0.61±0.02)μm/min、(0.42±0.03)μm/min,即Rab26质粒过表达组细胞迁移率较空白组显著较少(P<0.05),而Rab26 siRNA组细胞迁移率较空白组显著增加(P<0.05),Rab26可抑制H446细胞的迁移。结论 Rab26可抑制小细胞肺癌H446细胞的增殖和迁移,故调控Rab26的表达有望成为小细胞肺癌治疗的新靶点。

一个新的人Rb26基因cDNA的克隆、表达及其增强细胞吞噬功能研究(英文)

RabGTPase家族成员基因及其调节囊泡膜运输途径功能已有许多报道,但Rab26蛋白分子的结构和功能仍不清晰.通过生物信息学分析,并在人脑cDNA文库中克隆了一个新的Rab26基因全长cDNA序列,长1656bp,与已发表的基因序列相比,在48～50位插入了GCC,在956位T被C取代,而在1197位G被A取代.该序列包含一个771bp完整的开放阅读框(ORF),编码256个氨基酸残基的Rab26蛋白,分子质量为27.9ku(GenBank登录号No.AY646153),而非如以往报告的190个氨基酸残基.GFP荧光标记全长Rb26在哺乳动物细胞中表达显示,Rab26主要呈现在细胞膜状结构相联系的分布,发现该基因高表达能显著增强PE标记的红色异源蛋白质的吞噬.还应用逆转录-聚合酶链反应对多种人肿瘤细胞Rb26表达进行了研究,结果显示,Rab26在Acc2、SPC-A1,K562以及HeLa等肿瘤细胞株呈高表达,而在SMMOL/LC-7721、HepG2、Caco2等肝和肠上皮细胞株中则不表达,值得进一步深入研究.