SPLENIC AUTOTRANSPLANTATION IN RABBITS: NO RESTORATION OF RESPONSE TO HOST DEFENSE

Objective:To explore the effectiveness of splenic tissue autotransplantation in restoring host defense. Methods: Rabbits were divided into three groups,Sham Operation(SO), Splenic Autotransplantation(SA)and Total Splenectomy(TS) ,and dynamic changes in histology and immunology were observed for over 24 weeks. Results: Histologic study shows that the white pulps were poorly developed and central arterioles disappeared in the regenerated splenic tissue. The weight of regenerated spleens recovered six months later in SA was 11% of that in SO, and was significantly reduced comparing with the implanted weight(P<0.05).Tere were no significant difference in the number of T lymphocytes and the levels of serum lysozyme among the three groups. A poor antibody response by the rabbits of SA and TS as compared to those of SO was noted after the primary intravenous administration with sheep red blood cells. After the challenge with type 3 pneumococci intravenously, pneumococcal clearance from bloodstream in SA did not

硒代蛋氨酸对黄曲霉毒素B_(1)致兔脾脏损伤的保护作用

【目的】旨在探究硒代蛋氨酸(selenomethionine,SeMet)对黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))致家兔脾脏损伤的保护作用。【方法】选取50只35日龄家兔,随机分为5组,每组10只,分别为对照组(基础饲粮)、模型组(0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮)、Se-1组(0.2 mg/kg SeMet+0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮)、Se-2组(0.4 mg/kg SeMet+0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮)、Se-3组(0.6 mg/kg SeMet+0.3 mg/kg BW AFB_(1)+基础饲粮),试验期共21 d。试验结束后取脾脏,通过HE染色观察脾脏组织形态学变化、免疫组化染色观察PCNA蛋白表达量和TUNEL染色观察细胞凋亡率,并检测脾脏组织中氧化应激水平和炎性因子的含量。【结果】与对照组相比,模型组家兔脾脏可见红髓与白髓排列紊乱,淋巴细胞数量明显减少,PCNA蛋白的表达降低并出现大量凋亡细胞。与模型组相比,饲料中添加SeMet可明显改善家兔AFB_(1)中毒引起的脾脏病理损伤;同时提高了脾脏组织中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性(P<0.01),降低了丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β含量(P<0.01),有效缓解了AFB_(1)中毒引起的氧化应激和炎症反应。【结论】饲料中添加SeMet可以通过提高抗氧化酶的活性,降低炎性因子的表达,有效改善AFB_(1)引起的家兔脾脏损伤。其中以0.2 mg/kg SeMet的缓解效果最佳。

基于肠道菌群调节研究桂枝加葛根汤治疗颈型颈椎病家兔作用机制

目的:基于肠道菌群(IF)调节研究桂枝加葛根汤治疗颈型颈椎病(NTCS)家兔的作用机制。方法:将9只家兔随机分成空白组、模型组、桂枝加葛根汤组3组,每组各3只。空白组不造模,其余2组均制成脾虚证NTCS家兔模型。空白组和模型组不予给药,桂枝加葛根汤组以桂枝加葛根汤药液按10 mL/kg灌胃。每天1次,连续给药7 d。以16 SrRNA基因高通量测序法检测家兔IF丰度;以酶联免疫吸附测定法(ELISA)行直肠、迷走神经、下丘脑和颈交感干中血管活性肠多肽(VIP)、神经肽Y(NPY)的检测及斜方肌、C_(3~5)椎间盘组织中脂多糖(LPS)的检测。以Pearson分析检测IF丰度与相应各组织中VIP、NPY及LPS的相关性。结果:最终纳入统计,空白组3只,模型组3只,桂枝加葛根汤组3只。造模后,模型组与空白组厚壁菌门与拟杆菌门的丰度,差异有统计学意义(P<0.05),提示家兔IF失调已形成。给药后,中药组与模型组厚壁菌门与拟杆菌门2种菌群丰度分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05),提示中药能有效改变菌群丰度,恢复正常的厚壁菌/拟杆菌比例。与空白组比较,模型组VIP和NPY在直肠、迷走神经、下丘脑和颈交感神经干中的含量均明显升高,LPS在斜方肌和C_(3~5)椎间盘组织中含量亦明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,中药组上述各指标含量均明显降低(P<0.05)。各相应组织中VIP、NPY及LPS的水平变化与厚壁菌群丰度呈正相关性(P<0.01),而与拟杆菌群丰度呈负相关性(P<0.05)。结论:IF失调与NTCS存在密切相关性。在NTCS发病过程中,IF失调可通过菌-肠-脑-颈交感轴将促炎物质VIP、NPY及LPS等损伤信号上传至颈部,从而促进颈部软组织诸如斜方肌和颈椎间盘组织内的免疫炎症反应。而桂枝加葛根汤则具有IF调节作用,即通过恢复正常菌群比例,抑制有害信号在菌-肠-脑-颈交感轴内上传,从而消除颈周软组织的炎症反应以达止痛效果。

WHBE兔脾虚型肠易激综合征模型的建立

目的用WHBE兔建立脾虚型IBS模型,为脾虚型肠易激综合征(IBS)的药物开发和基础研究提供工具。方法取WHBE兔和日本大耳白兔各18只,分别随机分成两组,即正常对照组6只,模型组12只,采用湿热应激加灌服番泻叶煎剂的方法造成脾虚证肠易激综合征(IBS)兔模型,其中模型组造模后处理6只,剩余兔自然恢复10d,观察实验兔的临床症状、体重、腹围指数、粪便含水量、胸腺指数、脾脏指数、内脏敏感性以及小肠推进率等变化。结果与正常对照组比较,模型组实验兔体重、胸腺指数、脾脏指数均明显降低(P<0.05,P<0.01),腹围指数、粪便含水量、内脏敏感性以及小肠推进率明显升高(P<0.05,P<0.01),且恢复较为缓慢。结论脾虚型IBS兔模型符合IBS临床发病特点,而WHBE兔是较适合于脾虚证IBS模型研究的理想的实验动物。

猪瘟兔化弱毒免疫猪淋巴细胞亚类及转化水平、IFN-γ的变化与分析

为研究免疫猪瘟兔化弱毒(HCLV)对猪细胞免疫应答的影响,本研究分别采用HCLV脾淋毒单独(A组)、HCLV细胞毒与兔脾淋组织液联合(B组)、HCLV细胞毒单独(C组)及生理盐水(对照组)免疫仔猪,应用流式细胞术、淋巴细胞增殖试验及ELISA方法测定免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)亚类比值、PBL非特异性(NSI)及特异性(SSI)刺激指数、IFN-γ浓度。结果显示免疫后各组CD3+/PBL与CD3+CD8+/PBL差异不显著;CD3+CD4+/PBL于第7 d时A、B和对照组显著高于C组(p<0.05);CD3+CD4+/CD3+CD8+于第7 d、14 d时A、B和对照组显著高于C组(p<0.05),并且C组CD3+CD4+/CD3+CD8+显著降低(p<0.05);NSI于第3 d、7 d时A与B组显著高于C组(p<0.05),而C组显著高于对照组(p<0.05);SSI于第3 d、7 d时A组显著高于B与C组(p<0.05),而B与C组显著高于对照组(p<0.05);IFN-γ含量由高至低依次为:A、B、C和对照组,并且于第3 d、7 d时差异显著(p<0.05)。研究结果表明,HCLV细胞毒引起机体CD3+CD8+相对更快速增殖,而HCLV脾淋毒引起机体CD3+CD4+相对更快速增殖及NSI、SSI、IFN-γ浓度更高,脾淋毒与细胞毒可能侧重不同的免疫分子途径发挥免疫保护效力;兔脾淋组织液对NSI和IFN-γ浓度具有增强作用。

不同蛋白酶的猪、兔骨酶解液对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的比较

以鲜猪骨、鲜兔骨为原料,采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶分别进行酶解制备猪、兔骨胶原蛋白肽。以小鼠脾淋巴细胞的增殖率为指标,通过单因素实验及正交实验得到最佳的酶解条件。结果表明:酶解猪骨的最佳酶为Alcalase碱性蛋白酶,酶解条件为时间4 h、pH 9.5、酶与底物比6 000 U/g、温度45℃、底物蛋白质量分数6%,其酶解液的脾细胞增殖率为83.41%;酶解兔骨的最佳酶为木瓜蛋白酶,酶解条件为4 h、pH 5.5、酶与底物比7 000 U/g、温度65℃、底物蛋白质量分数6%,其酶解液的脾细胞增殖率为80.70%。

WHBE兔脾虚型肠易激综合征模型舌象病理组织形态学观察

目的观察脾虚型肠易激综合征模型WHBE兔活体舌象和舌组织病理形态学的变化。方法采用湿热应激复合番泻叶致脾虚型肠易激综合征兔模型,观察造模及自然恢复后WHBE兔和日本大耳白兔活体舌象和舌组织病理形态学的变化。结果与正常对照组比较,脾虚型肠易激综合征模型兔舌色淡红,舌质嫩;背隆起前后固有层乳头密度明显降低(P<0.01),基底层核分裂相频数减少(P<0.01),舌下角质层和上皮层厚度均明显增厚(P<0.01),且角质层/上皮层比值明显增加(P<0.01),且WHBE兔菌状乳头密度显著降低(P<0.05);自然恢复10d后,自然恢复组实验兔背隆起前后固有层乳头密度仍显著低于正常对照组(P<0.01),舌下角质层厚度明显大于正常对照组(P<0.05),且WHBE兔的上皮层厚度显著高于正常对照组(P<0.05),日本大耳白兔角质层/上皮层比值显著高于正常对照组(P<0.05)。结论脾虚型肠易激综合征可能与机体营养、代谢相关。

兔脾脏成纤维型细胞RS-17系的建立及其生物学特性

采用胰酶消化法培养技术,对乳兔脾脏组织的细胞进行原代培养,从脾脏组织中分离出1株成纤维型细胞,命名为RS-17。通过对细胞传代培养条件优化,细胞标志性蛋白检测,细胞生长曲线分析,细胞核型以及细胞致瘤性等测定,结果显示,RS-17细胞具有血清依懒性,成纤维细胞标志性蛋白检测阳性,具有正常的核型,无致瘤性,且目前细胞传至95代仍可稳定生长。这为RHDV(兔出血症病毒)感染机制等相关研究提供了细胞材料。

脾虚证IBS模型WHBE兔血浆环核苷酸水平的变化

目的观察脾虚型肠易激综合征(IBS)模型WHBE兔环核苷酸水平的变化。方法取WHBE兔和日本大耳白兔各18只,分别随机分成两组,即正常对照组6只,模型对照组12只,采用湿热应激加灌服番泻叶煎剂的方法造成脾虚证肠易激综合征(IBS)兔模型,其中模型对照组造模后处理6只,剩余兔自然恢复10 d,观察实验兔的血浆环核苷酸水平的变化。结果与正常对照组比较,WHBE兔模型对照组血浆cAMP和cGMP水平均显著升高(P<0.05,P<0.01),且自然恢复10 d后血浆cAMP和cGMP水平仍高于正常对照组(P<0.05,P<0.01);日本大耳白兔模型对照组造模后及自然恢复10 d后血浆cAMP和cGMP水平略有所升高,但差异均不显著(P>0.05);且模型对照组和自然恢复组cAMP/cGMP比值均略低于正常对照组,但差异不显著(P>0.05)。结论本实验脾虚证IBS模型兔的血浆环核苷酸水平随阴阳盛衰而变化,具有双重特点:既有阴虚特点,又有阳虚特点,且WHBE兔更适合于脾虚证IBS模型研究理想的实验动物。

经脾种植VX2瘤株悬液建立兔肝转移瘤模型

目的探讨经脾种植VX2瘤株构建肝转移瘤(LM)模型的可行性及能否成为LM临床和基础研究的理想动物模型。方法选取40只新西兰大白兔。制备VX2瘤株悬液。经左上腹切口将脾脏牵拉出腹腔,用1mL注射器将瘤株悬液注入脾脏,注射后将脾脏纳入腹腔,逐层缝合。2周后行上腹部增强CT扫描,观察LM模型肝内影像学表现。将兔处死行大体解剖,观察LM在肝内分布。对LM脱水、固定后行苏木精-伊红(HE)染色,观察其镜下表现。结果40只兔VX2肝转移瘤模型成功种植37只,种植成功率为92.5%。1只兔种植中麻醉死亡,1只未种植成功,1只CT增强扫描时死亡。37只兔上腹部增强CT扫描显示肝内转移瘤强化,周边呈环形强化,中心区未见强化,与临床上常见消化道LM增强CT表现一致;大体解剖显示肝内各叶有大小不等多发LM,分布无明显特点,与临床上肿瘤经门静脉途径转移至肝脏的特点一致;镜下见LM中心区为坏死细胞,外周区表现为浓染的肿瘤细胞、炎性细胞等。结论经脾种植VX2瘤株悬液可成功建立兔LM模型,脾脏转移至肝脏的转移瘤更符合临床上消化道肿瘤经门静脉途径转移至肝脏模式。该模型值得在临床和基础研究中推广。

电针调节外周白细胞作用与脾脏血窦基膜小孔形态的关系

目的:探讨脾脏参与电针降低外周血白细胞的过程。方法:雄性家兔40只,随机分为正常组(n=10)、造模组(n=15)、电针治疗组(n=15)。模型组与电针组家兔耳缘静脉注射大肠杆菌培养液复制白细胞增多模型,每天从耳缘静脉采血,测量外周血白细胞计数,造模后每天对电针组进行电针治疗。正常组不予处理。处死前麻醉动物,开腹,制作脾脏的扫描电镜标本,扫描电镜下观察脾血窦基膜小孔口,拍摄数码照片,利用显微图像分析软件计算脾血窦基膜小孔口的直径,面积和周长。结果:电针组白细胞数较模型组恢复快(P<0.01),电针组家兔脾血窦基膜小孔等效直径、面积和周长均小于模型组(P<0.01)。结论:当白细胞计数升高时,电针有助于白细胞计数下降至正常水平,该作用是通过脾脏实现的。

细菌廓清功能在兔微波保脾手术的实验研究

目的 探讨微波在兔保脾手术对抗感染的应用价值。方法 微波行兔脾部分切除 (PSM )术后细菌廓清功能与假拟手术 (SO)、全脾切除 (TS)比较。结果 PSM与TS比较 ,10min、2h及 4h菌落差异均有非常显著性(P <0 0 1) ;1h差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;PSM与SO比较 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;SO与PSM做细菌廓清功能 4 8h内无死亡。结论 微波行兔脾部分切除术有较好的抗感染能力 ,并可能预防切脾后暴发性感染的发生。

不同蛋白酶的兔骨酶解液对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用

目的:分别选用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和Alcalase碱性蛋白酶水解兔骨粉,研究兔骨酶解液对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用。方法:通过正交实验用MTT法检测酶解液对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用以筛选得到最佳的酶解条件。结果:胰蛋白酶酶解最佳条件为时间5h、pH8.5、酶与底物比6000U/g、温度50℃、底物蛋白浓度6%;木瓜蛋白酶酶解最佳条件为时间4h、pH5.5、酶与底物比7000U/g、温度65℃、底物蛋白浓度6%;Alcalase碱性蛋白酶酶解最佳条件为时间5h、pH9、酶与底物比6000U/g、温度50℃、底物蛋白浓度6%。其中,木瓜蛋白酶酶解兔骨制得的酶解液对小鼠脾淋巴细胞增殖作用最强,其增殖率为95.70%,胰蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶对小鼠脾淋巴细胞增殖率分别为88.49%、69.22%。结论:三种不同蛋白酶酶解兔骨,其酶解产物对小鼠脾淋巴细胞都有增殖作用。

中药制剂产后康复宁的药理研究

应用ＬＭＳ－２Ｂ二道生理记录仪及配套装置，通过免疫器官重量法和鸡红细胞（ＣＲＢＣ）作免疫原的溶血素（ＩｇＭ）测定法及体内抑菌试验法，观测了中药制剂产后康复宁对家兔离体、在位子宫和小鼠免疫功能的影响，以及对感染大肠杆菌Ｋ８８小鼠的保护作用。结果表明，产后康复宁可使兔离体子宫收缩频率显著增加（Ｐ＜０．０１），张力显著增强（Ｐ＜０．０１），振幅显著增高（Ｐ＜０．０１）；与麦角相比，仅５ｍｉｎ相同时间的子宫收缩频率差异明显（Ｐ＜０．０５），其余相同时间子宫收缩频率、张力、振幅均无明显差异（Ｐ＞０．０５）。使在位子宫收缩频率明显增加（Ｐ＜０．０５），张力明显增强（Ｐ＜０．０５），振幅明显增高（Ｐ＜０．０５）；与麦角比较，子宫收缩频率、张力、振幅在５、１０ｍｉｎ相同时间内差异均不明显（Ｐ＞０．０５）。对免疫功能的影响，不但使小鼠脾脏显著增重（Ｐ＜０．０１），而且溶血素明显增多（Ｐ＜０．０５）。对感染大肠杆菌Ｋ８８的小鼠有明显的保护作用（Ｐ＜０．０５）。提示产后康复宁有增强子宫收缩，促使宫内恶露排除，加速子宫复旧，增强机体免疫功能等作用。

兔肝细胞的脾脏移植和定位初步研究

【目的】探讨肝细胞体内移植的途径和定位分析。【方法】从新西兰白兔的肝脏中分离获得原代肝细胞，经纯化培养后经脾动脉插管或注射移植到脾脏，在不同时间注射肝细胞特异性增强剂（扎贝葡胺），观察移植后脾脏核磁信号的变化和移植肝细胞的存活，并分析细胞移植前后肝功能变化。【结果】肝细胞移植入脾脏一段时间后受损肝功能明显改善。脾脏内可见肝细胞信号，d，信号最强，以后逐渐衰退并持续14d以上。【结论】肝细胞脾内移植是可行的；应用肝细胞增强剂进行MRl分析可成为肝细胞移植无创伤检测手段。

脾虚症家兔胃、肠、肝、脾超微结构与微量元素含量

用能量色散ｘ射线分析仪（ＥＤＡＸ）、电镜对脾虚症模型家兔进行了超微结构和微量元素研究。结果为：扫描电镜下脾虚症模型家兔胃肠有不同程度的器质性变化，透射电镜下胃、肝、脾主要表现为线粒体肿胀，嵴大部分或全部破坏，有的甚至空泡变性，内质网脱落等超微结构变化。ＥＤＡＸ测定发现胃、肠、肝、脾组织中Ｃｕ、Ｆｅ、Ｚｎ３种元素量变明显。因此，认为脾虚时胃、肝、肠、脾组织线粒体的病理变化可作为其形态学依据，而微量元素Ｃｕ、Ｆｅ、Ｚｎ的变化或许是脾虚症发生的物质基础。

福建黄兔免疫功能低下模型的建立

为了探索一种简便易行、具有良好应用性并适用于中医药领域免疫功能低下的动物模型,以为福建黄兔提供一种新型实验动物的实验依据。实验采用氢化可的松为细胞免疫抑制剂,6个实验组,其中1个对照组,5个剂量组(分别每天20、25、30、35、40mg/kg),采用流式细胞检测法测CD4、CD8细胞含量,并通过摘取脾脏的方式计算脾脏指数。实验结果显示:B、C剂量组(分别每天25、30mg/kg)的福建黄兔在注射药物前后CD4、CD8细胞含量呈现明显的下降趋势,证实上述2个剂量组是福建黄兔免疫功能低下模型造模的较好剂量;同时,A～E剂量组的黄兔脾脏相较于对照组均呈现不同程度的缩小,脾脏指数降低,B、C、D组与对照组差异显著,反映其免疫功能受损,其中尤以C剂量组(30mg/kg)下降最为明显。由此可见,C剂量组是本实验中免疫功能低下动物模型造模的最适宜剂量。

几种止血材料对兔实质脏器创伤止血性能的比较

目的评价明胶海绵、可吸收止血纱布、复合生物海绵和速效止血粉对兔肝、脾损伤的止血效果及周围组织反应。方法将正常状态下和肝素抗凝后的兔的肝和脾脏前端约1.0cm长的组织剪去,建立实质脏器活性出血模型,分别用不同的止血材料压敷创面,考察两种状态下创面的出血时间和出血量,取与敷料接触的肝组织进行病理分析。结果在正常状态下,明胶海绵、复合生物海绵、止血纱布和速效止血粉对肝损伤的止血时间分别为(6.28±1.45)min(、6.19±1.04)min(、5.09±1.03)min和(4.07±0.84)min,与普通纱布对照组(9.89±0.75)min相比差异有显著性意义(P<0.01);肝素抗凝后,各组的止血时间明显延长,特别是明胶海绵和止血纱布组。病理结果表明速效止血粉对肝创面组织造成热损伤。结论复合海绵和速效止血粉显示出较明胶海绵和止血纱布更好的止血效果,尤其是在肝素抗凝的情况下。但鉴于速效止血粉的热损伤和不易于清除,应限用于威胁生命的急救止血。

捏脊疗法对脾虚证家兔血清胃动素的影响

目的观察捏脊疗法对脾虚证家兔血清胃动素(motilin,MOT)的影响。方法采用腹肌注射利血平法制作家兔脾虚证模型。将32只家兔随机分为空白组、模型组、捏脊组与四君子汤组,每组8只,空白及模型组予胃管灌喂蒸馏水,捏脊组予捏脊疗法,四君子汤组予胃管灌喂四君子汤处理。采用放免分析法测定血清MOT的含量。结果造模后家兔血清MOT的含量均明显升高,与空白组比较有统计学意义(P<0.01);治疗后,捏脊组与四君子汤组家兔血清MOT的含量明显降低,与模型组比较有统计学意义(P<0.05),两组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论捏脊疗法与四君子汤均可使脾虚证家兔血清MOT含量明显降低而发挥治疗作用,且作用相当;考虑小儿服药不便,小儿脾虚证可选择捏脊疗法治疗。

兔脾淋组织液增强猪瘟细胞苗免疫抗体效价的试验

采用1％健康兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗分别免疫10日龄经猪瘟乳前免疫的仔猪和经60。65日龄采用细胞苗二免的120日龄中猪，与生理盐水稀释组对照，免疫后15d采血检测抗体（IHA法）。二次试验结果表明：用兔脾淋组织液稀释猪瘟细胞苗免疫猪比用生理盐水稀释猪瘟细胞苗免疫猪可产生更高的保护性抗体效价，两者的差异均极显著（P〈0．01）。