Tiam1和Rac1在食管鳞癌组织中蛋白表达的相关性及临床病理意义

目的:探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)的表达与食管鳞癌发生发展、浸润转移的关系.方法:62例食管癌手术切除标本于2006-02-26/03-16取自食管癌高发区河南省安阳市肿瘤医院.应用免疫组织化学SP法检测62例食管鳞癌组织、20例癌旁不典型增生组织及20例正常食管黏膜组织中Tiam1及Rac1蛋白表达.结果:食管鳞癌组织中Tiam1蛋白表达与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.779,7.680,4.502,4.987;均P<0.05);在食管鳞癌癌变过程中Tiam1蛋白表达在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为5.0%(3/20)、55.0%(11/20)、72.6%(45/62),组间比较有明显差异(χ2=20.643,P<0.05);Rac1蛋白表达也与癌的组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期均密切相关(χ2=8.652,6.884,8.276,6.371;均P<0.05);Rac1蛋白在正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及癌组织中的表达率依次增高,分别为25.0%(5/20)、70.0%(14/20)、70.0%(44/62),组间比较有明显差异(χ2=14.245,P<0.05).Tiam1及Rac1的表达呈正相关关系(γp=0.642,P<0.05).结论:Tiam1及Rac1可作为食管鳞癌早期诊断和判断预后的辅助指标.

Rac小G蛋白与中性粒细胞趋化研究进展

Rho家族小G蛋白(Rho Small GTPase)作为"分子开关",不仅调控细胞骨架,而且参与调节细胞周期、细胞运动、生长、黏附、基因转录和信号转导。Rac GTPase是其主要的家族成员之一,该文通过Rac GTPase影响中性粒细胞极化、黏附、跨膜、迁移及血管内皮细胞通透性调控中性粒细胞趋化,研究其在中性粒细胞介导的炎症过程中发挥的重要作用。

RAC1通过调节紧密连接蛋白1分布影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨小GTP酶Rac1(Rac family small GTPase 1,RAC1)对卵巢癌细胞迁移和侵袭的影响及机制。方法:构建pLKO.1-puro RAC 1 shRNA载体,包装慢病毒,感染卵巢癌细胞OVCAR3和SKOV3,并采用嘌呤霉素筛选;通过蛋白质印迹、细胞划痕和基质胶侵袭实验分别检测细胞中RAC 1敲减效率,细胞迁移和侵袭能力的改变;采用蛋白质印迹和免疫荧光染色观察细胞中紧密连接蛋白1(tight junction protein 1,TJP1)的表达和分布变化。结果:酶切电泳和测序结果均显示pLKO.1-puro RAC 1 shRNA慢病毒载体构建成功,蛋白质印迹结果证实感染RAC 1 shRNA慢病毒的OVCAR3和SKOV3细胞中RAC1蛋白水平较对照组明显下降(P<0.05)。细胞划痕和基质胶侵袭实验证实,RAC 1敲减后卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著下降(P均<0.01);蛋白质印迹结果显示RAC 1敲减后卵巢癌细胞中TJP1蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但免疫荧光染色表明TJP1由胞质内散在分布转变为细胞间连接处聚集分布,细胞间连接更加紧密。结论:RAC 1基因可能通过改变TJP1蛋白分布从而影响卵巢癌细胞的迁移和侵袭。

拟南芥Rac/Rop GEF1基因功能研究(英文)

[目的]对拟南芥Rac/RopGEF1(简称GEF1)基因在Rac/RopGTPse介导的生长素信号途径等方面所起的作用进行初步探索。[方法]利用实验室已构建的稳定表达的拟南芥GEF1基因启动子与GUS融合的转基因植株和GEF1基因过表达的转基因植株,通过GUS组织化学染色分析GEF1基因的表达模式,并对GEF1基因过表达植株的幼苗根系发育情况进行分析。[结果]GEF1基因主要在幼苗根的分生组织和维管组织细胞、侧根原基和根毛细胞表达;经生长素(NAA)诱导处理后,在上述细胞中的表达显著增强。过表达GEF1基因促进侧根的形成。[结论]GEF1基因的功能与根和根毛细胞的发育有关,GEF1基因可能参与对侧根发育的调控。

拟南芥Rac/Rop GEF7基因功能研究

[目的]对拟南芥Rac/Rop GEF7(简称GEF7)基因在Rac/Rop GTPse介导的生长素信号途径等方面所起的作用进行初步探索。[方法]利用实验室已构建的稳定表达的拟南芥GEF7基因启动子与GUS融合的转基因植株和GEF7基因过表达的转基因植株,通过GUS组织化学染色分析GEF7基因的表达模式,并对GEF7基因过表达植株的幼苗根系发育情况进行分析。[结果]GEF7基因主要在幼苗根的分生组织和维管组织细胞、侧根原基和根毛细胞表达;经生长素(NAA)诱导处理后,在上述细胞中的表达显著增强。过表达GEF7基因促进侧根的形成。[结论]GEF7基因的功能与根和根毛细胞的发育有关,GEF7基因可能参与对侧根发育的调控。

Tiam1和Rac1在宫颈鳞癌组织中的表达及临床病理意义

目的探讨T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)及RacGTP酶激活蛋白1(Rac1)的蛋白表达与宫颈鳞癌发生发展及浸润转移的关系。方法应用免疫组化S-P法检测46例宫颈鳞癌组织、21例宫颈上皮内瘤变组织及26例正常宫颈黏膜组织中Tiam1及Rac1蛋白表达。结果在宫颈鳞癌癌变过程中Tiam1蛋白表达在宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变组织及正常宫颈黏膜组织中的表达率依次降低,分别为56.5%(26/46)、28.6%(6/21)、7.7%(2/26),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌组织中Tiam1蛋白表达与宫颈鳞癌的组织学分级、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05);而Rac1蛋白在宫颈鳞癌组织、宫颈上皮内瘤变组织及正常宫颈黏膜组织中的表达率依次降低,分别为63.0%(29/46)、42.9%(9/21)、19.2%(5/26),组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌组织中Rac1蛋白表达与宫颈鳞癌的组织学分级、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。Rac1与Ti-am1的蛋白表达呈正相关关系(r=0.328,P<0.05)。结论 Rac1及Tiam1在宫颈鳞癌癌变过程中起着重要作用,联合检测Rac1及Tiam1的蛋白表达有望成为宫颈鳞癌早期诊断和判断预后的分子指标。

瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2在小鼠肝缺血再灌注损伤模型中的作用及机制

目的:观察瞬时受体电位阳离子通道亚家族M成员2(transient receptor potential cation channel subfamily M member 2,TRPM2)在小鼠肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)模型中的作用及可能的机制。方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、TRPM2腺病毒干扰载体预处理组(T组)和TRPM2腺病毒对照载体预处理组(C组)(均n=15)。取各组小鼠灌注前肝组织,采用荧光显微镜观察腺病毒感染效率,利用real-time PCR检测腺病毒对TRPM2的沉默效率。各组小鼠分别于再灌注2,4和8 h抽取腹主动脉血并获取肝组织,分别检测血清中谷丙转氨酶(alanine amino-transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate amino-transferase,AST)活性。采用HE染色观察肝组织病理学变化;蛋白质印迹法检测肝中TRPM2和Rac家族小GTP酶1(Rac family small GTPase 1,RAC1)蛋白质的表达量变化;并通过酶联免疫吸附试验检测肝中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性的变化。结果:与S组和M组相比,T组和C组小鼠肝组织可见大量绿色荧光。与S组、M组及C组相比,T组小鼠肝组织中TRPM2 mRNA的表达量显著降低(均P<0.05)。光镜下S组小鼠肝细胞形态正常;M组和C组小鼠肝窦扩张和淤血、肝细胞变性、小叶中央坏死及大量炎症细胞浸润;与M组和C组相比较,T组小鼠肝细胞受损程度明显减轻。与S组相比较,M组、T组及C组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05);与M组和C组相比较,T组小鼠血清中ALT及AST活性在再灌注2,4和8 h均显著降低(均P<0.05)。与M组和C组相比较,T组小鼠中SOD活性在再灌注2,4和8 h均显著升高(均P<0.05),而MDA和MPO活性均显著降低(均P<0.05)。T组小鼠肝组织中TRPM2和RAC1蛋白质表达量在再灌注2,4和8 h较M组和C组均显著降低(均P<0.05)。结论:TRPM2腺病毒干扰载体预处理能有效沉默小鼠肝组织中TRPM2基因表达,并能减轻HIRI,该机制可能与抑制氧化应激和降低RAC1蛋白质表达水平有关。

风湿性心脏病合并持续性心房颤动患者左心房内径增大对心房肌组织Ang Ⅱ/Rac1/STAT3途径表达的影响

目的探讨风湿性心脏病合并持续性心房颤动(房颤)患者左心房内径增大对心房肌组织纤维化程度以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/Rac GTP酶激活蛋白1(Rac1)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号途径表达水平的影响。方法选取2011年3～12月30例在我院行人工瓣膜置换术的风湿性心脏病患者,其中男16例、女14例,年龄42～70(56.9±6.8)岁。将10例窦性心律患者为作对照组(A组);合并持续性房颤20例患者为病例组,按左心房内径(LAD)分为两组,B组LAD 50～65 mm(n=10),C组LAD>65 mm (n=10)。术中建立体外循环后获取右心耳组织标本,采用HE及Masson染色,并辅以显微图像分析软件计算组织纤维化程度。酶联免疫吸附试验检测心房肌组织的AngⅡ浓度和蛋白印迹法检测心房肌组织Rac1、STAT3蛋白的表达。结果房颤患者左心房内径与对照组比较明显增大。随着左房内径增加,HE染色显示心肌细胞体积增大、数量减少,同时心肌细胞排列紊乱加重及细胞核大小不均一。此外Masson染色显示心房肌细胞周围胶原纤维沉积明显增加并分割包绕。心房肌组织中AngⅡ浓度、Rac1与STAT3蛋白表达水平随左心房内径增大表达水平增强,并与左心房内径呈正相关。结论风湿性心脏病合并持续性房颤患者,心房肌组织纤维化程度以及AngⅡ/Rac1/STAT3信号途径表达水平随左心房内径增大明显增强。