Rab7蛋白参与了BLP耐受巨噬细胞对细菌清除能力增强的过程

目的:探讨Rab GTP酶是否参与了对细菌脂蛋白(BLP)耐受的骨髓诱导分化巨噬细胞(BMDMs)杀菌能力增强的过程。方法:首先利用real-time PCR比较BLP耐受巨噬细胞和非耐受细胞中Rab5a、Rab5b、Rab7、Rab9、Rab9b、Rab11a、Rab11b、Rab12、Rab32和Rab34的表达变化,筛选出水平升高的Rab7分子;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达是否在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后继续升高;接下来用RNAi技术下调BLP耐受巨噬细胞Rab7表达,观察细胞对细菌的吞噬能力及杀灭能力的影响。结果:在检测的10个Rab GTP酶中,Rab7在BLP耐受BMDMs的mRNA水平升高,是非耐受细胞的1.4倍;进一步用real-time PCR和Western blot实验证实Rab7的mRNA和蛋白表达在BLP耐受细胞感染大肠杆菌后,随着时间延长均明显升高;下调Rab7表达不影响BLP耐受巨噬细胞对细菌的吞噬能力,但是显著降低其对细菌的杀灭能力。结论:BLP耐受通过上调巨噬细胞Rab7的表达,在增强巨噬细胞对细菌的杀灭过程中发挥重要作用。

生物信息学分析萝卜硫素上调RAB7交互溶酶体蛋白与非小细胞肺癌细胞自噬的关联

目的研究萝卜硫素(sulforaphane,SFN)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞自噬溶酶体形成的机制。方法利用免疫荧光共聚焦技术观察溶酶体在非小细胞肺癌细胞A549中的亚细胞定位;使用高效液相色谱与质谱联用分析SFN(20μmol/L)处理A549细胞后蛋白质组的表达差异;分别使用不同浓度的SFN(0,10,20,30μmol/L)处理人非小细胞肺癌A549细胞,通过蛋白免疫印迹技术检测RILP蛋白的表达。利用TCGA及UNLCAN数据库分析肺癌组织与癌旁组织中RAB7交互溶酶体蛋白(RILP)及ATP6V0D1蛋白的差异表达;利用ONCOLNC数据库分析RILP及ATP6V0D1与肺癌患者生存期的关联;利用TCGA数据库分析在肺腺癌和肺鳞癌组织中RILP与自噬相关蛋白LC3Ⅱ、RILP与ATP6V0D1、ATP6V0D1与LC3Ⅱ的相关性;利用STRING数据库分析RILP蛋白与微管蛋白TUBB/TUBA1A、LC3Ⅱ间的相互作用。结果在SFN处理的A549细胞中观察到溶酶体发生核周聚集。液相色谱和质谱联用分析表明:在SFN处理的A549细胞中,380个蛋白表达上调,278个蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。蛋白免疫印迹结果显示:随着SFN浓度(0,10,20,30μmol/L)的升高,RILP的表达显著上升(P<0.05)。TCGA数据库结果显示:RILP、ATP6V0D1蛋白在非小细胞肺癌组织中低表达(P<0.05)。与高表达RILP、ATP6V0D1蛋白的患者相比,低表达RILP、ATP6V0D1蛋白的肺癌患者生存期短(P<0.05)。STRING数据库结果显示RILP蛋白与微管蛋白TUBB/TUBA1A以及自噬相关蛋白LC3Ⅱ相互作用。同时,TCGA数据库显示在肺腺癌和肺鳞癌组织中,RILP蛋白与ATP6V0D1蛋白的表达呈正相关(P<0.01),RILP蛋白与LC3Ⅱ蛋白的表达呈正相关(P<0.01),ATP6V0D1蛋白与LC3Ⅱ蛋白的表达呈正相关(P<0.01)。结论SFN通过上调RILP的表达,从而加强RILP与溶酶体ATP6V0D1蛋白及LC3Ⅱ的关联,抑制非小细胞肺癌细胞自噬溶酶体形成。

LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症患者的突变分析

为了分析LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因在中国人腓骨肌萎缩症(Charcot-Marie-Tooth disease,CMT)的突变特点,文章分别应用PCR结合DNA序列分析方法和PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合DNA序列分析方法对6个常染色体显性遗传家系先证者和27个散发病例进行LITAF和RAB7基因突变分析;应用PCR-SSCP结合DNA序列分析方法对14个常染色体遗传的CMT家系先证者和27个散发患者进行LMNA和MTMR2基因突变分析。结果发现:LITAF基因c.269G→A、c.274A→G序列变异和LMNA基因c.1243G→A、c.1910C→T序列变异,未发现RAB7和MTMR2基因的序列变异。其中LITAF基因c.269G→A、LMNA基因c.1243G→A和c.1910C→T为新发现的单核苷酸多态;LITAF基因c.274A→G为已知多态。说明LITAF、RAB7、LMNA和MTMR2基因突变在中国人CMT患者中罕见。

胎膜早破与GBS感染和胎膜Rab7b、Smad3表达的关系

目的探讨胎膜早破孕妇B族链球菌(GBS)感染情况及胎膜Rab蛋白7b(Rab7b)、Smad同源物3(Smad3)的表达。方法选取2018年11月-2020年11月于新乡市中心医院住院分娩的胎膜早破孕妇94例为研究组,同期住院正常分娩的孕妇64名为对照组,分析两组孕妇GBS携带情况;采用免疫组织化学法检测胎膜组织中Rab7b表达,免疫印迹法(WB)检测Smad3表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中C-反应蛋白(CRP)水平。结果研究组GBS检出率为34.04%,高于对照组的检出率15.62%(P<0.05);Rab7b蛋白在两组孕妇胎膜组织中均未见表达;研究组Smad3蛋白相对表达量为(1.24±0.15)低于对照组(t=12.888,P<0.001);胎盘绒毛膜羊膜炎在研究组中的发生率高于对照组(P<0.05);CRP在研究组中测定阳性率为82.98%,显著高于对照组的阳性率18.75%(P<0.05)。结论GBS感染与胎膜早破的发生有关,在胎膜早破孕妇胎膜中Smad3含量呈低表达,血清中CRP表达水平升高。