冬凌草愈伤组织诱导及细胞培养的研究

用组织培养、细胞悬浮培养和单细胞平板培养技术，诱导出冬 凌草愈伤组织，并探讨 了细胞悬浮培养时间、培养方法和接种密度对冬凌草单细胞平板培养植板率的影响。结果表 明：从冬凌草叶和嫩茎诱导愈伤组织，以 MS+2，4D 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L 培养基较好 ，愈 伤组织诱导率高达 96.80%。用普通单细胞平板培养法培养冬凌草单细胞的植板率很低，而 以悬浮培养 15～18 d 的单细胞为材料，接种密度为 5×103个/毫升时，进行条件培养 和 看护培养，植板率达 21.63%。本研究结果可供利用细胞培养技术筛选冬凌草高产冬 凌草素细胞株时参考。

冬凌草中总黄酮提取工艺研究与含量测定

目的研究冬凌草中总黄酮的提取工艺并测定总黄酮的含量。方法采用正交实验进行提取工艺的优选。紫外分光光度法测定总黄酮的含量。结果采用最佳提取工艺测定了不同部位不同产地的冬凌草中总黄酮含量,花中总黄酮含量最高,不同产地含量差别比较大。结论该方法简单、可靠、稳定、重现性好。

总序香茶菜和蓝萼香茶菜挥发油成分研究

利用气相色谱-质谱联用技术对总序香茶菜(RabdosiaRacemosa(Hemsl)Hara)和蓝萼香茶菜(Rabdosiajaponica(Burm f)Haravar.galaucocalyx(Maxin)Hara)挥发油化学成分进行了研究,分别鉴定出46种和40种组分,所鉴定化合物的相对含量分别占其全油的84 77%和73 5%.用气相色谱面积归一化法测定了各成分的相对百分含量,其主要成分为酯类、烷类等.

不同植物激素对冬凌草愈伤组织增殖及褐化的影响

研究了不同种类的植物激素对冬凌草叶片诱导愈伤组织及褐化的影响,结果表明:培养基中植物激素的种类、浓度及其组合对愈伤组织增殖及褐变影响较大。适宜浓度的2,4-D、IAA和NAA生长素、KT和6-BA细胞分裂素及GA3,能不同程度地减轻或抑制褐化,促进愈伤组织的生长,其中以2,4-D(2.5)+KT(0.2)+GA3(0.2)效果最好。

氮碳源对冬凌草再生植株生长及次生代谢产物的影响

以冬凌草再生植株为研究材料,通过改变培养基中蔗糖浓度及NO3-/NH4+比例,研究冬凌草再生植株的生长状况及植株体内次生代谢物的积累规律.结果表明:3%蔗糖有利于冬凌草再生植株的生长和冬凌草甲素的积累,5%蔗糖有利于迷迭香酸的积累;NO3-/NH4+比例过高或过低均不利于再生植株的生长和次生代谢产物的积累,二者比例为2∶1时再生植株生长和次生代谢产物积累最佳.说明不同蔗糖浓度及NO3-/NH4+比例对冬凌草再生植株的生长和次生代谢物合成有明显的影响.

冬凌草离体培养体系的建立及主要次生代谢产物的测定

以冬凌草叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对冬凌草愈伤组织诱导及植株再生的影响,并对不同外植体(茎、叶)诱导愈伤、芽的分化能力及再生植株内主要次生代谢产物的含量进行了比较研究。结果表明:在MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培养基上诱导愈伤组织效果较好;在MS+2.0 mg/L 6-BA的培养基上诱导芽的效果较好;叶片和茎段在愈伤诱导培养基上均能产生大量的愈伤组织,但其再分化能力以茎段最好;再生苗生根培养基以0.3 mg/L IBA最好;以叶为外植体诱导的再生植株中冬凌草甲素、迷迭香酸的含量均高于以茎为外植体诱导的再生植株。

植物生长物质对冬凌草愈伤组织生长及褐化的影响

研究了不同种类植物生长物质对冬凌草愈伤组织生长及褐化的影响,结果表明:培养基中植物生长物质的种类、浓度及其组合对愈伤组织生长及褐变起着重要的作用;适宜浓度的生长素(2,4!D、NAA和IBA)、细胞分裂素(6!BA和KT)、GA3能不同程度地促进愈伤组织的生长,减轻或抑制褐化作用,其中以2 mg/L2,4!D+0.2 mg/LKT+0.5 mg/LGA3效果最好。

冬凌草的染色体数目及核型分析

利用Gimesa显带技术对冬凌草进行了染色体数目和染色体核型分析,研究结果表明:冬凌草染色体数目为2n=2x=24,相对长度组成为2n=2x=24=10M2+14M1,核型公式为K(2n)=2x=24=16m+8sm.所研究中,G-显带条纹数目虽然有限,但能准确的反映染色体结构特点,从而提高染色体识别的准确性和核型分析的精确性.从染色体水平初步推测冬凌草在系统演化上可能属于较原始的种类.

冬凌草的性状及显微鉴别

目的为鉴别和进一步研究开发冬凌草提供方法依据。方法采用石蜡切片法观察茎、叶的解剖结构,用水合氯醛透化法观察冬凌草茎叶粉末的显微特征,并观察其原植物和药材性状。结果描述了冬凌草的原植物和药材性状的特征,确定了其茎叶及粉末的显微鉴别特征。结论此研究结果可为冬凌草的鉴别和进一步开发利用冬凌草提供依据。

光质对冬凌草无菌苗生长及冬凌草甲素含量的影响

目的研究不同光质对冬凌草无菌苗生长及其中冬凌草甲素含量的影响。方法将冬凌草的种子在不同光质的培养箱中培养出无菌苗,观察无菌苗生长情况,并采用高效液相法测定其中冬凌草甲素的含量。结果无菌苗在白光下长势最好,叶片较多;在红光下无菌苗长势其次,株高增长最快;在黄光、绿光、蓝光条件下长势较差;黑暗条件下长势最差,植株发黄。不同光质下冬凌草甲素含量从高到低依次为:白光(0.155%)>红光(0.145%)>黄光(0.117%)>蓝光(0.035%)>黑暗(0.031%)>绿光(0.027%)。在白光和红光下培养的冬凌草无菌苗中冬凌草甲素含量显著高于其它光质下培养的冬凌草无菌苗。结论不同光质对冬凌草无菌苗的生长状况和冬凌草甲素的含量有很大影响,白光和红光有利于冬凌草无菌苗的生长和冬凌草甲素的积累。

HPLC法测定冬凌草药材中冬凌草甲素和迷迭香酸的含量

目的:建立冬凌草中冬凌草甲素和迷迭香酸的含量测定方法,为冬凌草质量标准的研究提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法测定不同产地冬凌草及不同部位中冬凌草甲素和迷迭香酸的含量。色谱条件为Phen-omsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)柱;甲醇-0.3%磷酸水溶液(40∶60)为流动相;冬凌草甲素、迷迭香酸的检测波长分别为238 nm、329 nm。结果:冬凌草甲素、迷迭香酸的平均加样回收率分别为97.1%、99.3%,RSD分别为2.8%、2.9%。结论:本方法精密度高,分离度良好,可用于测定冬凌草中冬凌草甲素和迷迭香酸的含量。

氮磷钾对冬凌草中迷迭香酸积累影响的研究

目的研究氮、磷、钾3种养分对冬凌草中迷迭香酸含量积累的影响。方法采用3因素2次饱和-D最优盆栽施肥试验设计,对冬凌草中迷迭香酸积累进行肥效研究。结果磷肥对迷迭香酸的积累作用最为显著,氮磷肥共同施用时可使冬凌草中迷迭香酸含量增加一倍。结论营养元素对冬凌草中代谢产物的积累中有明显的调节作用,合理施肥能够有效地调节代谢产物合成与积累。

冬凌草提取物脱色除杂方法的研究

在进行冬凌草规模化提取研究中,提取冬凌草甲素的同时还会夹杂大量色素及油脂类杂质,严重干扰冬凌草甲素的分离纯化。作者对脱色除杂方法进行了系统研究。采用大孔吸附树脂吸附、石油醚萃取、醇提水沉、活性炭回流、活性炭超声波5种方法进行研究与比较,确定出最佳脱色除杂方法为活性炭超声波。通过正交试验,确定出活性炭超声波的最佳工艺为:用占药材干重5%活性炭超声波提取2次,每次20min。

冬凌草的化学成分研究

目的研究冬凌草的化学成分。方法应用色谱层析、萃取、重结晶等方法对河南济源产冬凌草(Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara)的化学成份进行研究,应用波谱解析和理化方法对化合物进行结构鉴定。结果从冬凌草中分离得到11个化合物,分别鉴定为:牛尾草甲素(Rabdoternin A,1)、牛尾草丙素(Rabdoternin C,2)、lasiokaurin(3)、enmenol(4)、牛尾草乙素(RabdoterninB,5)、木栓酮(Friedelin,6)、乌苏酸(Ursolic acid,7)、5,8,4-三羟基-6,7,3-三甲氧基黄酮(5,8,4-tri-hydroxyl-6,7,3-tri-methoxyl-flavone,8)、苜蓿素(Tricin,9)、线蓟素(Cirsiliol,10)、胡麻素(Pedalitin,11)。

冬凌草高效液相指纹图谱研究

目的建立冬凌草高效液相指纹图谱的测定方法。方法采用Phenomsil C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.5%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,柱温25℃,检测波长238 nm,记录时间65 min,对10批冬凌草药材的指纹图谱进行研究,并采用夹角余弦和相关系数进行相似度评价。结果以11个共有峰为评价指标,精密度和重复性实验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于5%,多数冬凌草药材相似度较好,个别药材有一定的质量差异,并利用对照品对其中的冬凌草甲素进行了标记。结论此方法精密度、稳定性和重复性好,作为鉴定和评价冬凌草药材质量的依据是切实可行的。

Pb胁迫对冬凌草叶片光合色素合成和生物量的影响

目的：研究Pb胁迫对冬凌草叶片光合色素含量动态变化和生长影响,为冬凌草种植地选择和生长调控提供依据。方法：Pb浓度（135、270、540 mg/L）、胁迫时间（20、35、50 d）分株水培试验,以叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素、生长速率、生物量和植株Pb质量分数为指标,用分光光度计测定光合色素含量、等离子发射光谱仪测定植株Pb质量分数。结果：不同浓度Pb胁迫20~35 d冬凌草叶绿素和类胡萝卜素含量震荡变化;50 d时,叶绿素含量在中低浓度Pb胁迫下高于对照,高浓度下显著低于对照,类胡萝卜素含量无显著差异。结论：中低浓度Pb促进冬凌草叶绿素合成,高浓度Pb通过生物富集抑制叶绿素合成,使生长受限。

氮、磷、钾对冬凌草产量及冬凌草甲素的影响

目的:研究氮、磷、钾对冬凌草产量及品质的影响。方法:采用三因素二次饱和-D最优设计盆栽施肥试验。结果:氮、磷、钾肥对冬凌草生长、产量和质量有明显作用。结论:氮肥对冬凌草的生长影响较大,钾肥对冬凌草甲素的积极作用显著,氮、磷、钾肥配合施用,可使冬凌草增产,同时可提高其有效成分含量。

4种香茶菜属植物微性状特征研究

目的研究香茶菜及同属植物微性状鉴别特征。方法采用500万像素电子摄像目镜,应用景深合成技术合成微性状鉴别图片,观察4种香茶菜属植物的新鲜及干燥叶片的微性状特征。结果在叶尖突起程度、毛茸的长短与分布方面,4种香茶菜属植物叶片的微性状有明显不同:岐伞香茶菜和显脉香茶菜密被较长毛茸,叶尖极度突起或明显突起;香茶菜和大萼香茶菜稀被较短毛茸,毛茸多分布在叶脉、叶缘,叶尖微凹或突起。结论微性状鉴别方法简便,可以区别香茶菜属不同植物。

冬凌草甲素的提取工艺研究

目的 采用近红外光谱 ( NIR)技术对冬凌草中冬凌草甲素的提取工艺进行研究。方法 采用柱色谱法分离冬凌草甲素 ,应用 NIR技术寻找最佳工艺条件。结果 此工艺所得冬凌草甲素纯度较高 ,且样品与对照品的HPL C峰保留时间相同 ,NMR和 IR图谱相同。结论 本法洗脱速度快 ,安全、成本低、方便 ,并且重现性好。

大孔树脂脱除冬凌草提取物中色素的工艺研究

目的:探索大孔树脂脱除冬凌草提取物中色素的可行工艺。方法:以冬凌草中叶绿素的含量为指标,采用静态吸附-解吸和动态吸附-解吸实验,对5种树脂的脱色效果、脱色条件、树脂再生方法进行比较和筛选。结果:确定HZ-803为脱色用树脂,乙酸乙酯作为洗脱剂。在吸附流速为3 BV.h-1,解吸流速为5 BV.h-1,脱色率可达90%,经过15次循环使用,脱色率仍在70%以上。结论:HZ-803大孔吸附树脂对冬凌草提取物中色素具有良好的吸附和解吸性能。