用酶标ABC法在石蜡切片上检测狂犬病毒

应用抗狂犬病毒单克隆抗体和酶标ABC法，在受CrS攻击的小鼠脑石蜡切片中进行狂犬病毒的免疫组化染色。结果显示被染色的病毒抗原主要位于神经原的胞浆、轴突和树突中，形状为棕色细颗粒，几乎充满整个胞浆。在脑不同部位中，阳性细胞可呈散在型、局灶型和带状型分布。文中讨论了用本法检验狂犬病毒的优点以及在基层医院开展的脑行性。

狂犬病病毒实验室检测方法研究进展

狂犬病病毒(RV)属于人畜共患的急性直接接触性传染病病毒,近年来又有感染上升的趋势。因此,急需一种快速、准确、灵敏的检测RV的实验室诊断方法。现就酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光抗体方法(FAT)、快速荧光抑制灶技术(RFFIT)、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、荧光定量RT-PCR,环介导等温扩增技术(LAMP)和基因芯片技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述,为更好地开展实验室诊断提供参考。

应用免疫酶组化技术检测狂犬病毒的方法学探讨

目的:比较常规石蜡切片HE染色和免疫酶组化ABC法检测狂犬病毒的灵敏度。方法:在已感染狂犬病毒的10只小鼠脑组织石蜡切片上,分别用HE染色和免疫酶组化ABC法检测狂犬病毒。结果:HE染色仅在4只小鼠脑组织神经细胞胞浆内找到代表狂犬病毒抗原的内基氏小体,阳性率为40%;免疫酶组化ABC法检测10只小鼠脑组织均见内基氏小体,其阳性率为100%,明显高于HE染色法(P<0.05)。结论:用免疫酶组化ABC法检测狂犬病毒抗原比HE染色法未列举特异的事实敏感,提示用免疫酶组化ABC法检测可提高狂犬病毒诊断率。

狂犬病病毒免疫组织化学定位方法的建立

应用抗狂犬病病毒的特异性抗体及免疫组织化学方法检测接种了狂犬病病毒SRV-9毒株感染的小鼠脑组织,并对狂犬病病毒抗原进行了组织定位分析。结果表明:在小鼠的小脑分子层蒲肯野氏细胞胞浆出现明显的局灶型阳性颗粒。说明免疫组织化学方法检测狂犬病病毒敏感度高、直观,可作为诊断狂犬病病毒的辅助性方法,对研究狂犬病病毒在脑组织神经细胞及其他组织器官内的分布具有一定的意义。

狂犬病病毒RT-PCR检测方法的建立

为建立一种检测狂犬病病毒的方法,根据Gen Bank已公布的狂犬病病毒核蛋白N基因序列,设计并合成一对特异性的引物,以兽用疫苗株HEP-Flury为阳性毒株建立了RT-PCR检测方法。对建立的RT-PCR方法做灵敏度、特异性、重复性及稳定性试验,结果显示该方法的灵敏度可以达到20 FFU/m L,可以将狂犬病病毒与犬瘟热病毒和犬细小病毒区别开来。该方法重复性好,稳定可靠。

新城疫免疫组化方法的建立

目的:以SPF雏鸡为研究对象,新城疫中等毒力活疫苗,人工发病,利用免疫组织化学方法中的ABC(抗生物素-生物素-过氧化物酶复合物)法来检测。结果:在试验鸡组织切片中可见阳性染色,背景较清晰。结论:成功建立人工病例,在试验鸡组织中有NDV抗原分布。

浙江省丽水山区134份犬脑组织狂犬病病毒抗原检测

目的对浙江省丽水市山区犬脑组织标本进行狂犬病病毒抗原检测,了解犬狂犬病毒感染状况。方法收集丽水市山区狂犬病和疑似狂犬病犬以及外观健康犬脑组织标本134份,用直接免疫荧光试验(DFA)检测狂犬病病毒抗原,确定阳性标本。结果134份犬脑组织标本印片DFA检测9份为阳性,占所检标本的6.72%(9/134),其中外观异常并攻击人/犬导致人或犬间疫情的犬脑组织标本8份,均阳性;外观正常犬脑组织标本共126份,1份阳性,阳性率0.79%(1/126)。结论在丽水市首次用免疫学方法进行狂犬病病毒的实验室检测,狂犬病病毒在丽水山区狂犬病疫区的犬间相互传播,犬狂犬病疫情存在扩散的现象。