三阴乳腺癌组织中TUFT1和Rab5-GTP的表达水平及临床意义

目的研究三阴乳腺癌(TNBC)组织中TUFT1和Rab5-GTP的表达水平,分析两种蛋白表达的相关性及TUFT1与患者临床病理特征的关系。方法选取2021年3月至2021年12月住院手术的TNBC患者80例,收集其癌组织。免疫组化法检测TUFT1和Rab5-GTP在癌组织中的表达情况,分析两种蛋白表达的相关性;评估TUFT1与TNBC患者临床病理特征之间的关系。结果在TNBC组织中,观察到TUFT1主要在癌细胞胞膜上和胞质内均有染色,以胞质内染色最强,Rab5-GTP在胞质内染色,两种蛋白的表达呈正相关(P<0.05);TUFT1表达与患者年龄无关(P>0.05),而与肿瘤大小、组织学分级、腋窝淋巴结转移均呈正相关(均P<0.05)。结论TUFT1和Rab5-GTP的表达水平与三阴乳腺癌病程的进展关系密切。

水稻rab5B基因在大肠杆菌中的表达、纯化和GTP结合分析

Rab5B类蛋白因为其编码产物的N端具有特殊结构而被认为是一类特殊的蛋白质 .水稻rab5B基因Osrab5B是这类蛋白质基因在单子叶植物中的首例发现 .将Osrab5B基因的编码序列按正确读码框重组到具有谷胱甘肽硫转移酶 (glutathioneS transferase,GST)融合标签的 pGEX 4T1表达载体中 ,转化大肠杆菌 ,获得了稳定表达目标融合蛋白的菌株 ,经GSTrapTM 柱纯化 ,获得了纯化的目标融合蛋白 .GTP结合试验表明 ,在原核细胞中表达出的GST

一个与非小细胞肺癌转移相关的基因——RAB5A基因

采用ｍ Ｒ Ｎ Ａ 差异展示技术 （ ｍ Ｒ Ｎ Ａ Ｄ Ｄ） 研究具有相同细胞来源， 但转移能力高低不同的人肺腺癌细胞系 Ａ Ｇ Ｚ Ｙ８３ － ａ （ 低转移） 和 Ａｎｉｐ９７３ （ 高转移） ， 分析在两个细胞系中基因差异表达的情况，发现在高转移细胞系中有 Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 基因的表达。该基因为蛋白质入胞信号的调控者， 为 Ｒ Ａ Ｓ 超家族成员。为进一步证实其转录表达的调控改变情况， 以及 Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 高表达的临床意义， 进一步采用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 和免疫组织化学的方法检测了５０ 例临床非小细胞肺癌的手术标本， 结果表明， Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 的表达有随转移发生而增强的趋势， 而 Ｒ Ａ Ｂ５ Ａ 的蛋白表达程度在有转移的病例中明显增强 （ Ｐ＜ ００５） 。

大肠癌组织RAB5A和CD44v9表达的意义

目的:探讨大肠癌组织RAB5A和CD44v9表达的意义．方法:应用SP免疫组化法检测43例大肠癌病理蜡块中RAB5A和CD44v9的蛋白质表达;取 60例大肠癌患者新鲜组织标本,提取RNA并逆转录合成cDNA,应用Real-time PCR法检测组织样本中RAB5A和CD44v9的基因表达;分析CD44v9和RAB5A的基因与蛋白质表达量与大肠癌分化及转移程度的相关性．结果:RAB5A蛋白表达阳性率为100％,阳性表达位于胞质和胞膜;CD44v9表达阳性率为 86．7％,阳性表达位于胞质;荧光定量PCR结果经熔解曲线分析各样本扩增产物的Tm值一致并与阳性对照的Tm值吻合．RAB5A cDNA 的表达量在高分化和中分化大肠癌组织中低于低分化大肠癌组织(P<0．01),在无淋巴结转移的大肠癌组织中低于有淋巴结转移的组织(P<0．01),而CD44v9 cDNA的表达趋势与 RAB5A相同;RAB5A与CD44v9的蛋白和基因表达均呈正相关(x2=14．532,P<0．01)．结论:RAB5A和CD44v9的表达与大肠癌的分化和转移有关,可能在跨膜信号传导和基质侵袭中共同发挥作用．

Rab5a促进CpG诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达

目的:采用稳定表达Rab5a及其显性负性突变体Rab5a N133I的巨噬细胞系RAW264.7,研究Rab5a及其突变体过表达后对Cp G诱导的炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达的影响。方法:通过脂质体法将Rab5a及其突变体Rab5a N133I的真核表达载体转染到RAW264.7细胞中,用G418选择性培养基进行筛选,建立稳定表达Rab5a、Rab5a N133I的细胞系。通过RT-PCR、Real time-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达的细胞系。用Cp G刺激稳定表达Rab5a、Rab5a N133I的细胞系8 h后检测细胞因子TNF-α、IL-1β和IFN-β的表达量变化。结果:RAW264.7转染Rab5a真核表达载体后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞(P<0.05)。Rab5a过表达后,在Cp G刺激作用下RAW264.7分泌的TNF-α、IL-1β显著升高(P<0.01),IFN-β的分泌也显著升高(P<0.05),而Rab5a N133I过表达后上述细胞因子的分泌均有所恢复。结论:Rab5a促进了Cp G诱导的巨噬细胞中炎性细胞因子和Ⅰ型干扰素的表达,Rab5a可能是TLR9信号通路的正向调控蛋白。

rab5a基因在肿瘤转移中的作用研究

为研究rab5a基因在肿瘤转移机制中的作用,将该基因稳定转染至低转移肺腺癌细胞系AGZY83-a中,采用Superarray肿瘤转移相关基因微芯片分析rab5a对肿瘤转移相关基因的表达影响。共获得了5个差异表达基因,rab5a基因促进s100a4的表达,同时抑制了nm23ar、ac1、cst3、col4a2等基因的表达,并分别在RNA及蛋白水平进行验证,确认rab5a基因影响了肿瘤转移的多个途径,促进了肿瘤细胞转移能力增强。

RAB5A正义表达载体对两种人肺腺癌细胞系粘附基底膜成份能力的影响

目的 RAB5A基因过表达与人肺腺癌细胞系Anip 973的高转移性相关 ,进一步确认该基因在人低转移肺腺癌细胞系SPC a1和人低分化肺腺癌细胞系GLC 82中的作用。方法 采用癌细胞粘附基底膜成分的测定方法 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的SPC a1、GLC 82两种肺腺癌细胞系的侵袭能力的改变。结果 RAB5A正义表达载体PcDNA3 .1 RAB5A转染的SPC a1较未转染细胞与基底膜成分粘附能力明显增强 ,t检验P <0 0 1;GLC 82细胞的侵袭能力作用不明显。

胃癌组织中RAB5A蛋白的表达及其与转移的关系

［目的］检测RABSA蛋白在胃癌组织中的表达及其与转移的关系。[方法]应用免疫组化SP方法检测47例胃癌石蜡包埋标本及7例正常胃组织中RAB5A蛋白的表达情况。［结果］正常胃组织中RAB5A蛋白表达的阳性率为0（0／7）；胃癌组织中RAB5A蛋白表达的阳性率为91．49％（43／47），两者的阳性率有显著性差异（P＜0．005）。有无淋巴结转移者的RAB5A蛋白表达的阳性率分别为91．89％（34／37）和90％（9／10），无显著性差异（P＞0．05），但两者RAB5A蛋白的表达程度有显著性差异（P＜0．05）。［结论］RAB5A蛋白的胃癌组织中高表达，且RAB5A蛋白的表达程度与胃癌转移有关。提示RAB5A可能是一个转移相关基因。

定向克隆构建RAB5A基因真核细胞表达载体

目的 探讨RAB5A作为蛋白质入胞信号传导调控者在肿瘤转移中的作用及影响。方法 采用双酶切、定向克隆技术建立了人RAB5A基因真核细胞表达载体pcDNA3.1(- ) -RAB5A。结果 测序分析证实了RAB5A基因正向插入pcDNA3.1(- )表达载体 ;免疫组化分析表明转染了pcDNA3.1(- ) -RAB5A表达载体的AGZY83 a细胞系细胞内的荧光亮度明显强于转染前 ,蛋白电泳显示近 2 3KD的蛋白质含量增高 ,表明重组质粒在细胞内工作良好。结论 双酶切。

RAB5A对人肺腺癌细胞系侵袭转移作用的研究

目的 探讨RAB5A基因在人肺腺癌细胞系侵袭和转移中的作用。方法 采用体外重建基底膜侵袭实验和癌细胞粘附能力、癌细胞趋化性运动能力、癌细胞分泌明胶酶的能力及活性的测定 ,分析RAB5A正义真核表达载体转染后的AGZY83 a和反义RNA转染后的Anip973细胞的侵袭、转移能力的改变。结果 RAB5A正义表达载体PcDNA3.1 RAB5A转染的AGZY83 a重建基底膜侵袭能力明显增强 ,统计学意义显著 (P <0 .0 0 0 5 ) ,细胞趋化性运动能力显著增高 (P <0 .0 0 0 5 ) ,对基底膜成分的粘附能力增大 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌及活性增强等一系列趋向Anip973的变化。PcDNA3 AntiRAB5A反义RNA表达载体对Anip973重建基底膜侵袭力明显下降 (P <0 .0 0 2 5 ) ,趋化性运动能力显著降低 (P <0 .0 0 5 ) ,对基底膜成分粘附能力降低 (P <0 .0 5 ) ,以及明胶酶分泌减少等一系列趋向AGZY83 a的变化。结论 RAB5A在肺腺癌侵袭转移表型形成中发挥重要的作用。

稻瘟病菌Rab5蛋白的表达及互作蛋白的初步筛选

Rab5是Rab蛋白家族成员之一,它主要负责调控胞吞作用中囊泡与早期内含体的融合。通过构建MoRab5的原核表达载体,成功诱导了pET-28a-MoRab5融合蛋白的表达,并获得了纯化蛋白,通过His Pulldown检测到一些可能与Rab5互作的蛋白。

siRNAs表达载体沉默RAB5A基因的位置效应研究

目的研究小干扰RNA(siRNAs)表达载体沉默RAB5A基因的位置效应,寻找沉默RAB5A基因的最佳作用靶点。方法利用MFold软件分析RAB5A mRNA的二级结构,构建针对RAB5A mRNA不同位点的siRNAs表达载体,转染Anip973细胞后,通过RT-PCR和Western-blot方法评价siRNAs对RAB5A基因表达的抑制作用。结果针对RAB5A mRNA编码区内最可及位点设计的siRNAs分别抑制72％和85％的RAB5A基因表达,而针对最不可及位点设计的siRNAs则完全没有活性;非编码区内也存在沉默RAB5A基因的siRNAs有效作用靶点;siRNAs分子与RAB5A mRNA靶序列之间引入2个错配碱基时,siRNAs的抑制活性完全丧失。结论MFold软件分析的RAB5A mRNA二级结构可以作为分析和寻找可及位点的依据,siRNAs的作用效率与RAB5A mRNA靶位点的可及性密切相关。

RAB5A蛋白G81R位点突变对其功能的影响

为探讨G81R位点突变对RAB5A蛋白功能的影响 ,将RAB5AG81R突变体和正常RAB5A反义RNA分别插入pcDNA3 1 V5 His TOPO真核表达载体 ,并转染到Anip973细胞。用Westernblot方法检测稳定转染后细胞RAB5A蛋白的表达水平 ,通过血清饥饿法使Anip973和转染后的细胞同步化 ,停滞于G0 ～G1 期 ,再恢复血清培养使细胞从G0 ～G1 期释放 ,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分比。结果显示RAB5AG81R突变体的反义RNA可完全封闭Anip973细胞中RAB5A的表达 ,正常RAB5A反义RNA部分封闭RAB5A表达。并且 ,Anip973细胞周期的长短与RAB5A的表达程度成反比。RAB5AG81R反义RNA能够有效地阻断Anip973细胞中RAB5A蛋白的表达。

RAB5A基因与结肠癌发生、转移的相关因素研究

目的:研究RAB5A基因表达与结肠癌发生、转移的关系。方法:应用免疫组化技术检测42例结肠癌标本RAB5A基因的表达。结果:结肠癌中RAB5A的表达与组织学分型、分化、淋巴结转移均有明显关系(χ2=3.96～6.73,P<0.05)。结论:RAB5A是一个可能与结肠癌发生、转移相关的基因,并且还可能与它们的分化程度有关。

RAB5A基因对肺腺癌细胞微丝的影响(英文)

为研究RAB5A基因对肺腺癌细胞中微丝的影响,通过FITC标记的鬼笔环肽对AGZY83a细胞骨架中的微丝特异染色,利用共聚焦激光扫描显微镜发现RAB5A过表达后微丝束变密。经Superarray肿瘤转移相关基因微芯片分析RAB5A对肿瘤转移相关基因的表达影响,发现了3个与细胞骨架调节相关基因表达发生变化,NM23H1与Rac1的表达受到抑制,同时S100A4的表达增加。以前有研究认为S100A4基因可抑制NM23H1基因表达,为验证NM23H1基因的表达降低是否由于S100A4表达增高所致,利用RNAi沉默AGZY83a细胞中S100A4基因的表达,发现NM23H1基因表达增高,由此推断RAB5A基因可能通过上调S100A4基因表达来抑制NM23H1基因表达。

Rab5a促进LPS活化的巨噬细胞中细胞因子的表达

目的:建立稳定表达Rab5a及其失活突变体Rab5a N133I巨噬细胞系,并分析Rab5a对LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞中i NOS、TNF-α和IL-6表达的影响。方法:将Rab5a及其失活突变载体Rab5a N133I转染RAW264.7细胞,通过G418筛选稳定表达细胞系。通过Real-time PCR鉴定稳定表达细胞系。MTT法分析其生长特性,LPS刺激稳定表达细胞系不同时间,检测i NOS、TNF-α和IL-6的表达水平。结果:转染Rab5a/Rab5a N133I细胞Rab5a mRNA水平显著高于对照(P<0.05)。Rab5a过表达促进RAW264.7细胞增殖,而过表达Rab5a N133I细胞增殖显著慢于对照(P<0.05)。Rab5a过表达后,LPS诱导的RAW264.7细胞中i NOS、TNF-α和IL-6的表达显著增高(P<0.01)。然而,过表达Rab5a N133I对LPS诱导的i NOS、TNF-α和IL-6的表达没有显著影响。结论:Rab5a过表达显著促进了LPS活化的RAW264.7细胞中i NOS、TNF-α和IL-6的表达,这种促进作用依赖于其结合GTP的能力。

RAB5A蛋白的研究进展

RAB5 A为 RAB家族成员之一 ,主管囊泡融合和囊泡再循环。自 1994年 RAB5被发现以来 ,人们逐渐认识到RAB5在细胞物质运输中起重要作用。而于 1999年以后 ,关于 RAB5 A的研究有大量报道 ,不但对其功能有了更深入的了解 ,而且对它的突变体和异构体均有一定的探讨。本文对 RAB5 A蛋白的结构、效应因子。

RAB5A基因表达改变对人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-a1的分化和侵袭特性影响

为探讨RAB5A基因对两种人肺腺癌细胞系GLC 82和SPC al分化及侵袭特性的影响 ,利用细胞转染技术将构建的RAB5A反义RNA重组质粒 (pcDNA3 AntiRAB5A)和RAB5A正义真核表达载体分别转染入低分化人肺腺癌细胞系GLC 82和低转移人肺腺癌细胞系SPC al中 ,在稳定筛选后 ,通过裸鼠体内实验和体外人工基底膜侵袭和细胞趋化运动实验 ,观察转染后细胞分化和转移特性的改变。观察转染前后细胞 ,发现转染后GLC 82细胞体外侵袭重组基底膜能力及趋化运动能力降低 (t检验P <0 .0 2 ) ;裸鼠体内成瘤实验 ,瘤块切片病理观察转染后GLC 82细胞出现腺腔样及基底模样结构 ,分化程度增高。转染后SPC al细胞体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力均增强 (t检验P <0 .0 2 )。RAB5A基因通过影响细胞的体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力等对GLC 82和SPC al细胞的侵袭转移表型形成及GLC 82细胞的分化性发挥重要作用。

宫颈鳞癌EGFR、Rab5a、Rab21蛋白表达与其临床特征及近期疗效的相关性研究

目的探讨宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinomas,CSCC)组织中表皮生长因子受体(EGFR)、Rab5a、Rab21蛋白表达及其与临床特征及近期疗效的关系,评估EGFR、Rab5a、Rab21蛋白在CSCC进展、转移及近期疗效中的价值。方法收集60例CSCC组织标本,采用免疫组织化学法检测EGFR、Rab5a、Rab21蛋白表达情况。采用卡方或确切概率法、非参数Spearman等级相关、多因素Logistic回归分析法分析其与临床特征及近期疗效的相关性。结果 EGFR、Rab5a、Rab21蛋白阳性表达率分别为70.0%、73.3%、55.0%,EGFR、Rab5a、Rab21蛋白表达均与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),EGFR蛋白表达与临床分期有关(P=0.005),Rab21蛋白表达与肿瘤直径有关(P=0.044);Spearman等级相关分析显示:EGFR与Rab5a蛋白表达水平呈正相关(r=0.428,P=0.001),EGFR与Rab21蛋白表达水平呈负相关(r=-0.300,P=0.020);EGFR、Rab5a、Rab21蛋白表达均不是影响近期疗效的独立因素(P>0.05),EGFR、Rab5a、Rab21蛋白表达对客观有效率RR无明显影响(P>0.05)。结论 EGFR蛋白表达可能为CSCC高危进展的参考指标;Rab5a在EGFR介导的信号传导通路中可能发挥正性调节作用;Rab21在EGFR介导的信号传导通路中可能发挥负性调节作用。