两个棉花Rac蛋白基因的克隆与表达分析

为研究棉花纤维起始和伸长的分子机理 ,在棉花纤维EST序列分析的基础上 ,从棉花纤维中扩增并克隆了 2个棉花Rac蛋白的cDNA基因 ,分别命名为GhRacA和GhRacB。GhRacAcDNA长 95 9bp ,推测的编码蛋白包含2 11个氨基酸。GhRacBcDNA长 92 0bp ,编码 195个氨基酸的蛋白。GhRacA和GhRacB蛋白均含有GTP/GDP结合和激活区域、Effector区和碱性氨基酸区。GhRacB的C末端有保守的异戊烯基化位点CSIL ,而GhRacA没有明显的异戊烯基化位点。序列比较分析表明 ,GhRacA和GhRacB是 2个新的棉花Rac蛋白。RT PCR分析表明 ,GhRacA和GhRacB在根、下胚轴、茎、叶和纤维中都有表达 ,但均在棉花纤维起始和伸长时期有优势表达 ,推测

小G蛋白Rac1在马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及意义

目的 :探讨马兜铃酸(AA)致肾小管上皮细胞损伤的机制及小G蛋白Rac1在此过程中发挥的作用。方法:以溶剂作为对照组,AA以浓度10μg/mL作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24 h后,WST-1法检测细胞增殖的抑制率;Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;细胞免疫荧光染色检测Ⅲ型胶原和Rac1蛋白的表达;real-time RT-PCR检测TGF-β1 mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Rac1和TGF-β1含量,并分析两者相关性。结果:AA可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并诱导细胞凋亡。AA以10μg/mL处理NRK-52E细胞24 h后,TGF-β1 mRNA的表达明显升高(P<0.05),并且细胞外基质成分Ⅲ型胶原的表达明显增加(P<0.05)。此外,AA也可诱导小G蛋白Rac1的表达(P<0.05)。相关分析显示,AA诱导NRK-52E细胞损伤过程中,Rac1的表达量与TGF-β1的分泌水平呈现明显正相关(r=0.967,P<0.01)。结论:AA诱导肾小管上皮细胞出现纤维化样改变,同时伴有Rac1蛋白的高表达;Rac1及其介导的信号通路可能被TGF-β1的高表达所活化,进而参与AA所致的胶原累积过程。

Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响

目的探讨Rac 1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达情况及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响。方法采用蛋白质印迹法(Western blot)检测59例卵巢浆液性腺癌组织、31例卵巢良性浆液性囊腺瘤组织和3 5例卵巢正常组织中Rac 1蛋白的相对表达量。筛选出抑制Rac 1蛋白表达效果最佳的载体,构建稳定转染细胞株SKOV3-Racli;采用细胞划痕实验检测SKOV3-Racli细胞的迁移能力。结果卵巢浆液性腺癌组织中Racl蛋白的相对表达量高于卵巢良性浆液性囊腺瘤组织和卵巢正常组织(P<0.05)。与阴性质粒比较,1号片段质粒的抑制率为12.59%,2号片段质粒的抑制率为56.48%,3号片段质粒的抑制率为73.68%。与野生型SKOV3组相比,SKOV3-Racli细胞组SKOV3-Racli细胞的迁移能力下降(P <0.05)。结论 Rac1蛋白对卵巢浆液性腺癌细胞迁移能力的影响可能与下调卵巢浆液性腺癌组织中Rac 1蛋白的表达有关。

Rac1和WAVE2蛋白在高脂饮食C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义

目的探讨Rac1和WAVE2蛋白在高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾小球中的表达及意义。方法 32只3周龄雄性C57BL/6J幼鼠随机分为正常饮食组和高脂饮食组,每组16只。分别给予标准饲料(脂肪含量10%)与高脂饲料(脂肪含量60%)喂养4周。HE染色和PAS染色观察小鼠肾脏的病理形态学改变;应用免疫组织化学技术及蛋白免疫印迹技术检测Rac1和WAVE2蛋白的表达。结果与正常饮食组相比,高脂饮食喂养的C57BL/6J幼鼠出现了肾小球系膜基质轻度增生以及渗出等病理改变。同时高脂饮食组小鼠肾小球Rac1和WAVE2蛋白的表达明显增强。结论 Rac1和WAVE2蛋白可能共同参与了高脂饮食诱导的C57BL/6J幼鼠肾小球的损伤。

热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达

目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态。用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响。结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%。转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制。GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平。结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化?

Rho蛋白家族的生物活性

近年来对Rho蛋白家族的研究进展很快 ,已发现有Rho ,Rac ,Cdc42三个亚家族共十余种。这些小分子量G蛋白具有GTP酶活性 ,在细胞的信号转导通路中起重要作用。在调节细胞骨架、细胞运动、细胞增殖、细胞凋亡、细胞转录、细胞转化、恶性肿瘤细胞的浸润和转移等方面发挥重要作用。

miR-509靶向Rac1调节人肝癌LM3细胞侵袭和迁移及裸鼠模型的存活

目的:探究微小RNA-509(miR-509)对人肝癌细胞生长、侵袭、迁移及荷瘤裸鼠存活的作用及其作用机制。方法:将miR-509模拟物(miR-509 mimic)和pcDNA Ras相关的C3肉毒毒素底物1(pcDNA Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, pcRac1)转染人肝癌LM3细胞,Western blot检测Rac1的表达;萤光素酶报告基因实验证明miR-509和Rac1的靶向关系;Transwell实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;采用皮下注射LM3细胞的方法建立肝癌裸鼠移植瘤模型,检测裸鼠存活率,Western blot检测肿瘤组织Rac1的表达。结果:miR-509 mimic能明显抑制LM3细胞Rac1的表达(P<0.05),pcRac1能明显减弱miR-509 mimic对Rac1表达的抑制作用(P<0.05);miR-509 mimic还能显著减弱Rac1野生质粒的萤光素酶活性(P<0.05);同时,miR-509 mimic可减少侵袭细胞数,抑制肝癌细胞迁移(P<0.05)。此外,miR-509过表达还能升高肝癌移植瘤模型小鼠存活率(P<0.05),降低肿瘤组织Rac1的蛋白表达水平(P<0.01)。结论:miR-509能通过靶向抑制Rac1的表达而抑制肝癌细胞侵袭和迁移,并促进肝癌模型小鼠存活。

透骨消痛胶囊对凋亡软骨细胞Rac1和Cdc42表达的影响

背景:透骨消痛胶囊治疗早、中期骨性关节炎有较好疗效,但作用机制尚未完全阐明。小GTP酶Rho能够抑制软骨细胞肥大分化,促进软骨细胞的凋亡。目的:观察透骨消痛胶囊对体外培养凋亡大鼠关节软骨细胞Rac1和Cdc42的影响,并初步探讨其防治骨性关节炎的作用机制。方法:采用4周龄SD大鼠膝关节软骨建立稳定的软骨细胞体外培养体系,采用甲苯胺蓝染色法对第3代软骨细胞进行鉴定。用20μg/L的肿瘤坏死因子α诱导体外培养软骨细胞的凋亡,诱导成功后,给予透骨消痛胶囊(500,100,20 mg/L)孵育24 h后,分别用MTT法检测各组软骨细胞的存活率,用流式细胞仪检测各组软骨细胞的线粒体膜电位情况,Western Blot检测各组软骨细胞Rac1,Cdc42,Bcl-2及Bax蛋白表达。结果与结论:透骨消痛胶囊能够减少肿瘤坏死因子α所致的软骨细胞凋亡,提高线粒体膜电位,提高细胞的存活率,同时能够下调Rac1,Cdc42,Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,差异均有显著性意义(P<0.05)。提示透骨消痛胶囊可能通过下调Rac1,Cdc42和Bax蛋白表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达,从而抑制软骨细胞的凋亡,而起到治疗骨性关节炎的疗效。

定向迁移细胞前沿Rac局部化激活的分子调控

提出构想:当α4胞内区域磷酸化而抑制其与paxillin结合时,paxillin、GIT1与PIX、PAK形成信号分子复合物.由于PIX为Rac的转换分子,PAK为Rac的效应分子,构成了paxillin-GIT1-PIX-PAK信号转导通路,从而促使Rac在细胞前沿持续地局部化激活,导致片状足的形成,产生细胞向前扩展推动力.研究结果表明,GIT1与paxillin、PIX在活细胞中均存在强烈的相互作用,且这种相互作用可发生在细胞前沿.由于Rac的转换因子PIX(PAK-interacting exchange factor)在活细胞中往往与PAK相伴而行,因而,在细胞前沿,必定存在paxillin-GIT1-PIX-PAK的信号转导通路.在纤粘蛋白(fibronectin)刺激下,整合素α4诱导Rac蛋白处于激活状态(GTP-bound).

Rac1在胶质瘤中的表达及其与胶质瘤细胞迁移、侵袭的关系

目的观察Rac1在胶质瘤组织中的表达,探讨其在胶质瘤迁移、侵袭中的作用。方法运用Western blot、RT-q PCR检测65例胶质瘤脑组织和8例正常脑组织中Rac1蛋白和m RNA表达。体外培养人胶质瘤细胞系U251,将细胞分为三组(空白对照组、Rac1抑制剂组、Rac1类似物组)。通过细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验检测三组细胞运动能力的变化。结果Rac1蛋白和m RNA在正常脑组织中弱或无表达,在胶质瘤组织中高表达,且分别与病理级别成正相关(r=0.956,r=0.857)。三组细胞中,Rac1类似物组的运动能力最强,Rac1抑制剂组最弱(P<0.05)。结论 Rac1在胶质瘤组织中的高表达与胶质瘤的迁移、侵袭密切相关,可作为一个反映胶质瘤运动能力和恶性程度的指标。

氧化型低密度脂蛋白通过下调TET2抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移

目的探讨TET2在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移中的作用及其机制。方法分别以0、25、50、75 mg/L ox-LDL孵育HUVEC 24 h,Western blot检测ox-LDL对HUVEC TET2表达的影响。噻唑蓝法检测TET2对ox-LDL处理的HUVEC增殖的影响;Transwell实验和划痕实验检测TET2干预对HUVEC迁移的影响;免疫荧光法检测TET2干预对HUVEC细胞骨架的影响;Western blot检测HUVEC总Rac1及磷酸化Rac1的表达。结果 ox-LDL呈浓度依赖性地下调TET2的表达。过表达TET2改善ox-LDL对HUVEC增殖和迁移的抑制,低表达TET2进一步抑制HUVEC增殖和迁移。免疫荧光结果表明,ox-LDL促进HUVEC周边致密带的形成,过表达TET2抑制致密带的形成,低表达TET2进一步加强致密带的形成。Western blot结果表明,ox-LDL抑制HUVEC Rac1蛋白的表达,过表达TET2上调HUVEC总Rac1及磷酸化Rac1的水平,低表达TET2进一步降低总Rac1及磷酸化Rac1的水平。结论 ox-LDL通过下调TET2的表达影响细胞骨架,从而抑制HUVEC的增殖和迁移。

Preliminary Characterization of Function of Rac /Rop GEF1 in Arabidopsis

[Objective]The aim was to research the function of AtGEF1 in Rac/Rop GTPses mediate auxin signal passway.[Method]Using the transgenic plants of AtGEF1 promotor fused with GUS reporter gene and the over-expression plants of Rac/Rop GEF1 under the control of 35S promoter as materials,which were constructed from our lab,the expression pattern of GEF1 was analyzed by GUS assay using histochemical staining,and the development of seedling roots of over-expression plant of GEF1 was observed.[Result]GEF1 expression was mainly detected in root meristem,root vascular tissue,lateral roots and root hair.Furthermore,the expression level of GEF1 was highly increased with the induction of NAA.Over-expression of GEF1 was observed to enhance lateral root formation.[Conclusion]GEF1 may be involved in the regulation of development of root and root hair,and it may have redundant function in the control of lateral root development.

公共数据库分析RACGAP1在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨Rac GTP酶活性蛋白-1(RACGAP1)基因在乳腺癌中的表达及临床意义。方法:检索Oncomine数据库中有关RACGAP1信息,对所获取的数据资料进行二次分析,对其在乳腺癌中的作用进行荟萃分析。通过GOBO数据库分析该基因在乳腺癌亚型中的表达情况。利用Kaplan-Meier Plotters数据库进行患者的生存周期分析。结果:Oncomine数据库中共收集了349项不同类型的研究结果,其中关于RACGAP1表达差异有统计学意义的研究共有74项,RACGAP1表达增高的有69项,表达降低的有5项。共有3项研究,10个数据集涉及RACGAP1在乳腺癌组织和正常组织中的表达,包括2776个样本。综合比较3项研究成果,发现RACGAP1在乳腺癌中的表达量高于正常组(P<0.05)。此外,通过GOBO数据库分析发现RACGAP1表达水平在激素受体(HR)敏感亚型、三阴性(TN)和HER-2亚型间有统计学差异(P<0.05)。不仅如此,RACGAP1表达量与乳腺癌患者总体生存率存在相关性,高表达者总体生存率较差,低表达者预后较好。结论:RACGAP1在乳腺癌组织中呈现高表达,且与乳腺癌预后有关,可为乳腺癌的药物开发和预后预测提供一定的理论依据。

小麦GTP结合蛋白TaRac3基因的克隆、功能域注释与表达载体构建

GTP结合蛋白是真核生物中一类信号开关分子,通过与GTP结合的活化状态和与GDP结合的非活化状态,参与调控多种信号传导通路和物质代谢。近年来,许多研究发现小G蛋白家族成员在植物细胞极性生长的生物学过程中具有非常重要的作用。为了研究GTP结合蛋白在小麦叶片表皮细胞极性分化中的作用,我们从小麦幼叶基部居间分生组织中克隆了一个尚未报道的小麦GTP结合蛋白基因,命名为Ta Rac3。为进一步验证该基因在表皮细胞发育过程中的生物学功能,我们利用生物信息学方法对该基因编码蛋白的保守结构域中的活性位点和羧基端多元基团区域的亚细胞定位信号进行了注释和分析,并进行了聚类分析。我们还构建了Ta Rac3基因的植物表达载体,并转入农杆菌细胞,为后期转化拟南芥进行生物学功能验证奠定了基础。

Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系

目的探讨Rac1蛋白表达与神经前体细胞增殖分化的关系。方法取新生大鼠大脑皮层,原代培养获得混合细胞培养体系,在含10%血清的培养基中培养6 d细胞汇合后更换无血清培养基继续培养。实验中设计4个时间点,用倒置相差显微镜观察细胞增殖分化的变化,免疫荧光染色技术鉴定细胞种类以及Rac1蛋白在细胞内的表达,通过Western blot检测Rac1蛋白的表达变化。结果建立了新生SD大鼠大脑皮层原代混合细胞培养体系,此体系底层主要是由Ⅰ型胶质细胞组成的单层细胞,GFAP染色呈阳性;在单层细胞上面有一些小圆形强折光性神经前体细胞生长,βⅢ-Tubulin染色呈阳性。更换无血清培养基后上层神经前体细胞大量增殖,βⅢ-Tubulin、Rac1染色呈阳性。Western blot定量分析结果显示,神经前体细胞增殖过程中Rac1蛋白表达上升,而分化过程中Rac1蛋白的表达下降。结论Rac1蛋白表达与神经前体细胞的增殖分化过程密切相关,可能参与了神经前体细胞的增殖分化过程。

Rac1蛋白调控表皮干细胞迁移促进创面愈合的研究

目的观察Rac1蛋白对表皮干细胞（ESC）迁移运动的调控作用，为完善创面愈合的基础理论以及指导临床应用提供参考。方法将慢病毒空载体FUGW单独和分别与Rac1蛋白抑制型突变体Rac1T17N、Rac1蛋白活化型突变体Rac1Q61L融合后转染入ESC，按照随机数字表法分为3部分进行如下实验。（1）将ESC分别接种于Ⅰ型胶原溶液（20μg／mL）、Ⅳ胶原溶液（20μg／mL）或纤连蛋白溶液（10μg／mL）包被的24孔细胞培养板，采用CytoTox 96比色试剂盒检测ESC对不同基质的黏附率。（2）选取上述黏附于Ⅳ型胶原的1000个ESC，四甲基异硫氰酸罗丹明标记的鬼笔环肽染色，激光扫描共聚焦显微镜下观察黏附细胞的形态延展并比较面积大小。（3）选用Transwell小室，上室加入ESC、下室中加入含基质细胞衍生因子1（SDF-1）的限定性角质形成细胞无血清培养液（以不加SDF—1的培养液为对照），倒置相差显微镜下观察ESC的趋化能力，结果以细胞迁移变化率表示。（4）将ESC接种于6孔细胞培养板孵育12h，加入含4μg／mL丝裂霉素c的培养液继续孵育2h，于单层贴壁细胞划痕，6、12h后统计剩余划痕宽度百分率。对数据进行t检验。结果与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC对Ⅰ型胶原的黏附率明显增加（t=5．302，P〈0．05），转染Rac1T17N的ESC对Ⅰ型胶原（t=13．741，P〈0．05）、Ⅳ型胶原（t=15．676，P〈0．05）及纤连蛋白（t=8．256，P〈0．05）的黏附率均明显下降。激光扫描共聚焦显微镜下观察，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC面积明显增大，细胞边缘有层板状伪足伸出；转染Rac1T17N的ESC面积显著缩小。在趋化因子SDF-1作用下，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率升高43．4％，转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降78．0％；无SDF—1作用时，与转染FUGW的ESC比较，转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降55．2％，转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率未见明显变化（升高1．7％）。划痕后6、12h，转染Rac1Q61L的ESC剩余划痕宽度百分率分别为（39±9）％、（6±5）％，低于转染FUGW的ESC[（43±5）％，t=1．027，P〉0．05；（18±7）％，t=4．389，P〈0．05]；划痕后6、12h，转染Rac1T17N的ESC剩余划痕宽度百分率分别为（81±9）％、（71±11）％，明显高于转染FUGW的ESC（t值分别为11．386、11．726，P值均小于0．05）。结论Rac1蛋白可通过影响ESC的黏附、延展以及趋化能力调控细胞迁移，并可能因此参与ESC促进创面愈合的进程。

Rac1蛋白调控乳腺癌MDA-MB-231细胞分泌血管内皮生长因子的研究

目的探讨Rac1蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞分泌血管内皮生成因子(VEGF)的调控作用。方法在乳腺癌MDA-MB-231细胞中分别转染Rac1正显性真核表达质粒(V12Rac1组)及空白对照质粒(空白对照组)和Rac1小干扰RNA(siRac1组)及对照小干扰RNA(沉默对照组)后,通过ELISA分别检测转染后24、48、72 h由MDA-MB-231细胞分泌的VEGF蛋白水平;通过Western blot检测各组血管生成相关因子p53和VEGF表达的变化。两组Western blot定量分析数据比较采用t检验,VEGF分泌数据采用重复测量的方差分析。结果 ELISA分析结果显示:当MDA-MB-231细胞中高表达Rac1时,细胞分泌的VEGF水平随着时间的延长而逐渐升高,与空白对照组相比组间差异有统计学意义(组间比较:F=837.122,P<0.001;不同时间点比较:F=57 806.374,P<0.001;交互作用:F=7 663.095,P<0.001);当MDA-MB-231细胞中低表达Rac1时,细胞分泌的VEGF水平随着时间的延长逐渐升高,但低于沉默对照组,差异有统计学意义(组间比较:F=511.891,P<0.001;不同时间点比较,F=268.078,P<0.001;交互作用:F=120.708,P=0.001)。Western blot结果显示,当MDA-MB-231细胞高表达Rac1,与空白对照组相比,p53蛋白表达降低(t=-6.392,P=0.003),VEGF蛋白表达升高(t=7.497,P=0.002);当MDA-MB-231细胞中低表达Rac1,与沉默对照组相比,p53蛋白表达增加(t=5.307,P=0.006),VEGF蛋白表达降低(t=-7.395,P=0.002)。结论在乳腺癌MDA-MB-231细胞中,Rac1表达高低可以引起细胞分泌VEGF的水平变化,Rac1可能通过抑制p53表达而增加VEGF表达。

含酰胺结构的大黄酸衍生物4a对卵巢癌细胞的 迁移、侵袭的影响

目的探讨含酰胺结构的大黄酸衍生物4a(简称衍生物4a,derivative 4a)对卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭能力的影响及可能作用机制。方法采用分子对接和Western blot检测衍生物4a对Rac1蛋白的调控作用,CCK-8、HE染色、Scratch和Transwell实验分别检测衍生物4a对SKOV3细胞增殖、形态学、迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测衍生物4a处理细胞后EMT的标志性蛋白Vimentin、β-cantenin、E-caderin、MMP-2、MMP-9的表达情况。结果衍生物4a能有效与Rac1蛋白结合,结合能明显低于大黄酸;且能下调SKOV3细胞Rac1蛋白的表达。衍生物4a能够明显抑制SKOV3细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞产生大量空泡化;衍生物4a可下调MMP-2、MMP-9表达,上调EMT上皮性标志蛋白E-caderin表达及下调Vimentin、β-cantenin的表达。结论衍生物4a能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭,其机制可能是靶向调控Rac1,抑制基质金属蛋白酶分泌,上调EMT过程关键分子E-caderin和下调Vimentin、β-cantenin的表达综合作用的结果。

小剂量氯胺酮对抑郁大鼠海马Rac1蛋白表达及树突棘密度的影响

目的探讨小剂量氯胺酮对抑郁大鼠海马Rac1蛋白表达及树突棘密度的影响。方法选取成年雄性SD大鼠60只,分为5组(n=12):对照组(C组)、抑郁组(D组)、氯胺酮组(DK组)、氯胺酮+NSC23766组(DKN组)和NSC23766组(DN组)。采用慢性不可预见性轻度应激法(CUMS)构建大鼠抑郁模型。C组大鼠不接受CUMS应激,腹腔注射生理盐水8mL/kg;其余4组大鼠CUMS处理完成后,D组大鼠行腹腔注射生理盐水8mL/kg;DK组大鼠腹腔注射氯胺酮10mg/kg;DKN组大鼠腹腔注射NSC237662.5mg/kg,5min后给予氯胺酮10mg/kg;DN组大鼠腹腔注射NSC23766 2.5mg/kg。糖水偏好实验和旷场实验用于行为学测试,Western blot检测海马Rac1、Tiam1、α-chimaerin蛋白表达,GST Pull-Down分析Rac1活性,高尔基染色观察脑片海马树突形态。结果CUMS处理后,与C组相比,D、DK、DKN、DN组大鼠的糖水偏好百分比、水平移动距离和直立次数均明显下降(P<0.05),但4组间差异无统计学意义;氯胺酮处理后,与D组相比,DK组糖水偏好百分比、水平移动距离和直立次数明显上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与C组相比,D组大鼠海马Rac1蛋白表达下调,活性降低,CA1区树突棘密度下降(P<0.05);与D组相比,DK组大鼠海马Rac1表达上调,活性升高,CA1区树突棘密度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论小剂量氯胺酮具有良好的抗抑郁效应,其机制可能与上调海马Rac1蛋白表达及活性,继而增加树突棘密度及改善突触可塑性有关。

强心颗粒通过调控Rac1/NOX/ROS轴抑制慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证大鼠心肌细胞凋亡研究

目的检测强心颗粒通过调控Rac1蛋白磷酸化抑制慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证活性氧(ROS)诱导心肌细胞凋亡的机制。方法应用多柔比星联合丙硫氧嘧啶(PTU)法复制病证结合心力衰竭大鼠模型;分为正常组、模型组、强心颗粒组以及强心颗粒+Rac1过表达组。干预4周后检测各组大鼠心肌总Rac1、磷酸化Rac1(P-Rac1)以及下游蛋白NOX2、NOX4的表达情况,对比各组心肌ROS含量、8-OHdG核染(+)比例、心肌细胞凋亡指数。结果正常组未死亡,模型组存活率为58.33%,强心颗粒组存活率为72.73%,强心颗粒+Rac1过表达组存活率为72.73%。ROS检测结果显示,模型组心肌细胞ROS荧光强度为34.44±1.63,强心颗粒组为18.39±1.50,强心颗粒+Rac1过表达组为26.23±2.01,强心颗粒组低于模型组(t=20.32,P<0.001),强心颗粒+Rac1过表达组高于强心颗粒组,t=10.04,P<0.01。免疫组化结果显示,模型组心肌细胞8-OHdG核染(+)比率为19.21±2.33,强心颗粒组为11.78±1.26,强心颗粒+Rac1过表达组为17.79±2.00,强心颗粒组低于模型组(t=8.07,P<0.001),强心颗粒+Rac1过表达组高于强心颗粒组,t=8.96,P<0.001。TUNEL检测结果显示,模型组心肌细胞凋亡指数为35.59±3.45,强心颗粒组为14.69±2.66,强心颗粒+Rac1过表达组为29.08±3.20,强心颗粒组低于模型组(t=15.37,P<0.001),强心颗粒+Rac1过表达组高于强心颗粒组t=11.04,P<0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,强心颗粒组心肌Rac1、P-Rac1、NOX2和NOX4表达水平均升高,而强心颗粒+Rac1过表达组心肌Rac1、P-Rac1、NOX2和NOX4表达水平均高于强心颗粒组,差异有统计学意义,均P<0.05。结论强心颗粒可显著减少心肌ROS含量,提高心肌Rac1、P-Rac1以及NOX2、NOX4表达水平,减少8-OHdG核染(+)心肌细胞比率,减少心肌细胞凋亡指数,心肌Rac1蛋白磷酸化是强心颗粒抑制ROS诱导的心肌细胞凋亡的重要调控机制,对慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证Rac1/NOX/ROS轴具有调控作用。